Name: Düşük Yoğunluklu Nötrofillerin Verimli Saflaştırılması için Hızlı Manyetik-mikro Boncuk Yöntemi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-11T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 14 s
Description: Öğrenin, manyetik-mikro boncuk yöntemiyle periferik kandan düşük yoğunluklu nötrofillerin hızlı ve verimli saflaştırılmasını. Bu teknik, immünoloji ve hastalık mekanizmaları araştırmalarında yüksek saflıkta ve canlı hücre elde edilmesini sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>&nbsp; Anti-Sitrullin tavşan poliklonal antikor</td><td>AbCam</td><td>AB100932</td><td>1/50 seyreltme</td></tr><tr><td>96 kuyuklu doku kültürü plakası</td><td>Yardımcı oyuncu; Corning, Inc.</td><td>3596</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 insan karşıtı CD11b fare IgG1 antikoru</td><td>BioLegend</td><td>301317</td><td>0.25 &mu; g/mL</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 insan karşıtı CD66b fare IgM antikoru</td><td>BioLegend</td><td>305109</td><td>0.05 &mu; g/mL</td></tr><tr><td>Fare Karşıtı IgG (H+L) keçi antikoru, Alexa Fluor 488</td><td>Invitrogen - Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11001</td><td>1/50 seyreltme</td></tr><tr><td>Anti-Nötrofil Elastaz fare monoklonal IgG1 antikoru</td><td>Santa Cruz Biyoteknolojisi</td><td>SC-55549</td><td>10 &micro; g/mL</td></tr><tr><td>Anti-Tavşan IgG (H+L) eşek antikoru, Alexa Fluor 555</td><td>Invitrogen - Thermo Fisher Scientific</td><td>A-31572</td><td>1/50 seyreltme</td></tr><tr><td>APC anti-insan CD62L fare IgG1 antikoru</td><td>BioLegend</td><td>304809</td><td>0.03 &mu; g/mL</td></tr><tr><td>APC/Siyanin7 insan karşıtı CD14 fare IgG1 antikoru</td><td>BioLegend</td><td>367107</td><td>0.25 &mu; g/mL</td></tr><tr><td>Attune NxT akış sitometresi&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>(mavi/kırmızı lazerler)</td><td></td></tr><tr><td>Sığır serum albümini (BSA) Fraction V</td><td>MP Biyomedikal</td><td>810025</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Violet 510 insan karşıtı CD33 fare IgG1 antikoru</td><td>BioLegend</td><td>366609</td><td>0.30 &mu; g/mL</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Calbiochem/EMD Millipore</td><td>268298</td><td></td></tr><tr><td>Dextran T500</td><td>Farmakosmolar Klima</td><td>5.51005E+11</td><td></td></tr><tr><td>Dihidrorodamin-123</td><td>Anaspec, Inc.</td><td>AS-85711</td><td></td></tr><tr><td>FACS hücre sorucu</td><td>Becton Dickinson&nbsp;</td><td>Model FACSAria</td><td></td></tr><tr><td>Fetal sığır serumu (FBS)</td><td>Gibco</td><td>16000-044</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll-Paque</td><td>Merck KG</td><td>GE 17-1440-03</td><td></td></tr><tr><td>FITC anti-insan CD98 fare IgG1 antikoru</td><td>BioLegend</td><td>315603</td><td>0.30 &mu; g/mL</td></tr><tr><td>FlowJo Software</td><td>Becton Dickinson</td><td>Sürüm 10, 2019</td><td></td></tr><tr><td>Flüoresans ters mikroskop</td><td>Olympus</td><td>Model IX-70</td><td></td></tr><tr><td>Heparin</td><td>Inhepar - PiSA Farmaceutica</td><td>3660149</td><td>5000 UI/mL</td></tr><tr><td>Hepes</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H7006</td><td></td></tr><tr><td>MACSprep Chimerism CD66b Mikroboncuklar</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-111-552</td><td></td></tr><tr><td>Mıknatıs</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-102</td><td></td></tr><tr><td>Manyetik ayırma kolonu</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>Mikrosantrifüj</td><td>Eppendorf</td><td>Model 5415C</td><td></td></tr><tr><td>Microplate okuyucu</td><td>BioTek Instruments</td><td>Model Sinerjisi HT</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit</td><td>Sigma Aldrich</td><td>158127</td><td></td></tr><tr><td>PE anti-insan CD10 fare IgG1 antikoru</td><td>BioLegend</td><td>312203</td><td>0.05 &mu; g/mL</td></tr><tr><td>PE anti-insan CD16b fare IgG2a antikoru</td><td>BD Pharmingen</td><td>550868</td><td>1/40 seyrelme</td></tr><tr><td>PE/Siyanin5 anti-insan CD15 fare IgG1 antikoru</td><td>BioLegend</td><td>323013</td><td>0.25 &mu; g/mL</td></tr><tr><td>Phorbol 12-miristat 13-asetat (PMA)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P8139</td><td></td></tr><tr><td>Poli-L-Lisin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P2658</td><td></td></tr><tr><td>Soğutmalı santrifüj</td><td>Eppendorf</td><td>Model 5702R</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640 doku kültürü ortamı</td><td>Gibco</td><td>23400-021</td><td></td></tr><tr><td>SYTOX Yeşil</td><td>Molecular Probes, Inc.</td><td>S-7020</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P2287</td><td></td></tr><tr><td>Vectashield</td><td>Vektör Laboratuvarları</td><td>H-1000</td><td></td></tr></tbody></table>

düşük yoğunluklu nötrofillerin verimli saflaştırılması için hızlı manyetik-mikro boncuk yöntemi

Rapid Magnetic-microbead Method for Efficient Purification of Low-density Neutrophils

Sağlıklı bireylerde düşük yoğunluklu nötrofiller (LDN), PBMC'nin yaklaşık% 5'ini temsil eder (Şekil 2A). Burada açıklanan protokol tipik olarak saf (%90'&gt;) LDN sağlar. Hücreler ayrıca yüksek canlılık (%98) ile verimli bir şekilde geri kazanılır (%&gt; %95 verim); Şekil 2B). Karşılaştırma için, LDN ayrıca daha önce tarif edildiği gibi floresanla aktive olan hücre sıralaması ile saflaştırıldı22. Kısaca, P...

Düşük Yoğunluklu Nötrofillerin Verimli Saflaştırılması için Hızlı Manyetik-mikro Boncuk Yöntemi

Neutrophils, important leukocytes of innate immunity, have traditionally been considered a homogeneous cell population. Nevertheless, recent evidence has ...

rapid-magnetic-microbead-method-for-efficient-purification-low

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Nötrofiller inflamatuar immün yanıt sitesinde ulaşmak için ilk hücreleri arasında olup, görevlerini ve mekanizmalar in vitro yoğun çalışmalar yapılmıştır. Biz piyasada bulunan ayırma medya kullanılarak, tam kan, insan nötrofil izole etmek için standart bir yoğunluk gradiyenti ayırma yöntemi göstermektedir.

Nötrofil İzolasyon Protokolü

Video, immünomanyetik hedefleme ve periferik kan mononükleer hücre süspansiyonundan ayırma yoluyla B hücrelerini saflaştırmanın bir yolunu açıklıyor. Yöntem, istenmeyen hücre tiplerinin, manyetik ayırma yoluyla heterojen hücre süspansiyonundan tükenecek olan spesifik hücre yüzey proteinlerini hedefleyen spesifik antikorlar veya ligandlar (manyetik parçacıklara bağlı) ile etiketlenmesini içerir.

Negatif İmmünomanyetik Seçim: Periferik Kan Mononükleer Hücrelerinden B Hücrelerini Saflaştırmak İçin Bir Yöntem

Bu videoda, düşük yoğunluklu nötrofillerin veya LDN'lerin ameliyat sonrası bir insan hastanın periton lavaj sıvısından izole edilmesi prosedürünü açıklıyoruz. Bu şekilde elde edilen LDN'ler, tümör büyümesi ve ilerlemesindeki rollerini anlamak için daha sonraki aşağı akış deneylerinde kullanılabilir.

Peritoneal Düşük Yoğunluklu Nötrofil İzolasyonu: Manyetik Aktif Hücre Sıralaması Kullanılarak Peritoneal Lavaj Sıvısından Düşük Yoğunluklu Nötrofiller Elde Etme Tekniği

Bir yoğunluk dereceli santrifüj yoluyla ve CellTracker boyalar kullanılarak nötrofil etiketlemesi için fare kemik iliğinden nötrofillerin izolasyonu ve saflaştırılması için bir protokol açıklamaktadır. Bu aşağı fonksiyonel çalışmalar ya da evlatlık transferi ve izleme deneyler için nötrofil çok sayıda elde etmek için basit, hızlı, tekrarlanabilir ve ekonomik yöntem temsil eder.

İzolasyon, Arıtma ve İşlevsel Araştırmalar ve Kabul edilmiş Transfer deneyler için Fare Kemik İliği Nötrofiller Etiketlenmesi

Nötrofiller sadece istilacı mikroorganizmalara karşı konak savunmasında değil, aynı zamanda tümör hücrelerinin immün sürveyansında da önemli bir rol oynarlar. Burada, anti-tümör özelliklere sahip nötrofillerin izolasyonu ile ilgili teknikleri ve in vitro ve in vivo olarak anti-tümör nötrofil fonksiyonunu izleme yöntemlerini açıklıyoruz.

Anti-tümör özelliklere sahip izole edilmesi ve nötrofil Karakterizasyonu

Nötrofiller en bol bulunan beyaz kan hücresi türüdür. Nötrofillerin insan kanından yoğunluk gradyan ayırma yöntemi ile izolasyonu ve insan promiyelositik (HL60) hücrelerinin granülositik yol boyunca farklılaşması burada açıklanmaktadır; lenfoma hücrelerinin anti-lenfoma ajanlarına duyarlılığı üzerindeki rolünü test etmek.

Nötrofil İzolasyon ve Analiz Terapötik Ajanların için Lenfoma Hücre Duyarlılık kendi Rolü belirleme

Lösin bakımından zengin tekrarlayan kiaz 2 genindeki (LRRK2) mutasyonlar kalıtsal Parkinson hastalığına neden olur. İnsan periferik kan nötrofillerinde Rab10'un LRRK2 kontrollü fosforilasyonunun değerlendirilmesi için kolay ve sağlam bir yöntem geliştirdik. Bu artmış LRRK2 kinaz yolu aktivitesi olan bireylerin belirlenmesine yardımcı olabilir.

Rab10 Fosforilasyon Değerlendirilmesi tarafından Parkinson İlişkili LRRK2 Kinas yolu Sorgulama için İnsan Periferik Kan Nötrofil İzolasyon

Bu protokol, nötrofillerin tam kan, buffy coats veya lökferez zarlarından izole edilmesinin, iyi verim, yüksek saflık ve minimum hücre aktivasyonu elde edilmesinin bir yöntemini detaylandırmaz. Yüksek kaliteli/saflıkta nötrofil preparatı elde etmek için gradyan saflaştırma, kırmızı kan hücresi (RBC) sedimilasyonu ve RBC lizizini kullanıyoruz.

İnsan Nötrofillerinin Tam Kan ve Buffy Coats'tan İzolasyonu

Bu araştırma, sıçan kemik iliğinden bol miktarda nötrofil hücre dışı tuzakları (NET'ler) izole etmek için iki tekniği özetlemektedir. Bir yöntem, ticari bir nötrofil izolasyon kitini yoğunluk gradyanlı santrifüjleme ile birleştirirken, diğeri yalnızca yoğunluk gradyanlı santrifüjlemeyi kullanır. Her iki yaklaşım da periferik kan nötrofillerinden daha iyi fonksiyonel NET'ler verir.

Karşılaştırılabilir Kapasiteye Sahip Sıçan Kemik İliği Nötrofillerini İzole Etmek için Benzersiz Yaklaşım

Bu protokol, biyobankacılık ve diğer amaçlar için insan periferik kan mononükleer hücrelerini izole etmek için yüksek verimli otomasyonla uyumlu bir yöntemi detaylandırır.

İnsan Periferik Kan Mononükleer Hücrelerinin Buffy Coats'tan Yüksek Verimli İmmünomanyetik Boncuk Ayırma ile İzole Edilmesi

Burada, manyetik izolasyon (negatif seçim) ve süreksiz yoğunluk gradyan ortamı kullanarak düşük ve normal yoğunluklu nötrofillerin tam kandan izole edilmesi için güvenilir bir yaklaşım sunuyoruz. Yüksek saflıkta hücrelerin (%≥93) el değmeden izolasyonunu sağlayarak, sağlık ve hastalıktaki rollerini anlamak için çok önemli olan nötrofil alt popülasyonlarının doğru aşağı akış analizini kolaylaştırır.

Tam Kandan Düşük ve Normal Yoğunluklu Nötrofillerin İzolasyonu ve Karakterizasyonu

Öğrenin, manyetik-mikro boncuk yöntemiyle periferik kandan düşük yoğunluklu nötrofillerin hızlı ve verimli saflaştırılmasını. Bu teknik, immünoloji ve hastalık mekanizmaları araştırmalarında yüksek saflıkta ve canlı hücre elde edilmesini sağlar.

Düşük Yoğunluklu Nötrofillerin Verimli Saflaştırılması için Hızlı Manyetik-mikro Boncuk Yöntemi

Daha fazla video keşfet