Name: Yinelemeli Beyazlatma Genişletilmiş Çokluk Yaklaşımı kullanılarak tümör taşıyan dokunun üç boyutlu görüntülenmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-25T13:50:00.000+00:00
Duration: 7 min 16 s
Description: Öğrenin, yinelemeli beyazlatma genişletilmiş çokluk yaklaşımı ile peritoneal metastazların üç boyutlu mimarisini karakterize etme yöntemini. Bu protokol, tümör mikroçevresinin analizi için bağışıklık tedavisi araştırmalarında değerli bilgiler sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol><li>Anderson, N. M., Simon, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+tumor+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">The tumor microenvironment.</a> Curr Biol. 30 (16), R921-R925 (2020).</li>
<li>Li, Z., Li, J., Bai, X., Huang, X., Wang, Q. Tumor microenvironment as a complex milieu driving cancer progression: A mini-review. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLi%2C+Z+%22Clin+Transl+Oncol%22">Clin Transl Oncol</a>. , (2024).</li>
<li>Fridman, W. H., Zitvogel, L., Sautes-Fridman, C., Kroemer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+immune+contexture+in+cancer+prognosis+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">The immune contexture in cancer prognosis and treatment.</a> Nat Rev Clin Oncol. 14 (12), 717-734 (2017).</li>
<li>Roma-Rodrigues, C., Mendes, R., Baptista, P. V., Fernandes, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+tumor+microenvironment+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Targeting tumor microenvironment for cancer therapy.</a> Int J Mol Sci. 20 (4), 840(2019).</li>
<li>Sheng, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplex+immunofluorescence%3A+A+powerful+tool+in+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Multiplex immunofluorescence: A powerful tool in cancer immunotherapy.</a> Int J Mol Sci. 24 (4), 3086(2023).</li>
<li>Bollhagen, A., Bodenmiller, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+multiplexed+tissue+imaging+in+precision+oncology+and+translational+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discov%22%5BJournal%5D)">Highly multiplexed tissue imaging in precision oncology and translational cancer research.</a> Cancer Discov. 14 (11), 2071-2088 (2024).</li>
<li>Jin, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+spatial+transcriptomics+and+its+applications+in+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer%22%5BJournal%5D)">Advances in spatial transcriptomics and its applications in cancer research.</a> Mol Cancer. 23 (1), 129(2024).</li>
<li>Kashyap, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+tumor+heterogeneity%3A+From+data+acquisition+to+metric+generation%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Quantification of tumor heterogeneity: From data acquisition to metric generation.</a> Trends Biotechnol. 40 (6), 647-676 (2022).</li>
<li>Chang, Q., Hedley, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+applications+of+flow+cytometry+in+solid+tumor+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Emerging applications of flow cytometry in solid tumor biology.</a> Methods. 57 (3), 359-367 (2012).</li>
<li>Zhang, L., et al. Single-cell analyses inform mechanisms of myeloid-targeted therapies in colon cancer. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aZhang%2C+L+%22Cell%22">Cell</a>. 181 (2), 442-459.e29 (2020).</li>
<li>Wang, X. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+predictors+of+immunotherapy+response+in+triple-negative+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Spatial predictors of immunotherapy response in triple-negative breast cancer.</a> Nature. 621 (7980), 868-876 (2023).</li>
<li>Maestri, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+proximity+of+tumor-immune+interactions+predicts+patient+outcome+in+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Spatial proximity of tumor-immune interactions predicts patient outcome in hepatocellular carcinoma.</a> Hepatology. 79 (4), 768-779 (2024).</li>
<li>Wang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+tumor+microenvironment+in+cancer+progression+and+therapeutic+strategy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Med%22%5BJournal%5D)">Role of tumor microenvironment in cancer progression and therapeutic strategy.</a> Cancer Med. 12 (10), 11149-11165 (2023).</li>
<li>Veninga, V., Voest, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+organoids%3A+Opportunities+and+challenges+to+guide+precision+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Tumor organoids: Opportunities and challenges to guide precision medicine.</a> Cancer Cell. 39 (9), 1190-1201 (2021).</li>
<li>Lin, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplexed+3d+atlas+of+state+transitions+and+immune+interaction+in+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Multiplexed 3d atlas of state transitions and immune interaction in colorectal cancer.</a> Cell. 186 (2), 363-381.e19 (2023).</li>
<li>Radtke, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ibex%3A+An+iterative+immunolabeling+and+chemical+bleaching+method+for+high-content+imaging+of+diverse+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Ibex: An iterative immunolabeling and chemical bleaching method for high-content imaging of diverse tissues.</a> Nat Protoc. 17 (2), 378-401 (2022).</li>
<li>Radtke, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ibex%3A+A+versatile+multiplex+optical+imaging+approach+for+deep+phenotyping+and+spatial+analysis+of+cells+in+complex+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Ibex: A versatile multiplex optical imaging approach for deep phenotyping and spatial analysis of cells in complex tissues.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 117 (52), 33455-33465 (2020).</li>
<li>Van Baal, J. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+histophysiology+and+pathophysiology+of+the+peritoneum%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Cell%22%5BJournal%5D)">The histophysiology and pathophysiology of the peritoneum.</a> Tissue Cell. 49 (1), 95-105 (2017).</li>
<li>Bridda, A., Padoan, I., Mencarelli, R., Frego, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peritoneal+mesothelioma%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22MedGenMed%22%5BJournal%5D)">Peritoneal mesothelioma: A review.</a> MedGenMed. 9 (2), 32(2007).</li>
<li>Demuytere, J., Ernst, S., Van Ovost, J., Cosyns, S., Ceelen, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+tumor+immune+microenvironment+in+peritoneal+carcinomatosis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Rev+Cell+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">The tumor immune microenvironment in peritoneal carcinomatosis.</a> Int Rev Cell Mol Biol. 371, 63-95 (2022).</li>
<li>Wang, Q., et al. Heterogeneity of tertiary lymphoid structures predicts the response to neoadjuvant therapy and immune microenvironment characteristics in triple-negative breast cancer. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWang%2C+Q+%22Br+J+Cancer%22">Br J Cancer</a>. , (2024).</li>
<li>Kepenekian, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peritoneal+mesothelioma%3A+Systematic+review+of+hyperthermic+intraperitoneal+chemotherapy+%28HIPEC%29+protocol+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+J+Surg+Oncol%22%5BJournal%5D)">Peritoneal mesothelioma: Systematic review of hyperthermic intraperitoneal chemotherapy (HIPEC) protocol outcomes.</a> Indian J Surg Oncol. 14 (Suppl 1), 39-59 (2023).</li>
<li>Mcquade, C., Renton, M., Chouhan, A., Macdermott, R., O'brien, C. Review of imaging peritoneal disease and treatment. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMcquade%2C+C+%22Can+Assoc+Radiol+J%22">Can Assoc Radiol J</a>. , (2024).</li>
<li>Kenerson, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+slice+culture+as+a+biologic+surrogate+of+human+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Tumor slice culture as a biologic surrogate of human cancer.</a> Ann Transl Med. 8 (4), 114(2020).</li>
<li>Arrizabalaga, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+slice+culture+system+for+ex+vivo+immunotherapy+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Tumor slice culture system for ex vivo immunotherapy studies.</a> Methods Cell Biol. 189, 55-69 (2024).</li>
<li>Neumeister, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+assessment+of+effect+of+preanalytic+cold+ischemic+time+on+protein+expression+in+breast+cancer+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Quantitative assessment of effect of preanalytic cold ischemic time on protein expression in breast cancer tissues.</a> J Natl Cancer Inst. 104 (23), 1815-1824 (2012).</li>
<li>Panchuk-Voloshina, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alexa+dyes%3A+A+series+of+new+fluorescent+dyes+that+yield+exceptionally+bright%2C+photostable+conjugates%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Alexa dyes: A series of new fluorescent dyes that yield exceptionally bright, photostable conjugates.</a> J Histochem Cytochem. 47 (9), 1179-1188 (1999).</li>
<li>Rajaram, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sampling+strategies+to+capture+single-cell+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Sampling strategies to capture single-cell heterogeneity.</a> Nat Methods. 14 (10), 967-970 (2017).</li>
<li>Bella, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+peritoneal+carcinomatosis+to+develop+clinical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Mouse models of peritoneal carcinomatosis to develop clinical applications.</a> Cancers (Basel). 13 (5), 963(2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Alexa Fluor Plus 750 Phalloidin</td><td>Invitrogen</td><td>A30105</td><td>F-aktin boya</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 anti-insan CD206 (MMR) Antikoru</td><td>BioLegend</td><td>321114</td><td>antikoru</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 anti-insan CD31 Antikoru</td><td>BioLegend</td><td>303110</td><td>antikoru</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 anti-insan CD4 Antikoru</td><td>BioLegend</td><td>300519</td><td>antikoru</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 anti-insan HLA-DR Antikoru</td><td>BioLegend</td><td>307656</td><td>antikoru</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 anti-fare/insan CD44 antikoru</td><td>BioLegend</td><td>103016</td><td>antikoru</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594 anti-insan CD45 Antikoru</td><td>BioLegend</td><td>304060</td><td>antikoru</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 Anti-Kalretinin antikoru [EP1798]</td><td>Abcam</td><td>ab214244</td><td>antikoru</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 anti-insan CD3 Antikoru</td><td>BioLegend</td><td>300416</td><td>antikoru</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 anti-insan CD8 Antikoru</td><td>BioLegend</td><td>344726</td><td>antikoru</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 anti-insan Podoplanin Antikoru</td><td>BioLegend</td><td>337007</td><td>antikoru</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 anti-Vimentin Antikoru</td><td>BioLegend</td><td>677807</td><td>antikoru</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 CD68 Antikoru (KP1)</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-20060AF647</td><td>antikoru</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 750 Sitokeratin, pan Antikoru (AE-1 / AE-3)</td> <td>Novus</td><td>NBP2-33200AF750</td><td>antikoru</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 750 İnsan alfa-Düz Kas Aktin Antikoru</td><td>R& D</td><td>IC1420S</td><td>antikoru</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 CD20 Monoklonal Antikor (L26) eBioscience</td><td>Thermo Fisher</td><td>53-0202-82</td><td>antikoru</td></tr><tr><td>Antibiyotik-Antimikotik</td><td>Gibco</td><td>15240096</td><td>takviyesi hasat ortamı</td></tr><tr><td>BioMed Berrak Reçine (Form 3)</td> <td>Platform + inkübasyon plakası için kullanılan</td> <td>FormLabs</td><td>RS-F2-BMCL-01</td> reçinesi</tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma</td><td>A7906-500g</td><td>Engelleme Çözümü bileşeni</td></tr><tr>Kaydırıcı <td>kesmek için kullanılan</td> <td>dökme akrilik 1/32 "kalınlığında</td><td></td><td></td> malzeme</tr><tr><td>CleanStation DT3&nbsp;</td><td>Stratasys</td><td>DT3</td><td>yükseklik ayarlayıcı ve dış kapak</td></tr><tr><td>için son işlem Konteyner, Numune&nbsp;</td><td>McKesson</td><td>870203</td><td>doku transferinin çalışma masasından hazırlık masasına</td></tr><tr><td>CorelDraw&nbsp;</td><td>Lazer kesim için vektör tabanlı tasarım dosyasını hazırlamak için</td> <td>CorelDRAW</td><td></td> Yazılımı</tr><tr><td>Cytofix</td><td>BD Bioscience</td><td>554655</td><td></td></tr><tr><td>Sabitleyici Çanak 15 cm</td> Montaj sırasında kullanılan <td>Falcon</td><td>353025</td><td>çanağı</td></tr><tr><td>Çanak 35 mm No. 1.5 Lamel 14 mm Cam Çapı Kaplamasız</td><td>Matek</td><td>P35G-1.5-14-C</td><td>görüntüleme kabı</td></tr><tr><td>DMEM (glikozsuz)</td><td>Gibco</td><td>11966025</td><td>hasat ortamı</td></tr><tr><td>Fc Block</td><td>BD Bioscience</td><td>564220</td><td>engelleme çözümü bileşeni</td></tr><tr><td>Form 3B+</td><td>Formlabs</td> <td>Platform + inkübasyon plakası için kullanılan</td><td>Form 3B+</td>yazıcı</tr><tr><td>Form Cure</td><td>Formlabs</td><td>FH-CU-01</td><td>platform + inkübasyon plakası için işlem sonrası</td></tr><tr><td>Form Wash</td><td>Formlabs</td><td>FH-WA-01</td><td>platform + inkübasyon plakası</td></tr> <tr>için son işlem<td>GrabCAD Print</td><td>GrabCAD</td><td>GrabCAD Print</td><td>Stratasys yazıcılar için model hazırlamak için Yazılım</td></tr><tr><td>Hoechst 33342 10 mg/mL</td><td>Biotium</td><td>40046</td><td>nükleer boya</td></tr><tr><td>J826 Prime 3D Yazıcı</td><td>Stratasys</td><td>J826</td><td>yazıcı yükseklik ayarlayıcı ve dış kapak için kullanılır</td></tr><tr><td>LAS X</td><td>Leica</td><td>LAS X</td><td>Confocal yazılımı</td></tr><tr><td>Lazer kesim sistemi&nbsp;</td><td>Üniversal Lazer Sistemleri</td><td>ULS PLS6.150D</td><td>CO2 Kaydırıcı için kullanılan lazer kesim</td></tr><tr><td>Lityum Borhidrit</td><td>STREM Chemicals</td><td>93-0397</td><td>ağartma kimyasalı</td></tr><tr><td>PBS, pH 7.4</td><td>Gibco</td><td>10010023</td><td>baz Yıkama, blokaj, boyama için</td></tr><tr><td>tampon PreForm</td><td>FormLabs</td><td>Formlab yazıcılar için modeller hazırlamak için</td><td>PreForm</td> Yazılımı</tr><tr><td>İpek sütürler&nbsp; 2-0&nbsp;</td><td>Ethicon</td><td>A305. O35</td><td>platforma doku yapıştırma</td></tr><tr><td>Stellaris 8 WLL konfokal mikroskop</td><td>Leica</td><td>STELLARIS 8</td><td>Konfokal Görüntüleme&nbsp;</td></tr><tr><td>Şırınga filtre</td><td></td><td></td><td>filtresi ab çözeltisi</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>American Bio</td><td>AB02025-00100</td><td>geçirgenleştirici reaktif, bloke edici çözelti bileşeni</td></tr><tr><td>Vero ContactClear</td><td>Stratasys</td><td>CTT610, yükseklik</td><td>ayarlayıcı ve dış kapak için kullanılan</td>4 KG reçine</tr><tr><td>Isıtma Tepsisi Yayı</td><td>ABD</td><td>ST-1220</td><td>ortamı ve dokuyu sıcak tutar</td></tr><tr><td>Damıtılmış su</td><td>LiBH4 için Gibco</td><td>15230-170</td><td>seyreltici</td></tr></tbody></table>

yinelemeli beyazlatma genişletilmiş Çokluk yaklaşımı kullanılarak tümör taşıyan dokunun üç boyutlu görüntülenmesi

Three-Dimensional Imaging of Tumor-Bearing Tissue Using the Iterative Bleaching Extends Multiplexity Approach

Periton, karın duvarının yüzeyini kaplayan ve karın organlarının yüzeyleriyle bitişik olan 1 mm'den daha az kalınlıkta zarlı bir yapıdır. Yüzey mezotelyum ve yağ hücreleri, lenfositler, makrofajlar ve fibroblastların yanı sıra kan ve lenfatik damarlar ile serpiştirilmiş alttaki bağ dokusundan oluşur. Peritoneal maligniteler en sık abdominal tümör metastazlarından kaynaklanır (ör., yumurtalık kanseri veya mide kanseri)18 veya daha az sıklıkla, peritonun primer tümörleri olabilir (ör., mezotelyoma)19. Bu genellikle küçük (&lt;1 cm) tümör lezyonları oldukça karmaşıktır, ancak belirtilen teknik kullanılarak 3D karakterizasyona uygundur. Bir platforma monte edilmiş numunenin tamamını görüntülemek için maksimum beş konfokal bölümden oluşan bir projeksiyon kullanılır (Şekil 4, sol üst köşede iç kısım). IBEX'in ilk turu için üç birincil konjuge antikor (AF488-CD44, AF594-CD45 ve AF647-Podoplanin) nükleer boya Hoechst ile birlikte kullanıldı (IBEX1, Şekil 4). Tümör lezyonları, CD44 ve Podoplanin için çift pozitif olan ve papiller mezotelyoma karakteristiği olan çekirdek düzenlemesini gösteren rozet benzeri yapılarla belirginleşir.
Tümör hücreleri, hem anti-Podoplanin hem de anti-CD44, anti-Podoplanin yoluyla lenfatik damarların saptanması ve CD44 antikorunun bağışıklık hücrelerinin alt kümelerine bağlanmasıyla kanıtlandığı gibi, tümör morfolojisi ve iki antikor kullanılarak tanımlandı. Daha küçük ilgi alanları (ROI'ler) daha sonra 3D projeksiyonları işlemek için optimize edilmiş Z adımı boyutlarında daha yüksek çözünürlükte bir döşeme tarama formatı kullanılarak yakalanır (Şekil 5A). Platformlar yinelemeli boyama prosedürlerinden geçirildi ve aynı ROI'ler IBEX döngüleri 1-6'da görüntülendi. Tümör (sarı kutu) ve tümör-üçüncül lenfoid yapı (TLS) arayüzleri (mavi kutu) için temsili görüntüler Şekil 5B-M'de birleştirilmiştir. 
TLS'nin varlığı ve CD3 pozitif hücrelerin yoğunluğu, önemli immün hücre infiltrasyonunu20 ve muhtemelen immünomodülatör ilaçlara21 yanıtı gösterir. Dikkat çekici bir şekilde, TLS ve tümör lezyonlarının büyük kısmı, Şekil 6'daki farklı optik bölümlerin yığın projeksiyonlarının karşılaştırılmasında gösterildiği gibi, dokunun farklı Z-derinliklerinde bulunur ve 3D görüntülemenin faydalarını ve 2D görüntüleme 3D yapılara uygulandığında potansiyel gözden kaçan biyolojiyi vurgular. Bu lezyonların 3 boyutlu karakteri, Şekil 5'teki tek tek lezyonların hacim görüntülerini gösteren film dosyalarında (Film 1-12) daha belirgin hale gelir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67869/67869fig01.jpg"> 
Şekil 1: Periton tümörlerinin 3D baskıdan 3D görüntülemesine kadar iş akışı. Protokol, tümör taşıyan periton dokusundan 3D çoğullanmış görüntüler hazırlamak için beş adımdan oluşan bir diziden oluşur. (1) Doku alıcı platformların, görüntüleme adaptörü parçalarının ve inkübasyon plakasının yazdırılması. (2) Doku temini ve montaj işlemleri. (3) Paraformaldehit ile fiksasyon. (4) IBEX boyama ve görüntüleme döngüleri. (5) Görüntüleme yazılımı kullanarak 3D rekonstrüksiyon. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/67869fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67869/67869fig02.jpg"> 
Şekil 2: 3D görüntüleme için doku arayüzlü donanım bileşenleri. (A) Görüntüleme adaptörü içindeki platform montajının şematik diyagramı. (B) 9 oyuklu bir inkübasyon plakası. (C) Montajlı görüntü adaptörü bileşenlerinin fotoğrafları. (D) Tanısal laparoskopi sırasında gözlenen mezotelyoma taşıyan periton. (E) Dokunun platforma monte edilmesi. (F,G) Platformlara monte edilmiş tümör taşıyan periton. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/67869fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67869/67869fig03.jpg"> 
Şekil 3: IBEX döngülerinin zaman çizelgesi şeması. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/67869fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67869/67869fig04.jpg"> 
Şekil 4: IBEX1 paneli ile inkübasyon sonrası platforma genel bakış. IBEX1 paneli (Hoechst, AF488-CD44, AF594-CD45 ve AF647-Podoplanin) ile inkübasyonun ardından tüm platformun maksimum projeksiyonu. Kesikli daire tümörü vurgular. Ek: Görüntüleme platformuna monte edilmiş tümör taşıyan peritonun fotoğrafı. Ölçek çubuğu: 1 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/67869fig04large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67869/67869fig05.jpg"> 
Şekil 5: Belirli platform bölgelerinin yüksek çözünürlüklü immünofloresan görüntüleri. (A) IBEX1 paneli (Hoechst, AF488-CD44, AF594-CD45 ve AF647-Podoplanin) ile inkübasyonun ardından elde edilen birleştirilmiş 56 döşemeli Z-yığını görüntüsünün maksimum projeksiyonu. Sarı dikdörtgen: panellerde gösterilen tümör lezyonu (B-G). Mavi dikdörtgen: (HM) 'de gösterilen tümör-üçüncül lenfoid yapı arayüzü. (B-G) Hacim oluşturmada IBEX panel 1-6 ile tek bir tümör lezyonu. (B) IBEX1, yeşil: CD44, kırmızı: CD45, camgöbeği: Podoplanin. (C) IBEX2, yeşil: CD20, kırmızı: F-aktin, camgöbeği: CD3. (D) IBEX3, yeşil: CD8, kırmızı: CD4, camgöbeği: panCK. (E) IBEX4, yeşil: CD31, camgöbeği: CD68. (F) IBEX5, yeşil: CD206, camgöbeği: Calretinin. (G) IBEX6, yeşil: Vimentin, kırmızı: HLADR. (H-M) Hacim oluşturmada IBEX panel 1-6 ile bir ayrı tümör-üçüncül lenfoid yapı arayüzü. (H) IBEX1, yeşil: CD44, kırmızı: CD45, camgöbeği: Podoplanin. (I) IBEX2, yeşil: CD20, kırmızı: F-aktin, camgöbeği: CD3. (J) IBEX3, yeşil: CD4, kırmızı: panCK, camgöbeği: CD8. (K) IBEX4, yeşil: CD31, kırmızı: SMA, camgöbeği: CD68. (L) IBEX5, yeşil: CD206, camgöbeği: Calretinin. (M) IBEX6, yeşil: HLADR, camgöbeği: Vimentin. Tüm paneller, mavi: Hoechst. Ölçek çubukları: (A, 1 mm); (BM, 250 μm). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/67869fig05large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67869/67869fig06.jpg"> 
Şekil 6: Simüle edilmiş 2D görüntüleme. Sınırlı (10 optik bölüm) ve tam yığın (102 optik bölüm) projeksiyonların karşılaştırılması, 2D simülasyonda doku bağlamı kaybını doğrular. (A) 30-40 (10 μm) kesitlerin maksimum projeksiyonu. (B) 85-95 (10 μm) kesitlerinin maksimum projeksiyonu. (C) Bölüm 1-102'nin maksimum projeksiyonu (~100 μm). Tüm paneller, IBEX2 (Hoechst, AF488-CD20, AF647-CD3, AF790-phalloidin). Ölçek çubuğu: 200 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/67869fig06large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Tablo 1: Bireysel IBEX panelleri için kullanılan antikorlar. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Table%201_IBEX%20panels.xlsx" target="_blank">Bu Tabloyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Film 1: IBEX panel 1 ile tek tek lezyonun animasyonlu hacim sunumu (mavi: Hoechst, yeşil: CD44, kırmızı: CD45, camgöbeği: Podoplanin). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie1_IBEX1.mp4" target="_blank">Bu filmi indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Film 2: IBEX panel 2 ile bireysel lezyonun animasyonlu hacim sunumu (mavi: Hoechst, yeşil: CD20, kırmızı: F-aktin, camgöbeği: CD3). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie2_IBEX2.mp4" target="_blank">Bu filmi indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Film 3: IBEX panel 3 ile bireysel lezyonun animasyonlu hacim sunumu (mavi: Hoechst, yeşil: CD8, kırmızı: CD4, camgöbeği: panCK). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie3_IBEX3.mp4" target="_blank">Bu filmi indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Film 4: IBEX panel 4 ile bireysel lezyonun animasyonlu hacim sunumu (mavi: Hoechst, yeşil: CD31, camgöbeği: CD68). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie4_IBEX4.mp4" target="_blank">Bu filmi indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Film 5: IBEX panel 5 ile tek tek lezyonun animasyonlu hacim görüntüsü (mavi: Hoechst, yeşil: CD206, camgöbeği: Calretinin). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie5_IBEX5.mp4" target="_blank">Bu filmi indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Film 6: IBEX panel 6 ile bireysel lezyonun animasyonlu hacim sunumu (mavi: Hoechst, yeşil: Vimentin, kırmızı: HLADR). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie6_IBEX6.mp4" target="_blank">Bu filmi indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Film 7: IBEX panel 1 ile üçüncül lenfoid yapı-lezyon arayüzünün animasyonlu hacim sunumu (mavi: Hoechst, yeşil: CD44, kırmızı: CD45, camgöbeği: Podoplanin). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie7_TLS_IBEX1.mp4" target="_blank">Bu filmi indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Film 8: IBEX panel 2 ile üçüncül lenfoid yapı-lezyon arayüzünün animasyonlu hacim sunumu (mavi: Hoechst, yeşil: CD20, kırmızı: F-aktin, camgöbeği: CD3). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie8_TLS_IBEX2.mp4" target="_blank">Bu filmi indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Film 9: IBEX panel 3 ile üçüncül lenfoid yapı-lezyon arayüzünün animasyonlu hacim sunumu (mavi: Hoechst, yeşil: CD8, kırmızı: CD4, camgöbeği: panCK). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie9_TLS_IBEX3.mp4" target="_blank">Bu filmi indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Film 10: IBEX panel 4 ile üçüncül lenfoid yapı-lezyon arayüzünün animasyonlu hacim sunumu (mavi: Hoechst, yeşil: CD31, kırmızı: SMA, camgöbeği: CD68). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie10_TLS_IBEX4.mp4" target="_blank">Bu filmi indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Film 11: IBEX panel 5 ile üçüncül lenfoid yapı-lezyon arayüzünün animasyonlu hacim sunumu (mavi: Hoechst, yeşil: CD206, camgöbeği: Calretinin). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie11_TLS_IBEX5.mp4" target="_blank">Bu filmi indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Film 12: IBEX panel 6 ile üçüncül lenfoid yapı-lezyon arayüzünün animasyonlu hacim sunumu (mavi: Hoechst, yeşil: Vimentin, kırmızı: HLADR). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie12_TLS_IBEX6.mp4" target="_blank">Bu filmi indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Dosya 1: İnkübasyon plakası için dosyayı yazdırın. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/incubation_plate.form" target="_blank">Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Dosya 2: 36 ayrı platform için dosyayı yazdırın. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/platform_x36.form" target="_blank">Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Dosya 3: Yükseklik ayar halkası için file yazdırın. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/SMART_imaging_heightAdjuster.STL" target="_blank">Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Dosya 4: Dış kapak için dosyayı yazdırın. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/SMART_imaging_petriDishLid_35mm.STL" target="_blank">Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Dosya 5: Kaydırıcı için lazer kesim dosyası. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/imaging_platform_slider.DWG" target="_blank">Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Yinelemeli Beyazlatma Genişletilmiş Çokluk Yaklaşımı kullanılarak tümör taşıyan dokunun üç boyutlu görüntülenmesi

The spatial heterogeneity of the tumor microenvironment (TME) is a critical determinant of therapeutic response, particularly for immune-oncology agents, ...

three-dimensional-imaging-tumor-bearing-tissue-using-iterative

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Etiketli hücreleri çok foton mikroskobu ile dil içinde ağız kanseri ve tümör invazyonu niceliksel olarak izlenmesi bir fare modeli üreten yer alan tekniklerin kapsamlı bir bakış sunulmaktadır. Bu sistem, anti-invaziv bileşiklerin moleküler değerlendirme ve ilaç etkinliği için faydalı bir platform olarak hizmet verebilir.

Oral Skuamöz Hücre Karsinomu Ortotopik Fare Modeli Tümör Hücre Invasion Multi-foton Görüntüleme

Kompleks doku kitleleri, organlardan tümörler, çeşitli hücresel elemanların oluşmaktadır. Bu hücre köken hem de protein ekspresyonu göre hücre özelliklerini deşifre spektral unmixing ardından çok parametreli immünofloresan boyama ile bir arada çok etiketli floresan transgenik fareler kullanılarak bir doku içinde hücre fenotipleri katkısını açıklanacaktır.

Hücre Origins, Türleri ve Etkileşimler Görselleştirme için Floresan Doku Nakli ardından Kantitatif Çokspektrumlu Analizi

Hematopoetik kök hücrelerin işaretleme Kombinatoryel 5 floresan proteinleri rejenerasyon sırasında kemik iliği hematopoetik mimarisi içine anlayışlar, confocal ve iki foton mikroskopi ile in vivo klonal izleme sağlar. Bu yöntem nakli aşağıdaki kapsamlı bir süre için sağlam dokularda spektral kodlu HSPCs kökenli hücrelerin non-invaziv kader haritalama sağlar.

Eşodaklı ve multiphoton Mikroskopi kullanarak beş Floresan Proteinleri ile işaretlenmiş Hematopoetik kök hücrelerin in vivo klonal Takip

Bu protokol, tek bir hücre çözünürlükte in vivo olarak, gerçek zamanlı olarak çok-etkileşimlerin uzatılmış zaman atlamalı görüntüleme gerçekleştirmek için multiphoton mikroskobu kullanımını tarif eder.

Tümör mikroçevresinde Gerçek zamanlı Multisellüler Dynamics Genişletilmiş Time-lapse intravital Görüntüleme

Burada, aynı yaşam hayvanında invazif cerrahi müdahalenin (örn. biyopsi) önce ve sonra beyin tümörü hücrelerinin yüksek çözünürlüklü zaman aşımı multifoton görüntüleme yöntemi açıklanmaktadır. Bu yöntem, bu invaziv cerrahi prosedürlerin tümör hücrelerinin migrasyon, invazif ve proliferatif davranışlarının tek bir hücre seviyesinde etkisini inceleyerek sağlar.

Invaziv cerrahi biyopsiye yanıt olarak beyin tümörü hücre davranışının boyuna Intravital görüntüleme

İntravital mikroskopi bulgularının translasyonu, dokuya sığ derinlik penetrasyonu ile karşı karşıyadır. Burada, intravital mikroskopi bulgularının klinik translasyonunu potansiyel olarak kolaylaştıran, doğrudan uzamsal korelasyon için intravital mikroskopi ve klinik olarak uygulanabilir görüntüleme modalitelerinin (örneğin, BT, MRI) birlikte kaydedilmesini sağlayan bir dorsal pencere odası fare modelini açıklıyoruz.

Translasyonel Kanser Araştırmalarında Kombine İntravital Mikroskopi ve Manyetik Rezonans Görüntüleme için Dorsal Deri Kıvrımlı Pencere Odası Tümör Fare Modeli

Burada, tiroid yapısal ve fonksiyonel bilgilerinin senkron görüntülenmesini sağlayan çok düzlemli 3D rekonstrüksiyon ve renkli Doppler füzyonunu birleştiren bir 5D ultrason tekniği sunuyoruz. Kör noktaları en aza indirerek, bu yöntem, özellikle acemi pratisyenlere fayda sağlayarak, tanısal doğruluğu artırmak için lezyonların hızlı ve kesin lokalizasyonuna izin verir.

Tiroid Lezyonlarının Kesin ve Hızlı Lokalizasyonu için Renkli Doppler Haritalama ile Entegre Senkron Triplanar Rekonstrüksiyon

Murin tümörlerinin kantitatif 3D oksijen haritaları, Pulse Elektron Paramanyetik Rezonans kullanılarak noninvaziv olarak görüntülendi. Anatomi ve vasküler yapı için ultrason B-mod ve Power Doppler kullanıldı. Her iki modaliteden alınan görüntüler üst üste bindirilerek multi-parametrik tümör analizi sağlandı.

Tümör Hipoksi Değerlendirmesi: Elektron Paramanyetik Rezonans ile İn Vivo 3D Oksijen Görüntüleme 

Burada, ticari olarak temin edilebilen, otomatik doku boyalayıcıları ve tiramid sinyal amplifikasyonu bazlı reaktiflerin kullanımı için optimizasyon hususlarını kullanan Yinelemeli Ağartma Çokluğu Uzatır (IBEX) yönteminin uygulamasını açıklıyoruz.

Yinelemeli Ağartma, Çekirdek Tesisler için Boyama Otomasyonu Kullanımıyla Çeşitliliği Artırıyor

Manuel IBEX yöntemi ile düşük maliyetli, çok yönlü bir foto ışınlama tekniğinin uygulanması, önemli doğal otofloresan ile insan dokusunun en iyi şekilde görüntülenmesini sağlar. Bu protokol, ters çevrilmiş bir mikroskop, yaygın olarak bulunan reaktifler ve görüntü hizalama ve işleme için açık kaynaklı yazılım kullanılarak arşivlenmiş klinik örneklerden çoğullanmış, tam slayt görüntülerinin nasıl elde edileceğini ayrıntılarıyla açıklar.

Yinelemeli Beyazlatma için Optimize Edilmiş İş Akışı, Yüksek Otofloresan Klinik Numunelerin Çok Yönlü Görüntülemesini Genişletir

Spektral Yinelemeli Ağartma Çoklamayı Genişletir (IBEX), spesifik olmayan bağlanmayı en aza indirmek için heparin blokajı ekleyerek ve otofloresansı bastırmak için hesaplamalı karıştırma ile spektral algılamadan yararlanarak temel IBEX tekniğini temel alır. Bu yaklaşım, arka plan kaynaklarını azaltırken görüntü elde etmeyi hızlandırır ve sağlam, çok yönlü, yüksek parametreli uzamsal proteomik analizlere olanak tanır.

Spesifik Olmayan Doku Floresansını En Aza İndirmek için Spektral Konfokal Mikroskopi Kullanılarak Yüksek Pleks Görüntüleme

Öğrenin, yinelemeli beyazlatma genişletilmiş çokluk yaklaşımı ile peritoneal metastazların üç boyutlu mimarisini karakterize etme yöntemini. Bu protokol, tümör mikroçevresinin analizi için bağışıklık tedavisi araştırmalarında değerli bilgiler sunar.

Yinelemeli Beyazlatma Genişletilmiş Çokluk Yaklaşımı kullanılarak tümör taşıyan dokunun üç boyutlu görüntülenmesi

Daha fazla video keşfet