Name: İmplant Yüzeylerinde M1 ve M2 İnsan Monosit Türevi Makrofajların Polarizasyonu ve Karakterizasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-12-06T13:20:00.000+00:00
Duration: 8 min 37 s
Description: Öğrenin, implant yüzeylerinde insan monosit türevi makrofajların M1 ve M2 polarizasyonunu karakterize etme yöntemini. qRT-PCR, ELISA ve CLSM teknikleriyle sitokin profilleri ve hücre yüzey belirteçleri analiz edilir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>İmplant Yüzeylerinin Makrofajlar Üzerindeki İmmünomodülatör Etkilerinin Değerlendirilmesi

<ol><li>Othman, Z., Pastor, B. C., van Rijt, S., Habibovic, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+interactions+between+biomaterials+and+biological+systems+using+proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Understanding interactions between biomaterials and biological systems using proteomics.</a> Biomaterials. 167, 191-204 (2018).</li>
<li>Ikada, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Challenges+in+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22J+R+Soc+Interface%22%5BJournal%5D)">Challenges in tissue engineering.</a> J R Soc Interface. 3 (10), 589-601 (2006).</li>
<li>Aamodt, J. M., Grainger, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix-based+biomaterial+scaffolds+and+the+host+response%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix-based biomaterial scaffolds and the host response.</a> Biomaterials. 86, 68-82 (2016).</li>
<li>Batool, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+immune-inflammatory+responses+through+surface+modifications+of+biomaterials+to+promote+bone+healing+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Tissue+Eng%22%5BJournal%5D)">Modulation of immune-inflammatory responses through surface modifications of biomaterials to promote bone healing and regeneration.</a> J Tissue Eng. 12, 20417314211041428(2021).</li>
<li>Mantovani, A., Biswas, S. K., Galdiero, M. R., Sica, A., Locati, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+plasticity+and+polarization+in+tissue+repair+and+remodelling%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Macrophage plasticity and polarization in tissue repair and remodelling.</a> J Pathol. 229 (2), 176-185 (2013).</li>
<li>Shrivastava, R., Shukla, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attributes+of+alternatively+activated+%28M2%29+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Attributes of alternatively activated (M2) macrophages.</a> Life Sci. 224, 222-231 (2019).</li>
<li>Gordon, S., Taylor, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monocyte+and+macrophage+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Monocyte and macrophage heterogeneity.</a> Nat Rev Immunol. 5 (12), 953-964 (2005).</li>
<li>Mosser, D. M., Edwards, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploring+the+full+spectrum+of+macrophage+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Exploring the full spectrum of macrophage activation.</a> Nat Rev Immunol. 8 (12), 958-969 (2008).</li>
<li>Murray, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+activation+and+polarization%3A+nomenclature+and+experimental+guidelines%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Macrophage activation and polarization: nomenclature and experimental guidelines.</a> Immunity. 41 (1), 14-20 (2014).</li>
<li>Kzhyshkowska, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+responses+to+implants%3A+prospects+for+personalized+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">Macrophage responses to implants: prospects for personalized medicine.</a> J Leukoc Biol. 98 (6), 953-962 (2015).</li>
<li>Browne, S., Pandit, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomaterial-mediated+modification+of+the+local+inflammatory+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Bioeng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Biomaterial-mediated modification of the local inflammatory environment.</a> Front Bioeng Biotechnol. 3, 67(2015).</li>
<li>Piatnitskaia, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modelling+of+macrophage+responses+to+biomaterials+in+vitro%3A+state-of-the-art+and+the+need+for+the+improvement%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Modelling of macrophage responses to biomaterials in vitro: state-of-the-art and the need for the improvement.</a> Front Immunol. 15, 1349461(2024).</li>
<li>Rayahin, J. E., Gemeinhart, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+macrophages+in+response+to+biomaterials%5BTitle%5D)+AND+%22Results+Probl+Cell+Differ%22%5BJournal%5D)">Activation of macrophages in response to biomaterials.</a> Results Probl Cell Differ. 62, 317-351 (2017).</li>
<li>Murray, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+polarization%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">Macrophage polarization.</a> Annu Rev Physiol. 79, 541-566 (2017).</li>
<li>Gordon, S., Pluddemann, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+macrophages%3A+heterogeneity+and+functions%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biol%22%5BJournal%5D)">Tissue macrophages: heterogeneity and functions.</a> BMC Biol. 15 (1), 53(2017).</li>
<li>Salma Iqbal, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+in+vitro+generated+human+polarized+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Cell+Immunol%22%5BJournal%5D)">Characterization of in vitro generated human polarized macrophages.</a> J Clin Cell Immunol. 6, 1-8 (2015).</li>
<li>Hotchkiss, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Titanium+surface+characteristics%2C+including+topography+and+wettability%2C+alter+macrophage+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">Titanium surface characteristics, including topography and wettability, alter macrophage activation.</a> Acta Biomater. 31, 425-434 (2016).</li>
<li>Wang, Y., Zhang, Y., Sculean, A., Bosshardt, D. D., Miron, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+behavior+and+interplay+with+gingival+fibroblasts+cultured+on+six+commercially+available+titanium%2C+zirconium%2C+and+titanium-zirconium+dental+implants%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Oral+Investig%22%5BJournal%5D)">Macrophage behavior and interplay with gingival fibroblasts cultured on six commercially available titanium, zirconium, and titanium-zirconium dental implants.</a> Clin Oral Investig. 23 (8), 3219-3227 (2019).</li>
<li>Abaricia, J. O., Shah, A. H., Ruzga, M. N., Olivares-Navarrete, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surface+characteristics+on+commercial+dental+implants+differentially+activate+macrophages+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Oral+Implants+Res%22%5BJournal%5D)">Surface characteristics on commercial dental implants differentially activate macrophages in vitro and in vivo.</a> Clin Oral Implants Res. 32 (4), 487-497 (2021).</li>
<li>Lu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+osseointegration+of+strontium-modified+titanium+implants+by+regulating+angiogenesis+and+macrophage+polarization%5BTitle%5D)+AND+%22Biomater+Sci%22%5BJournal%5D)">Improved osseointegration of strontium-modified titanium implants by regulating angiogenesis and macrophage polarization.</a> Biomater Sci. 10 (9), 2198-2214 (2022).</li>
<li>Murray, P. J., Wynn, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Obstacles+and+opportunities+for+understanding+macrophage+polarization%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">Obstacles and opportunities for understanding macrophage polarization.</a> J Leukoc Biol. 89 (4), 557-563 (2011).</li>
<li>Nascimento, C. R., Fernandes, N. A. R., Maldonado, L. A. G., Junior, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+monocytic+cell+lines+U937+and+THP-1+as+macrophage+models+for+in+vitro+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Rep%22%5BJournal%5D)">Comparison of monocytic cell lines U937 and THP-1 as macrophage models for in vitro studies.</a> Biochem Biophys Rep. 32, 101383(2022).</li>
<li>Freytes, D. O., Kang, J. W., Marcos-Campos, I., Vunjak-Novakovic, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+modulate+the+viability+and+growth+of+human+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biochem%22%5BJournal%5D)">Macrophages modulate the viability and growth of human mesenchymal stem cells.</a> J Cell Biochem. 114 (1), 220-229 (2013).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+type+modulates+osteogenic+differentiation+of+adipose+tissue+MSCs%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Macrophage type modulates osteogenic differentiation of adipose tissue MSCs.</a> Cell Tissue Res. 369 (2), 273-286 (2017).</li>
<li>Cerqueira, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+inflammatory+responses+to+sol-gel+coatings+with+distinct+biocompatibility+levels%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Mater+Res+A%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the inflammatory responses to sol-gel coatings with distinct biocompatibility levels.</a> J Biomed Mater Res A. 109 (9), 1539-1548 (2021).</li>
<li>Zhang, Y., Cheng, X., Jansen, J. A., Yang, F., van den Beucken, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Titanium+surfaces+characteristics+modulate+macrophage+polarization%5BTitle%5D)+AND+%22Mater+Sci+Eng+C+Mater+Biol+Appl%22%5BJournal%5D)">Titanium surfaces characteristics modulate macrophage polarization.</a> Mater Sci Eng C Mater Biol Appl. 95, 143-151 (2019).</li>
<li>Nobs, S. P., Kopf, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-resident+macrophages%3A+guardians+of+organ+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Immunol%22%5BJournal%5D)">Tissue-resident macrophages: guardians of organ homeostasis.</a> Trends Immunol. 42 (6), 495-507 (2021).</li>
<li>Sreejit, G., Fleetwood, A., Murphy, A., Nagareddy, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origins+and+diversity+of+macrophages+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Transl+Immunology%22%5BJournal%5D)">Origins and diversity of macrophages in health and disease.</a> Clin Transl Immunology. 9 (12), e1222(2020).</li>
<li>Parisi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+human+primary+macrophages+to+study+the+polarization+from+monocyte-derived+macrophages+to+pro-or+anti-inflammatory+macrophages+at+biomaterial+interface+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dent+Sci%22%5BJournal%5D)">Preparation of human primary macrophages to study the polarization from monocyte-derived macrophages to pro-or anti-inflammatory macrophages at biomaterial interface in vitro.</a> J Dent Sci. 18 (4), 1630-1637 (2023).</li>
<li>Feuerer, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+retrieval+from+3D+biomaterials%3A+A+detailed+comparison+of+common+dissociation+methods%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Macrophage retrieval from 3D biomaterials: A detailed comparison of common dissociation methods.</a> J Immunol Regen Med. 11, 100035(2021).</li>
<li>Shapouri-Moghaddam, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+plasticity%2C+polarization%2C+and+function+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Macrophage plasticity, polarization, and function in health and disease.</a> J Cell Physiol. 233 (9), 6425-6440 (2018).</li>
<li>Sridharan, R., Cameron, A. R., Kelly, D. J., Kearney, C. J., O'Brien, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomaterial+based+modulation+of+macrophage+polarization%3A+a+review+and+suggested+design+principles%5BTitle%5D)+AND+%22Mater+Today%22%5BJournal%5D)">Biomaterial based modulation of macrophage polarization: a review and suggested design principles.</a> Mater Today. 18 (6), 313-325 (2015).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>24 oyuklu plaka, işlem görmemiş</td><td>Corning Incorporated (Kennebunk, ABD)&nbsp;</td><td>144530</td><td></td></tr><tr><td>Absorbans okuyucu Sonsuz F50&nbsp;</td><td>TECAN Avusturya GmbH (Gr&ouml; dig, Avusturya)</td><td>TCAT91000001</td><td></td></tr><tr><td>DPBS'de Accutase, 0.5 mM EDTA</td><td>EMD Millipore Corp. (Burlington, ABD)</td><td>SCR005</td><td></td></tr><tr><td>Solmaya Karşı Floresan Montaj Ortamı -Su, Fluoroshield</td><td>abcam (Cambridge, İngiltere)</td><td>ab104135</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Rad MJ Research PTC-200 Peltier Termal Döngüleyici</td><td>Bio-Rad / MJ Research</td><td>7212</td><td></td></tr><tr><td>Sığır serum albümini (BSA)</td><td>VWR International bvba (Leuven, Belçika)</td><td>422361V</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj 5804 R</td><td>Eppendorf SE (Hamburg, Almanya)</td><td>5804 R</td> DC-SIGN (D7F5C) XP <td></td></tr><tr><td>Rabbit mAb</td><td>Hücre Sinyalizasyon Teknolojisi</td><td>13193</td><td></td></tr><tr><td>Dimetil sülfoksit</td><td>Sigma Aldrich Co. (St.Louis, MO, ABD)</td> <td>D2438-5X10ML</td><td></td></tr><tr><td>DRAQ5 Boyama Çözeltisi</td><td>Milteny Biotec (Bergisch Gladbach, Almanya)</td><td>130-117-344</td><td></td></tr><tr><td>Etanol & ge; Moleküler biyoloji için %99,8</td><td>Carl Roth GmbH + CO. KG (Karlsruhe, Almanya)</td><td>1HPH.1</td><td></td></tr><tr><td>Keçi Anti-Fare IgG (H& L) Yüksek Çapraz Adsorbe Edilmiş İkincil Antikor, Alexa Fluor Plus 488</td><td>İnvitrojen</td><td>A32723TR</td><td></td></tr><tr><td>Keçi Anti-Tavşan IgG (H + L) Çapraz Adsorbe Edilmiş İkincil Antikor, Cyanine3</td><td>Invitrogen</td><td>A10520</td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prizma</td><td>GraphPad</td><td>Sürümü&nbsp; 9.4.1</td><td></td></tr><tr><td>İnsan CCR7 Antikoru</td><td>R& D Systems</td><td>MAB197</td><td></td></tr><tr><td>İnsan IFN-gama Rekombinant</td><td>Invitrogen (Rockford, ABD)</td><td>RIFNG100</td><td></td></tr><tr><td>İnsan IL-13</td><td>Milteny Biotec (Bergisch Gladbach, Almanya)</td><td>5230901032</td><td></td></tr><tr><td>İnsan IL-4</td><td>Milteny Biotec (Bergisch Gladbach, Almanya)</td><td>130-095-373</td><td></td></tr><tr><td>İnsan M-CSF</td><td>Peprotech (Cranbury, ABD)</td><td>300-25</td><td></td></tr><tr><td>Leica TCS SP5</td><td>Leica Microsystems CMS GmbH (Mannheim, Almanya)</td><td>https://www.leica-microsystems.com/products/confocal-microscopes/p/leica-tcs-sp5/</td><td></td></tr> <tr>Escherichia <td>Sigma Aldrich Co.'dan (Missouri, ABD)</td> lipopolisakkaritlerL4391-1MG <td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Luna Universal qPCR Master Mix&nbsp;</td><td>New England Biolabs</td><td>NEB #M3003</td><td></td></tr><tr><td>LunaScript RT SuperMix Kiti</td><td>New England Biolabs</td><td>E3010L</td><td></td></tr><tr><td>Lenfosit Ayırma Ortamı 1077</td><td>PromoCell (Heidelberg, Almanya)</td><td>C-44010</td><td></td></tr><tr><td>MCP-4/CCL13 İnsan ELISA Kiti</td><td>Invitrogen</td><td>EHCCL13</td><td></td></tr><tr><td>MicroAmp Hızlı 96 Kuyulu Reaksiyon Plakası (0.1 mL)</td><td>Uygulamalı Biyosistemler (Waltham, ABD)</td><td>4346907</td><td></td></tr><tr><td>MicroAmp Optik Yapışkan Film</td><td>Yaşam Teknolojileri Şirketi (Carlsbad, ABD)</td><td>4311971</td><td></td></tr><tr><td>MicroAmp Sıçramasız 96 Kuyulu Baz</td><td>Uygulamalı Biyosistemler (Waltham, ABD)</td><td>4312063</td><td></td></tr><tr><td>Mikrolitre Santrifüj CD-3124R</td><td>Phoenix Enstrümanı (Almanya)</td><td>9013111121</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop Kapak Camları, 10 mm</td><td>Carl Roth GmbH, Karlsruhe, Almanya</td><td>4HX4.1</td><td></td></tr><tr><td>Monosit Bağlantı Ortamı</td><td>PromoCell (Heidelberg, Almanya)</td><td>C-28051</td><td></td></tr><tr><td>Multiply-Pro Gef&auml; &szlig; 0,5 mL, PP</td><td>Sarstedt AG & CO (N&uuml; mbrecht, Almanya)</td><td>7,27,35,100</td><td></td></tr><tr><td>Nanodrop One</td><td>Thermo Scientific (ABD)</td><td>ND-ONE-W</td><td></td></tr><tr><td>QuantStudio&nbsp; 3 System</td><td>Life Technologies GmbH (St. Leon-Rot, Almanya)</td><td>A28567</td><td></td></tr><tr><td>RNeasy Micro Kit</td><td>Qiagen</td><td>74007</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640, 1x, L-glutamin Mediatech</td><td>, Inc. (Manassas, ABD)</td> <td>ile 10-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>Steril tezgah, LaminarAir HB 2472&nbsp;</td><td>Heraeus aletleri (Hanau, Almanya)</td><td>51012197</td><td></td></tr><tr><td>Doku Kültürü Lamelleri 13 mm (Plastik)</td><td>Sarstedt Inc. (Newton, ABD)</td><td>83,18,40,002</td><td></td></tr><tr><td>Titanyum işlenmiş diskler 12 cm&nbsp;</td><td>Medentis Medical (Bad-Neuenahr-Ahrweiler, Almanya)</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>TNF alpha Human ELISA Kit</td><td>Invitrogen</td><td>KHC3011</td><td></td></tr><tr><td>Tripan mavisi çözeltisi %0,4Carl</td> <td>Roth GmbH + Co. KG (Karlsruhe, Almanya)</td><td>1680.1</td><td></td></tr></tbody></table>

İmplant yüzeylerinde m1 ve m2 İnsan monosit türevi makrofajların polarizasyonu ve karakterizasyonu 

Polarization and Characterization of M1 and M2 Human Monocyte-Derived Macrophages on Implant Surfaces

Bu çalışmanın sonuçları, MDM'lerin titanyum yüzeylerde başarılı bir şekilde farklılaşmasını ve polarizasyonunu ve ardından M1 veya M2 polarize makrofajların karakterizasyonunu göstermektedir. İlk adımda, CLSM kullanarak polarize MDM'leri karakterize ettik. Ön çalışmalarımıza dayanarak, CD209 ve CCR7, M1'i M2 polarize MDM'lerden ayırt etmek için spesifik belirteçler olarak kullanıldı. Şekil 2A,B'de gösterildiği gibi, MDM'ler başarılı bir şekilde M1 ve M2 makrofajlarına polarize oldu. Titanyum yüzeyinde, CCR7, M1 polarize makrofajlarda, spesifik olarak M2 polarize makrofajlarda eksprese edilen CD209'dan daha güçlü bir şekilde eksprese edildi. Ayrıca, bağıl floresan yoğunluğunun ölçülmesi, M1 veya M2 alt tiplerine belirteçlerin atanmasını kolaylaştırdı (Şekil 2C).
Şekil 3 , titanyum ve lamel yüzeylerde MDM'lerin temsili bir qRT-PCR analizini göstermektedir. Sonuçlar, M1 (CCR7 ve TNF-ɑ) ve M2 (CD209 ve CCL13) polarizasyon belirteçlerinin yüksek ekspresyonu ile gösterildiği gibi, her iki yüzeydeki MDM'lerin başarılı bir şekilde polarize edildiğini gösterdi. Bu, sırasıyla M1 ve M2 polarize hücrelerde yüksek seviyelerde inflamatuar TNF-α sitokinleri (Şekil 4A) ve IL-13 kemokinleri (Şekil 4B) gözlenerek protein seviyesinde daha da doğrulandı.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67180/67180fig01.jpg"> Şekil 1: Protokolün şematik gösterimi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67180/67180fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67180/67180fig02v2.jpg"> Şekil 2: CLSM kullanılarak polarize MDM'lerin karakterizasyonu. M1 ve M2 polarize makrofajların zenginleşmesi, tohumlamanın 2. gününde CCR7 ve CD209 antikorları kullanılarak spesifik antikor boyaması ve CLSM analizi ile doğrulandı. Floresan boyama ve CLSM analizine göre, (A) 25x büyütme ve (B) 63x büyütme, M1 hücreleri, M0 veya M2'den daha yüksek CCR7 (yeşil renkte) ifade etti. M2 hücreleri önemli bir CD209 ekspresyon paterni sergiler (yeşil renkte). (C) CCR7 ve CD209'un bağıl floresan yoğunluğunun kantitatif analizi. Çekirdekler DRAQ5 (mor renkte) ile boyandı. Sonuçlar, bağımsız olarak gerçekleştirilen 5 benzer deneyi temsil etmektedir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67180/67180fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67180/67180fig03.jpg"> Şekil 3: Gen ekspresyon profilleri kullanılarak polarize MDM'lerin karakterizasyonu. M1 (CCR7 ve TNF-ɑ) ve M2 (CD209 ve CCL13) polarizasyonu ile ilişkili farklı genlerin mRNA seviyelerini incelemek için kantitatif ters transkripsiyon polimeraz kullanıldı. Temizlik geni olarak GAPDH kullanıldı. Veriler ortalama ± SEM (n = 5) olarak sunulmuştur. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67180/67180fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67180/67180fig04.jpg"> Şekil 4: Titanyum ve plastik lameller üzerinde kültürlenmiş M0, M1 ve M2 makrofajları tarafından sitokinlerin üretimi. Hücre kültürü süpernatantlarında (A) TNF-ɑ sitokin düzeyi ve (B) CCL13 düzeyleri ELISA kullanılarak ölçüldü. Sitokin sekresyonu, BCA testi ile ölçülen toplam protein sekresyonuna normalize edildi. Çubuk grafikler ortalama ± SEM'i temsil eder (n = 5). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67180/67180fig04large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Tampon/Çözelti</td>
			<td>İçerik</td>
		</tr><tr><td>Boyama/Engelleme tamponu</td>
			<td>PBS + %1 BSA + %0,1 Tween 20</td>
		</tr><tr><td>Yıkama tamponu</td>
			<td>PBS + %0.1 Ara 20</td>
		</tr><tr><td>Fiksasyon tamponu</td>
			<td>PBS'deki Paraformaldehit'in (PFA) %3'ü</td>
		</tr><tr><td>Depolama arabelleği</td>
			<td>PBS'de penisilin ve streptomisinin% 1'i</td>
		</tr></tbody></table>Tablo 1: Arabelleklerin listesi.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Astar adı</td>
			<td>İleri astar dizileri</td>
			<td>Ters astar dizileri</td>
		</tr><tr><td>GAPDH</td>
			<td>5'-GAGTCAACGGATTTGGTCGT-3'</td>
			<td>5'-TTGATTTTGGAGGGATCTCG-3'</td>
		</tr><tr><td>CCR7 Serisi</td>
			<td>5'- TGGTGATCGGCTTTCTGGTC-3'</td>
			<td>5'- CACCTTGATGGCCTTGTTGC-3'</td>
		</tr><tr><td>CD209 Serisi</td>
			<td>5'- GGAGCAGAACTTCCTACAGC-3'</td>
			<td>5'- CAACGTTGTTGGGCTCTCCT-3'</td>
		</tr><tr><td>CCL13 Serisi</td>
			<td>5'-ATCTCCTTGCAGAGGCTGAA-3'</td>
			<td>5'-ACTTCCTTTGGGTCAGCA-3'</td>
		</tr><tr><td>TNF-ɑ</td>
			<td>5'- GCTGCACTTTGGAGTGATCG-3'</td>
			<td>5'- TCACTCGGGGTTCGAGAAGA-3'</td>
		</tr></tbody></table>Tablo 2. qRT-PCR'de kullanılan primer dizileri.

İmplant Yüzeylerinde M1 ve M2 İnsan Monosit Türevi Makrofajların Polarizasyonu ve Karakterizasyonu 

Foreign body reaction (FBR), an immune-mediated complex healing process, plays a crucial role in integrating implants into the body. Macrophages, as the ...

polarization-characterization-m1-m2-human-monocyte-derived

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Bu videoda, periferik kandan türetilmiş monositlerin M1 veya M2 makrofajlarına farklılaşmasını ve polarizasyonunu indüklemek için bir prosedür gösteriyoruz. Granülosit-makrofaj koloni uyarıcı faktör, lipopolisakkarit ve interferon-gama ile inkübasyon, pro-inflamatuar M1 makrofajları verirken, makrofaj koloni uyarıcı faktör ve interlökin-4 ile inkübasyon, anti-inflamatuar M2 makrofaj üretimini indükler.

Monosit Kaynaklı Hücrelerin Makrofaj Benzeri Hücrelere Farklılaşması ve Polarizasyonu

Bu makale, kolayca kolay uyarlanabilir...

Kemik İliği Türetilmiş makrofajlar kullanarak Makrofaj Polarizasyon İncelenmesi

Monosit türevli histiositlerinden doğuştan gelen bağışıklık sisteminin önemli bir hücrelerdir. Burada, kullanımı kolay...

Bir<em&gt; In vitro</emİnsan Makrofaj Farklılaşma ve Polarizasyon heterojenliği Eğitim için&gt; Model

İnsan makrofaj üretimi için basit ve etkin bir protokol sunuyoruz. İnce beyaz kat çifte yoğunluk gradyanlı santrifugasyon sureti ile işlenir ve izole edilmiş monositlerin, sonra Teflon kaplı bir hücre kültürü torbalarda makrofajlara ayrılır. Bu makrofaj verim maksimize ve daha sonraki deneyler için hücre hasat kolaylaştırır.

İnsan Çift Gradient Santrifüj ile Monositlerinde ve teflon kaplı Hücre Kültürü Çantalar Makrofagların Onların Farklılaşma İzolasyonu

Metabolik yeniden programlama, M1 ve M2 makrofaj polarizasyonu için bir özellik ve önkoşuldur. Bu el yazması, fare kemik iliği türevli makrofajlarda glikoliz ve mitokondriyal fonksiyonun temel parametrelerinin ölçümü için bir testi açıklamaktadır. Bu araç, belirli faktörlerin makrofajın metabolizmasını ve fenotipini nasıl etkilediğini araştırmak için uygulanabilir.

Gerçek zamanlı Ekstrasellüler Flux Analizi Polarize M1 ve M2 Kemik İliği-türevli Makrofagların Metabolik Karakterizasyonu

Bu protokol, insan M1 veya M2 polarize makrofajlardaki Mycobacterium tuberculosis enfeksiyonunu, periferik-kan monositlerinin GFP etiketli virülan strain H37Rv ile enfekte olan makrofaj benzeri hücrelere farklılaşmasına dayanan ve seçilen M1/M2 belirteçlerinin ifadesini içeren 10 renkli bir panel kullanılarak akış sitometrisi ile analiz edilen bir yöntem sağlar.

M1 ve M2 İnsan Monosit Türevi Hücrelerin Polarizasyonu ve Mikobakteri Tüberküloz Enfeksiyonu Üzerine Akış Sitometrisi ile Analiz

M2 benzeri tümör ilişkili makrofajlar (TAM) tümör ilerlemesi ve kanserde zayıf prognoz ile ilişkilidir. Bu protokol, THP-1 monosit benzeri hücreleri 14 gün içinde M2 benzeri makrofajlara yeniden ayırt etmek ve polarize etmek için ayrıntılı bir kılavuz görevi görür. Bu model, TAM'ın tümör mikroçevriciliği içindeki antienflamatuar etkilerini araştırmak için temel oluşturur.

makrofaj Farklılaşması ve Polarizasyonu, İnsan Monosit Benzeri THP-1 Lösemi Hücre Hattı Kullanarak M2 Benzeri Bir Fenotipe Dönüştür

Monositler ve makrofajlar, sağlık ve hastalık için çok önemli olan çok plastik ve yeniden programlanabilir bağışıklık hücreleridir. Belirli farklılaşma programları ve fenotipleri benimseyerek çok çeşitli uyaranları algılar ve bunlara yanıt verirler. Makrofaj polarizasyonunu ve yeniden programlamayı incelemek için bir in-vitro modeli standartlaştırdık ve araştırma için değerli bir araç sağladık.

İnsan Monositinden Türetilmiş Makrofajların İn vitro Tahliller için Yeniden Programlanması

Transfüzyon tıbbı ve immünolojide kırmızı hücre alloantikorlarının klinik önemini daha iyi tahmin etmeye yardımcı olmak için makrofajların kullanıldığı mevcut monosit-monotabaka testi (MMA) için iyileştirmeler ve güncellenmiş yöntemler geliştirdik. Bu test, monosit-makrofaj testi (M-MA) olarak adlandırılır.

Monosit-Makrofaj Testi Kullanılarak Kırmızı Kan Hücresi Antikor Öneminin Tahmini

Dendritik hücreler (DC'ler) ile nigerisin ile birlikte NLRP3 inflammasome aktivasyonu takiben, sentetik purin, R848 ve TLR8 tanınması, tepki olarak IL-1β salgılar, bu nedenle, IL-1β NLRP3 inflammasome aktivitesini ölçmek için kullanılabilir. Hücre içi sitokin boyama, immunoblotting ve ELISA doğru IL-1β ekspresyonu üzerinden NLRP3 emişli inflammasome ve aktivasyonunu ölçmek için kullanılır.

Aktivasyon ve İnsan monosit türevli dendritik hücreler, IL-1β kullanarak NLRP3 Inflammasome Aktivitenin Ölçümü

Öğrenin, implant yüzeylerinde insan monosit türevi makrofajların M1 ve M2 polarizasyonunu karakterize etme yöntemini. qRT-PCR, ELISA ve CLSM teknikleriyle sitokin profilleri ve hücre yüzey belirteçleri analiz edilir.

İmplant Yüzeylerinde M1 ve M2 İnsan Monosit Türevi Makrofajların Polarizasyonu ve Karakterizasyonu

Daha fazla video keşfet