Name: Viral Olmayan Uyuyan Güzel Transpozon Sistemini Kullanarak Mantar Enfeksiyonlarını Hedefleyen Mühendislik Kimerik Antijen Reseptörü-Doğal Öldürücü Hücreler (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-10-04T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 29 s
Description: Keşfedin, Sleeping Beauty transpozon sistemiyle Aspergillus fumigatus'u hedefleyen CAR-NK hücreleri üretme yöntemini. Bu protokol, mantar enfeksiyonlarına karşı hazır hücresel tedaviler geliştirmeyi amaçlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Mantar Patojenlerini Hedeflemek için CAR-NK Hücreleri Elde Etmek için Uyuyan Güzel Yaklaşımı

<ol><li>Fang, W., Latgé, J. -P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbe+profile%3A+Aspergillus+fumigatus%3A+A+saprotrophic+and+opportunistic+fungal+pathogen%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiology+%28Reading%29%22%5BJournal%5D)">Microbe profile: Aspergillus fumigatus: A saprotrophic and opportunistic fungal pathogen.</a> Microbiology (Reading). 164 (8), 1009-1011 (2018).</li>
<li>Brown, G. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hidden+killers%3A+Human+fungal+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Hidden killers: Human fungal infections.</a> Sci Transl Med. 4 (165), 165rv113(2012).</li>
<li>Sun, K. S., Tsai, C. F., Chen, S. C., Huang, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+outcome+and+prognostic+factors+associated+with+invasive+pulmonary+aspergillosis%3A+An+11-year+follow-up+report+from+Taiwan%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Clinical outcome and prognostic factors associated with invasive pulmonary aspergillosis: An 11-year follow-up report from Taiwan.</a> PLoS One. 12 (10), e0186422(2017).</li>
<li>Meis, J. F., Chowdhary, A., Rhodes, J. L., Fisher, M. C., Verweij, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+implications+of+globally+emerging+azole+resistance+in+Aspergillus+fumigatus%5BTitle%5D)+AND+%22Philos+Trans+R+Soc+Lond+B+Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">Clinical implications of globally emerging azole resistance in Aspergillus fumigatus.</a> Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 371 (1709), 20150460(2016).</li>
<li>Seif, M., Einsele, H., Löffler, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CAR+T+cells+beyond+cancer%3A+Hope+for+immunomodulatory+therapy+of+infectious+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">CAR T cells beyond cancer: Hope for immunomodulatory therapy of infectious diseases.</a> Front Immunol. 10, 2711(2019).</li>
<li>Seif, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CAR+T+cells+targeting+Aspergillus+fumigatus+are+effective+at+treating+invasive+pulmonary+aspergillosis+in+preclinical+models%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">CAR T cells targeting Aspergillus fumigatus are effective at treating invasive pulmonary aspergillosis in preclinical models.</a> Sci Transl Med. 14 (664), eabh1209(2022).</li>
<li>Kumaresan, P. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioengineering+T+cells+to+target+carbohydrate+to+treat+opportunistic+fungal+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Bioengineering T cells to target carbohydrate to treat opportunistic fungal infection.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 111 (29), 10660-10665 (2014).</li>
<li>Kumaresan, P. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+lentiviral+vector-based+approach+to+generate+chimeric+antigen+receptor+T+cells+targeting+Aspergillus+fumigatus%5BTitle%5D)+AND+%22mBio%22%5BJournal%5D)">A novel lentiviral vector-based approach to generate chimeric antigen receptor T cells targeting Aspergillus fumigatus.</a> mBio. 15 (4), e0341323(2024).</li>
<li>Lu, H., Zhao, X., Li, Z., Hu, Y., Wang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+CAR-T+cells+to+CAR-NK+cells%3A+A+developing+immunotherapy+method+for+hematological+malignancies%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">From CAR-T cells to CAR-NK cells: A developing immunotherapy method for hematological malignancies.</a> Front Oncol. 11, 720501(2021).</li>
<li>Robertson, M. J., Ritz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+and+clinical+relevance+of+human+natural+killer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Biology and clinical relevance of human natural killer cells.</a> Blood. 76 (12), 2421-2438 (1990).</li>
<li>Ziegler, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD56+is+a+pathogen+recognition+receptor+on+human+natural+killer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">CD56 is a pathogen recognition receptor on human natural killer cells.</a> Sci Rep. 7 (1), 6138(2017).</li>
<li>Esmaeilzadeh, A., Hadiloo, K., Jabbari, M., Elahi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+progress+of+chimeric+antigen+receptor+%28car%29+t+versus+car+nk+cell+for+immunotherapy+of+solid+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Current progress of chimeric antigen receptor (car) t versus car nk cell for immunotherapy of solid tumors.</a> Life Sci. 337, 122381(2024).</li>
<li>Zhang, J., Zheng, H., Diao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+killer+cells+and+current+applications+of+chimeric+antigen+receptor-modified+NK-92+cells+in+tumor+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Natural killer cells and current applications of chimeric antigen receptor-modified NK-92 cells in tumor immunotherapy.</a> Int J Mol Sci. 20 (2), 317(2019).</li>
<li>Hu, Y., Tian, Z. G., Zhang, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chimeric+antigen+receptor+%28CAR%29-transduced+natural+killer+cells+in+tumor+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Pharmacol+Sin%22%5BJournal%5D)">Chimeric antigen receptor (CAR)-transduced natural killer cells in tumor immunotherapy.</a> Acta Pharmacol Sin. 39 (2), 167-176 (2018).</li>
<li>Hudecek, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Going+non-viral%3A+The+Sleeping+Beauty+transposon+system+breaks+on+through+to+the+clinical+side%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Biochem+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Going non-viral: The Sleeping Beauty transposon system breaks on through to the clinical side.</a> Crit Rev Biochem Mol Biol. 52 (4), 355-380 (2017).</li>
<li>Amberger, M., Ivics, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Latest+advances+for+the+Sleeping+Beauty+transposon+system%3A+23+years+of+insomnia+but+prettier+than+ever%5BTitle%5D)+AND+%22BioEssays%22%5BJournal%5D)">Latest advances for the Sleeping Beauty transposon system: 23 years of insomnia but prettier than ever.</a> BioEssays. 42 (11), 2000136(2020).</li>
<li>Ingegnere, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+car+nk+cells%3A+A+new+non-viral+method+allowing+high+efficient+transfection+and+strong+tumor+cell+killing%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Human car nk cells: A new non-viral method allowing high efficient transfection and strong tumor cell killing.</a> Front Immunol. 10, 957(2019).</li>
<li>Stacey, K. J., Ross, I. L., Hume, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electroporation+and+DNA-dependent+cell+death+in+murine+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Electroporation and DNA-dependent cell death in murine macrophages.</a> Immunol Cell Biol. 71 (Pt 2), 75-85 (1993).</li>
<li>Monjezi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+CAR+T-cell+engineering+using+non-viral+Sleeping+Beauty+transposition+from+minicircle+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Enhanced CAR T-cell engineering using non-viral Sleeping Beauty transposition from minicircle vectors.</a> Leukemia. 31 (1), 186-194 (2017).</li>
<li>Moscarelli, J., Zahavi, D., Maynard, R., Weiner, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+next+generation+of+cellular+immunotherapy%3A+Chimeric+antigen+receptor-natural+killer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Cell+Ther%22%5BJournal%5D)">The next generation of cellular immunotherapy: Chimeric antigen receptor-natural killer cells.</a> Transplant Cell Ther. 28 (10), 650-656 (2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>15 ML konik tabanlı borular</td><td>Greiner Bio-One</td><td>188271</td><td>PP, 17/120 MM, CELLSTAR, STERIL</td></tr><tr><td>50 ML konik tabanlı borular</td><td>Greiner Bio-One</td><td>227270</td><td>PP, 30/115 MM, CELLTAR, STERIL</td></tr><tr><td>6 ve 96 Kuyucuklu hücre kültürü plakası</td><td>Corning Inc. Yaşam Bilimleri</td><td>83-3736 / 83-3474</td><td>TC ile işlenmiş Çoklu Kuyu Plakaları, Düz dipler, Optimal hücre bağlanması için işlenmiş, Gama ışınlaması ile sterilize edilmiş, Pirojenik olmayan</td></tr><tr><td>7-AAD (7-Aminoaktinomisin D)</td><td>BD Biosciences</td><td>,</td><td>akış sitometrik tahlillerinde cansız hücrelerin dışlanması için kullanıma hazır nükleik asit boyası</td>559925</tr><tr><td>Alexa Fluor 647 anti-insan EGFR Antikoru Biolegend</td><td></td><td>352918</td><td>Klon AY13</td></tr><tr><td>Anti-Biotin MicroBeads UltraPure</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-105-637</td><td>Monoklonal fare anti-biyotinine konjuge UltraPure MicroBeads antikorlar</td></tr><tr><td>Aspergillus fumigatus</td><td>ATCC</td><td>46645</td><td></td></tr><tr><td>Biyosfer Filtre Uçları (20 ve 100 &mu; L)&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>70.3030.365 / 70.3030.275</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&prime; s Fosfat Tamponlu Tuzlu Su (PBS)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td>&nbsp; Modifiye, kalsiyum klorür ve magnezyum klorür içermeyen, sıvı, steril filtreli, hücre kültürüne uygun, endotoksin, test edilmiş</td></tr><tr><td>ELISA MAX Deluxe Set İnsan IFN-&gama;</td><td>Moleküler</td><td></td> biyoloji için Etilendiamintetraasetik asit disodyum tuzu çözeltisi (EDTA) Sigma-Aldrich E7889 430104 <td></td>Biolegend</tr>, <tr><td></td><td></td><td></td><td>0.5&nbsp; H2O, DNase, RNase, NICKase ve proteazda M, hiçbiri tespit edilmedi, 0.2 & mu; m filtrelenmiş.</td></tr><tr><td>FACS temiz</td><td>BD Biosciences</td><td>340345</td><td></td></tr><tr><td>FACS Akış Kılıfı Sıvısı</td><td>BD Biosciences</td><td>342003</td><td></td></tr><tr><td>FACS Durulama Çözeltisi</td><td>BD Bioscience</td><td>340346</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu (FBS)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>F7524</td><td>steril filtreli, hücre kültürü için uygun, kullanımdan önce ısı inaktive edilmiş</td></tr><tr><td>Gibco, MEM ve alfa;, nükleositler</td><td>Thermofisher Bilimsel</td><td>22571020</td><td>Fenol Kırmızısı, Ribonükleozitler, Deoksiribonükleozitler, Sodyum Bikarbonat</td></tr><tr><td>At serumu</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>16050122</td><td>Steril filtreli, kullanımdan önce ısı inaktive edilmiş</td></tr><tr><td>İnsan IL-2 IS, araştırma sınıfı</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-097-742</td><td>Araştırma sınıfı. ED50 &le; 0.3 ng/mL, &ge aktivitesine karşılık gelir; 3 & kez; 106 IU / mg.</td></tr><tr>Streptomyces <td>conglobatus'tan iyonomisin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I0634-1MG</td><td>, sitokin sekresyonu için pozitif kontrol olarak kullanılır&nbsp;</td></tr><tr><td>Hücre kültürü için</td> <td>L-Glutamin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W368401</td></tr><tr><td>MACS LS Sütunu</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td> <td>& nbsp; Kolonlar ve pistonlar, steril paketlenmiş</td></tr><tr><td>NK-92</td><td>DSMZ</td><td>ACC 488</td><td></td></tr><tr><td>Neon Transfektionssystem 100&nbsp; &mu; L-Kit</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>MPK10096</td><td>Yeniden Süspansiyon Tamponu R, Elektrolitik Tampon E2, 100 & mu; L Neon Uçlar, Neon Elektroporasyon Tüpleri</td></tr><tr><td>Phorbol-12-myristat-13-asetat (PMA)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>P1585-1MG</td><td>sitokin sekresyonu için pozitif kontrol olarak kullanılır&nbsp;</td></tr><tr><td>Akış sitometrisi Reaksiyon tüpü için kullanılan</td> <td>5 mL</td><td>BD Bioscience</td><td>S-452400</td></tr><tr><td>, 1.5 ML</td><td>Greiner Bio-One</td><td>7,26,90,001</td><td>PP, şeffaf, kapak takılı, enjekte edilmiş derecelendirme ile. Kullanmadan önce sterilize edilmiştir.</td></tr><tr><td>RPMI 1640 Orta, GlutaMAX</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>72400021</td><td>GlutaMax I,&nbsp; Fenol Kırmızısı, HEPES, Steril filtreli</td></tr><tr><td>TipOne 1000 & mu; L XL Dereceli Filtre Ucu</td><td>StarLab</td><td>S1122-1730</td><td></td></tr> <tr><td><güçlü > Ekipman< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD FACSCalibur</td><td>BD Bioscience</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CO2 İnkübatör C60 ve nbsp;</td><td>Labotect</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Heraeus Multifuge 3SR</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HydroFLEX mikroplaka yıkayıcı&nbsp;</td><td>Tecan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NanoQuant Infinite M200 Pro</td><td>Tecan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Neon Transfeksiyon Sistemi</td><td>Invitrojen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipetleri&nbsp;</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Quadro MACS Ayırıcı&nbsp;</td><td>Miltenyi Biyotec</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

viral olmayan uyuyan güzel transpozon sistemini kullanarak mantar enfeksiyonlarını hedefleyen mühendislik kimerik antijen reseptörü-doğal Öldürücü hücreler

Engineering Chimeric Antigen Receptor-Natural Killer Cells Targeting Fungal Infections Using the Non-viral Sleeping Beauty Transposon System

Transfeksiyon, geri kazanım, zenginleştirme ve genişletme dahil olmak üzere Af-CAR NK-92 hücrelerinin üretilmesi sürecinin tamamı yaklaşık 14 gün sürer. Transfeksiyondan sonra, hücreler kültürlenir ve her iki günde bir bölünür. Transfeksiyondan iki gün sonraki ilk bölünme sırasında hücre canlılığı azalabilir. Tipik olarak, hücreler transfeksiyondan 4 gün sonra iyileşir ve 48 saatlik bir ikiye katlama süresiyle çoğalmaya başlar.
Geri kazanımı takiben, transfeksiyon verimlilikleri ölçülür ve -20'ye ulaşması beklenir ( Şekil 3'te<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67424/67424fig01.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67424/67424fig01large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67424/67424fig02.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67424/67424fig02large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67424/67424fig03.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67424/67424fig03large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67424/67424fig04.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67424/67424fig04large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67424/67424fig05.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67424/67424fig05large.jpg" target="_blank"></a><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67424/figure%20S1.pdf" target="_blank"></a>

Viral Olmayan Uyuyan Güzel Transpozon Sistemini Kullanarak Mantar Enfeksiyonlarını Hedefleyen Mühendislik Kimerik Antijen Reseptörü-Doğal Öldürücü Hücreler

Chimeric antigen receptor (CAR)-based cell therapies have shown impressive efficacy in the treatment of hematological malignancies. Recently, these ...

engineering-chimeric-antigen-receptor-natural-killer-cells-targeting

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Bu video, birincil doğal öldürücü (NK) hücrelerin Cas9 ribonükleoprotein aracılı genetik modifikasyonu için bir tekniği göstermektedir. Bir CRISPR RNA (crRNA) ve bir trans-aktive edici crRNA'nın (tracrRNA) baz eşleşmesiyle oluşturulan bir kılavuz RNA'ya (gRNA) bağlı bir Cas9 endonükleazından oluşan bir Cas9 ribonükleoproteini, elektroporasyon yoluyla birincil doğal öldürücü hücrelere verilir. Ribonükleoprotein, hedef bölgedeki konakçı DNA'yı hedefler ve parçalar, bu da hedef genin hücresel...

CRISPR Cas9 Kullanarak Doğal Öldürücü Hücrelerde Gen Düzenleme Tekniği

Bir CD19 özgü kimerik antijen reseptör (SYR) eksprese eden T hücrelerinin ilk-in-insan gen tedavi denemelerinde B-hücreli kanserlerin araştırılan tedavi olarak infüze edilir. Bu kullanılarak T hücre genetik modifikasyonu...

Klinik Uygulama<em&gt; Sleeping Beauty</emGenetiği Periferik ve Göbek Kordon Kanı alınan T hücreleri Değiştir Sunan Hücreler&gt; ve Yapay Antijen

Bu çalışmanın amacı hücrelerdeki birincil doğal öldürücü (NK) başarılı gen iletim için izin teknolojileri formüle etmek oldu. İnsan lentiviral iletim dextran aracılı veya fare birincil NK hücreleri sonuçlarında yüksek gen ifade verimliliği. Bu yöntemi, gen iletim NK hücre genetik manipülasyon büyük ölçüde artıracaktır.

Dextran fare ve insan birincil NK hücreleri Lentiviral iletim verimliliğini artırır

Bu iletişim kuralı tarafından transcriptionally düzenlenmiş Uyuyan güzel sistem istikrarlı bir gen ilgi entegrasyonu insan genomu ulaşmak için bir yöntem açıklanır. Arızalı lentiviral Vektörler, vitro iletim insan hücre ve moleküler tahlil transduced hücrelerde entegrasyonu hazırlanması rapor edilmektedir.

Transcriptionally düzenlenmiş uyku güzellik sistem entegrasyon arızalı Lentiviral vektör paketlenmiş bir verimli Vitro transpozisyonu yöntemle

Burada, genetik olarak Cas9 Ribonucleoproteins (Cas9/RNPs) kullanarak birincil veya genişletilmiş insan doğal öldürücü (NK) hücreleri değiştirmek için bir iletişim kuralı mevcut. Bu iletişim kuralını kullanarak, biz insan NK hücreleri dönüştürme büyüme faktörü-b reseptör 2 (TGFBR2) ve hypoxanthine phosphoribosyltransferase 1 (HPRT1) için eksik oluşturulan.

Cas9 Ribonucleoproteins kullanarak Knock-out birincil ve genişletilmiş insan NK hücre üretimi

Burada, periferik kan doğal öldürücü (PBNK), karaciğer dokularından NK hücreleri ve periferik kan mononükleer hücrelerinden (PBMC'ler) veya kordon kanından (CB) türetilen kimerik antijen reseptörü (CAR)-NK hücrelerini genişletmek için bir yöntem sunuyoruz. Bu protokol, genişlemiş NK hücrelerinin optimize edilmiş saflığına ek olarak, 221-mIL-21 besleyici hücreler kullanılarak NK ve CAR-NK hücrelerinin genişlemesini göstermektedir.

Doğal Öldürücü (NK) ve Membran Bound-IL-21-Modifiye B Hücre Hattı Kullanarak CAR-NK Hücre Genleşme Yöntemi

Burada, insan iPSC'den türetilmiş kimerik antijen reseptörü (CAR) eksprese eden doğal öldürücü hücreleri çeşitli malignitelere karşı daha iyi öldürme ile ayırt etmek ve genişletmek için bir yöntem sunuyoruz. Bu protokol, doğal öldürücü (NK) optimize edilmiş iPSC'den türetilmiş CAR-NK hücrelerinin farklılaşmasını ve genişlemesini ve çeşitli tümör hücre hatlarına karşı antitümör aktivitesinin ölçümünü gösterir.

İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücre Kaynaklı Kimerik Antijen Reseptörü İfade Eden Doğal Öldürücü Hücrelerdeki Gelişmeler

Bu protokol, kanser immünoterapisi için entegre olmayan mRNA kullanarak geçici kimerik antijen reseptörü (CAR) T hücreleri oluşturmak için ayrıntılı bir prosedürü ana hatlarıyla belirtir ve CAR-T hücrelerini ve sitotoksik işlevlerini değerlendirmek için güvenilir yöntemler sağlar.

Kanser İmmünoterapisi için mRNA Kullanarak Geçici Kimerik Antijen Reseptörü T Hücreleri Oluşturmak İçin Viral Olmayan Bir Yaklaşım

Homoloji aracılı uç birleştirme (HMEJ) DNA onarım yolu yoluyla birincil insan T hücrelerinde büyük, multisistronik yapıların yüksek verimli hedefli knock-in'ini elde etmek için CRISPR / Cas9 teknolojisini kullanmak için ayrıntılı bir protokol sağlanmıştır. Bu cGMP'ye uyarlanabilir protokolle tasarlanan T hücreleri, mükemmel hücre genişlemesi, sitotoksisite ve sitokin üretimini korur.

Büyük DNA Şablonlarının Homoloji Aracılı Uç Birleştirme Hedefli Entegrasyonu Yoluyla Birincil İnsan T Hücrelerinin Viral Olmayan Mühendisliği

Bu protokol, birincil T hücrelerinin yetiştirilmesi için temel adımları tanımlar; bunların izolasyonu, aktivasyonu, genişlemesi ve mRNA elektroporasyonu ile geçici transfeksiyonu dahildir. Ayrıca, fenotip, aktivasyon belirteçleri, canlılık ve kimerik antijen reseptörü (CAR) ekspresyonunun akış sitometrik analizi için bir iş akışı ve antikor paneli önerilmektedir.

Birincil insan T hücrelerinin izolasyonu, yetiştirilmesi ve geçici transfeksiyonu için kimerik antijen reseptörü (CAR) T hücreleri üretmek

Bu protokol, canlı hücre görüntüleme ve akış sitometrisi kullanılarak insan doğal katil hücrelerinin doğal, kimerik antijen reseptörü aracılı ve antikor bağımlı sitotoksisitesinin tutarlı ölçümü için standartlaştırılmış bir in vitro iş akışı sağlar.

Canlı hücre görüntüleme ve akış sitometrisi kullanarak kimerik antijen reseptörleri ve terapötik antikorlarla potantize edilen NK-hücre sitotoksisitesinin nicelendirilmesi

Keşfedin, Sleeping Beauty transpozon sistemiyle Aspergillus fumigatus'u hedefleyen CAR-NK hücreleri üretme yöntemini. Bu protokol, mantar enfeksiyonlarına karşı hazır hücresel tedaviler geliştirmeyi amaçlar.

Viral Olmayan Uyuyan Güzel Transpozon Sistemini Kullanarak Mantar Enfeksiyonlarını Hedefleyen Mühendislik Kimerik Antijen Reseptörü-Doğal Öldürücü Hücreler (Video) | JoVE Journal

Viral Olmayan Uyuyan Güzel Transpozon Sistemini Kullanarak Mantar Enfeksiyonlarını Hedefleyen Mühendislik Kimerik Antijen Reseptörü-Doğal Öldürücü Hücreler

Daha fazla video keşfet