Sol Anterior İnen Koroner Arterin Kalıcı Ligasyonu ile Murine Miyokard Enfarktüsü Modeli

Miyokardiyal infraksiyonun bu minvazi modeli, koroner oklüzyondan lokal kalp dokusunda ve sistemik düzeylerde geç evre kalp yetmezliğine kadar meydana gelen patolojik süreçlerin izlenmesini sağlar. Bu yöntem şu anda kardiyak biyoloji ve fizyolojide kullanılan herhangi bir okuma ile uyumludur. Buna ek olarak, bu murine genetik modellerin büyük çeşitlilik yararlanır.

Yeterli cerrahi becerilerin edinimi ustalaşmak için zaman alabilir. Bu işlem en iyi deneyimli bir araştırmacı ile adım adım öğrenilir. Bu rüren modelinin görsel gösterimi, cerrahi prosedüre yardımcı olabilecek ve öğrenme sürecini hızlandırabilecek ipuçlarının paylaşılmasını sağlar.

Hızlı bir şekilde anestezi, 25-30 gram, erkek, C57-Siyah / 6 fare boğaz ve göğüs kafesi sol tarafında tıraş için bir elektrikli jilet kullanın. Parmak kıskacına yanıt eksikliğini doğrulayın. Merhemi hayvanın gözlerine uygulayın.

Fareyi bir ısıtma yastığının üzerine supine pozisyonunda yerleştirin ve gözlerin aşırı ısınmasını önlemek için başın altına küçük bir gazlı bez kompres yerleştirin. Uzuvları yapışkan bantla sabitleyin. Üst kesici dişlerin altında 5-0 ipek sütür bir döngü geçirin ve kanülasyon sırasında ağız açık tutmak için ısıtma yastığı üzerine döngü ekstremite güvenli.

Önceden tıraş edilmiş alanlara tüy dökücü krem uygulayın ve bir dakika pamuklu bezle hafifçe masaj yapın. Fazla kürk ve kremi gazlı bezle çıkarın ve maruz kalan cildi %0,9 tuzlu çözelti ve gazlı bez damlalarıyla temizleyin. Tıraş boğaz ve toraks steril gazlı bez parçaları uygulayın ve iodopovion ile gazlı bez ıslatın.

Ventilatörü kilogram başına yedi mililitrelik bir gelgit hacmine ve dakikada 140 vuruşluk bir havalandırma hızına ayarlayın. Fareyi mikrocerrahi stereo mikroskobun altında hareket ettirin. Boğazın merkezinde cilt tutulması, kaudal / sefalik hattı boyunca 0.5 santimetrelik bir kesi yapmak, ve tükürük bezinin lobları ayırın.

Gırtlak ve trakea görünene kadar sternohyoid kasının fasyasını nazikçe ayırmak için kavisli büşreler kullanın. Daha sonra elastik bantlara bağlı retraktörlerle açıklığın kenarlarını sabitlayın. Daha sonra, dili yavaşça yana doğru çekin ve 16 kalibrelik bir kanülün körelmiş iç iğnesini nefes borusuna yerleştirmek için forceps kullanın.

Boğaz kesisi yoluyla trakeaiçine doğru bir ekleme görselleştirin ve canülatörü ventilatöre bağlayın. Ameliyat sırasında dokuları ıslak tutmak için kesi üzerine iyodopovidone ile ıslatılmış gazlı bez ile takviye steril% 0.9 tuzlu yerleştirin. Sonra su içine egzoz tüpü yerleştirin.

Kabarcıkların varlığı başarılı bir entübasyon gösterir. Sol anterior inen koroner arter inen ligasyon için, veya LAD, dikkatle sağ tarafında dekübitus pozisyonuna fare hareket, ve yeni pozisyonda sol ön ekstremite yeniden güvenli. Sol pektoralis minör ve majör kaslar arasındaki çizgiyi belirleyin ve çizgi boyunca eğik bir santimetre lik deri kesisi yapın.

Künt diseksiyon mikro makas kullanarak, dokuları kesici olmadan pektoralis kaslarının fasya ayırmak, ve ayırma korumak için elastik bantlar bağlı retractors kullanın. Ventilatöre üç santimetre su pozitif bir son ekspiratör basıncı ayarlayın. Üçüncü ve dördüncü kaburga arasındaki üçüncü interkostal boşlukta göğüs boşluğu açmak için künt forceps kullanın.

Göğüs kafesi içine iki retractors yerleştirin, her kaburga bir, ve dikkatle kalp ve akciğerlere zarar vermeden perikard kaldırmak için kavisli ince forceps kullanın. LAD'yi, sol auricle'ın kenarından tepeye doğru uzanan yüzeysel parlak kırmızı bir çizgi olarak bulun. Sol atriin 2-3 milimetre altında LAD altında 7-0 ipek dikiş geçmek için bir iğne tutucu kullanın.

Kalp dokusunu yırtmamak için yavaşça ipek çekerek, üç düğüm ile ligatür kravat. Sol ventrikül alt sol kısmı hemen ligasyon üzerine soluk dönecek. Şimdi kaburga retractors bırakın, ve forceps ile üçüncü kaburga tutarak, üçüncü ve dördüncü kaburga altında 6-0 ipek dikiş ile iki geçiş yapmak.

Açılış üzerine 37 derece santigrat% 0.9 tuzlu çözelti üç damla yerleştirin ve düzgün akciğerleri şişirmek için iki veya üç solunum döngüleri için son kullanma egzoz tüpü kapatın. Sıkın ve iki atar ile dikiş güvenli, ve kasları tutan retractors serbest, kasların doğru anatomik konuma dönmek yardımcı. Sonra iki dikiş ve 5-0 dikiş ipek iki atar ile göğüs derisi kapatın.

5-0 dikiş ipek ve iki atar bir dikiş ile boğaz deri kapatın. İşlemin sonunda, bant bantlarını uzuvlardan çıkarın, hayvanı dikkatlice dekübiti kompres pedinin üzerine boşaltın ve hayvanın sağ tarafındaki ısıtma yastığına sıkıştırın. Intraperitoneally enjekte 0.3 mililitre 37 derece-Celsius% 5 glikoz çözeltisi ısıtılır.

Solunum cihazını durdurun. Fare kendiliğinden nefes alırsa, kanülleri dikkatlice çıkarın. Subkutan olarak buprenorfin kilogram başına 0.1 miligram enjekte.

Fareyi izleme ile en az bir saat boyunca %100 oksijenle havalandırılan 30 derecelik bir kafese yerleştirin. Ameliyatı takip eden iki ilk gün boyunca fareye yumuşak bir diyet ve su reklamı libitum verin, gerektiğinde hayvanı ısıtın. Ameliyattan yedi gün sonra iskemik alanlar trihenyltetrazolium klorür ile lekelenmemiş olarak kalırken, canlı doku dehidrogenaz varlığından dolayı kırmızı lekeler ekleri ile lekelenmez.

Iskemik alanlar daha sonra bir görüntüleme yazılımı programında sol ventrikül beyaz alan yüzdesi olarak hesaplanabilir. Miyofibroblastların sırasıyla önemli okumaları olan alfa-düz kas aktinve SMAD2 fosforilasyon ve büyüme faktörü beta sinyal aktivasyonu nun dönüştürülmesi için batı leke analizi, enfarktüs kalplerin miyokard dokusundaki fibrozisin derecesini belirlemek için kullanılabilir. Dönüşüm büyüme faktörü beta ve downstream hedef mRNA ekspresyonu gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyon analizi de miyokardfibrozvarlığını değerlendirmek için yapılabilir.

Pro-inflamatuar sinyal yolları ve pro-inflamatuar genlerin ekspresyonu genellikle miyokard infarktüsü takip eden ilk hafta içinde aktive olduğu bulunmuştur. pro-inflamatuar genlerin mRNA ekspresyonu ve monosit/makrofaj belirteçleri de gözlenmiştir. Ligasyon yüksekliği sağkalımı kritik ölçüde etkileyecektir ve LAD dallanma değişebilir gibi, her gerginlik veya genotip adapte edilmelidir.

Ligasyondaki sabitler tekrarlanabilir sonuçlar elde etmek için anahtardır. Bu prosedür herhangi bir analitik yöntem ile birleştiğinde olabilir ve fonksiyonel analiz, doku fiksasyonu, hücre kültürü, ya da ilgi herhangi bir teknik takip edilebilir.