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Prueba genética para los alimentos modificados
 

Prueba genética para los alimentos modificados

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Los alimentos genéticamente modificados son productos que contienen un ingrediente o ingredientes cuyo ADN ha sido alterado específicamente. Presencia de estas modificaciones puede ser detectado usando una técnica llamada reacción en cadena de la polimerasa.

Modificación genética de los alimentos ha sido una cuestión controvertida debido a problemas de debates sobre salud y seguridad ambiental. La capacidad de detectar genéticamente alterada ADN en muestras de alimentos de interés permite para tomar decisiones educadas sobre los peligros de seguridad y el potencial de usar genéticamente modificado organismos u OMG, suministros de alimentos.

La reacción en cadena de polimerasa, o PCR, es utilizado para amplificar alimentos ADN para determinar la presencia o ausencia de secuencias genéticamente modificadas. Electroforesis en gel de tira de ADN amplificado a través de una matriz de gel de agarosa y separa las bandas de DNA de diferentes tamaños que corresponden a los marcadores modificados o no modificados. Estos son entonces comparados con grupos control de los alimentos que contienen OGM, o sea modificación libre.

Este video ilustra los principios de detección de ADN modificado genéticamente de los alimentos las muestras, cómo extraer ADN y amplificación de marcadores utilizados en el proceso de modificación genética y cómo se puede establecer la presencia o ausencia de OGM en muestras de alimentos.

Reacción en cadena de polimerasa identifica secuencias de ADN que se han insertado en los alimentos genéticamente modificados. El ADN es una molécula relativamente estable, así viable conveniente para la amplificación de fragmentos de ADN pueden ser aislados incluso de altamente procesados productos como frituras de maíz o hamburguesas vegetales.Un pequeño número de secuencias de ADN reguladoras se utiliza para controlar la expresión de los genes insertados, por lo que estas secuencias están presentes en la mayoría de los cultivos transgénicos. Este procedimiento identifica dos de los más comúnmente utilizados, el promotor del gen 35S y el gene del synthase del nopaline terminator. La secuencia de 35S es un promotor fuerte y cuando un gen insertado unidad constante, altos niveles de expresión. El terminador de la sintasa de nopaline es incluido para detener la transcripción del gen insertado en el punto final deseado.

Polimerización en cadena implica repetitivas de calefacción y refrigeración de ciclos en un termociclador, una máquina que controla bien la temperatura de los tubos de reacción de PCR. Calentar la muestra a 94 ° C produce filamentos de la DNA desnaturalizar y separar. Rápido enfriamiento a entre 45 y 65 °C permite cartillas templar a los filamentos de ADN separados. Finalmente, el calentamiento a 72 °C permite la enzima Taq polimerasa extiende los cebadores y la duplicación completa de la región de destino.

Planta comprada cartilla se agrega a cada muestra y amplificará en las muestras que contienen ADN de la planta. Plantillas positivo OMG 35S y NOS sirven para proporcionar un control positivo de los OMG. Un certificado no-GMO se utiliza como control negativo. Si cualquiera de estas reacciones de control muestran bandas inesperadas, puede confiables en los resultados de las muestras de prueba.

ADN amplificado se ejecuta a través de un gel de agarosa por electroforesis. Productos de PCR son mezclados con un colorante y cargados en pozos. ADN está cargado negativamente y cuando carga en el gel en el extremo del cátodo de la cámara se moverá hacia el final del ánodo cuando se aplica corriente. Grandes fragmentos de ADN no se pueden mover como fácilmente mediante el gel de matriz así quedará más cercana al cátodo, mientras que secuencias más pequeñas se mueven hacia el extremo del ánodo, dando por resultado la separación de ADN de diferentes tamaño en distintas bandas.

Después de la electroforesis, coloración del gel ayuda a visualizar bandas separadas de ADN.

Ahora que estamos familiarizados con los principios de detección de OGM y el uso de PCR y electroforesis para la identificación de organismos modificados genéticamente, echemos un vistazo de cómo esto puede llevarse a cabo en el laboratorio.

Una vez que se han identificado los productos de interés, el análisis pueden comenzar. Para extraer el ADN, tomar dos ciegas limpia tubos y en cada una de estas transferencia 500 μL del reactivo de aislamiento de ADN adquirido, asegurándose de pipetear la mezcla hacia arriba y hacia abajo entre alícuotas para mezclar uniformemente el reactivo. Etiqueta de uno de lo tubos "no-OGM" y la otra "prueba".

A continuación, pesar 0,5 g de alimentos no-GMO certificados y coloque en un mortero limpio. Añadir 2,5 mL de agua destilada y moler con el mortero por 2 min formar una mezcla. Añadir otro 2,5 mL de agua destilada y continuar moliendo la mezcla hasta que esté lo suficientemente suave para pipetear.

Pipetee 50 μL de la mezcla de no-GMO conocido para el "no-GMO" etiquetado ciegas tubo que contiene el reactivo de aislamiento de ADN. Ahora añadir 50 μL de la mezcla de muestra de alimentos de prueba a ciegas tubo marcado "Prueba". Vórtice los dos tubos que contienen las muestras de alimentos y reactivo de la DNA durante 1 minuto. A continuación, coloque los tubos en un baño de agua a 95 ° C durante 5 minutos. Finalmente, coloque los tubos en la centrífuga durante 5 minutos. Sobre la examinación, una pelotilla sólida debe ser formada en la parte inferior del tubo. Si no se forma una pelotilla después de 5 min, centrifugar nuevamente por intervalos de 2 min hasta que se forme de la pelotilla. Las muestras ahora pueden ser utilizadas inmediatamente para PCR o almacenadas en el refrigerador hasta por 1 semana.

Primeros, tubos PCR de número seis. Estos números corresponderán a los contenidos del tubo aparece en la tabla. Coloque cada uno de los tubos de PCR etiquetados en un porta de microtubo con las tapas abiertas.

Usando una punta nueva para cada adición, agregar 20 cartilla μL indicados en la tabla a cada tubo PCR. A continuación añadir 20 μL de las muestras de ADN indicada en la tabla a cada tubo PCR. Pipetee hacia arriba y hacia abajo para mezclar. Para muestras de alimentos peletizadas, asegúrese de pipeta sólo desde el sobrenadante y evitar el sólido precipitado en la parte inferior de los tubos. Por último, colocar los tubos PCR en un termociclador y programarlo a través de la calefacción y refrigeración los pasos indicados en la tabla.

Colocar un gel de agarosa al 3% en la cámara de electroforesis con los pozos más cercanos al extremo del cátodo. Añadir Tampón TAE en la cámara de cubierta de 2 mm por encima de la bandeja del gel. Recoger los tubos PCR en el termociclador y colocarlos en un soporte de microtubo. Utilizando una punta de pipeta nueva cada vez, añadir 10 μL de ADN adquirido carga colorante a cada muestra y mezclar bien.

Usando una punta nueva cada vez, cargar los pocillos del gel de agarosa con 20 μL de peso molecular ruler en un pozo y 20 μL de cada muestra en los pocillos subsiguientes, como se indica en esta tabla. Establezca la cámara de electroforesis a 100 V durante 30 minutos.

Una vez que el gel ha terminado funcionando, desconecte la cámara del gel, retire la bandeja y coloque el gel en una bandeja de tinción. Sumergir el gel en comprado 100 x mancha de gel durante 5 minutos, sacudiendo la bandeja suavemente para distribuir el tinte. Una vez teñido, transferir el gel a un recipiente de lavado y enjuague con agua corriente para aproximadamente 10 s. Destain lavándolo tres veces en agua caliente durante 3 minutos cada uno, cada uno con una agitación suave para obtener mejores resultados. Si es necesario, continuar la extracción en agua caliente hasta que se alcanza el contraste deseado.

La presencia o ausencia de una banda de bp 200 en carril 4 indica si la comida de prueba contiene OMG. Los iniciadores de planta determinan si el ADN de plantas fue extraído con éxito de la muestra. El control de alimentos no-GMO es un indicador de resultados falsos positivos, ocurriera. Si el control de alimentos no-GMO sale positivo, significa la PCR fue contaminada en algún momento. El control de la plantilla de GMO-positivo es un indicador de falsos negativos. Si el control de la plantilla de GMO-positiva no ampliar, hay un problema con la reacción de PCR y puede confiar en un resultado de GMO-negativo de la comida de prueba.

Geles se pueden colocar sobre un papel blanco o amarillo para proporcionar fondo de contraste para destacar las bandas de ADN, o mayor contraste se puede lograr utilizando una caja de luz UV.

La posibilidad de probar los productos alimenticios o productos de ingredientes genéticamente modificados es pertinente para un número de aplicaciones científicas o reglamentarias.

Hay algunas pruebas de que ADN transgénico de cultivos modificados genéticamente puede convertirse en río en los genomas de poblaciones silvestres de cultivos. Por ejemplo, polinizadores pueden facilitar a esta transferencia fertilizando salvaje-tipo plantas con polen de un origen genéticamente modificado. Esta es una preocupación, como los impactos de la diseminación de estos genes insertados en los ecosistemas en su conjunto no se entienden bien. PCR prueba de poblaciones silvestres puede proporcionar datos sobre la potencial difusión y éxito en la contención, de inserciones de genéticas.

Falta de etiquetado o el etiquetado incorrecto de ingredientes genéticamente modificados puede ser un problema de consumo. Esto puede ser debido a la preferencia del consumidor de consumo o introducción potencial de alergenos durante el proceso de GM, aunque este último es controvertido. En algunos países, ingredientes genéticamente modificados deben figurar en el acondicionamiento de los alimentos. Juntas directivas en estos países pueden utilizar PCR pruebas para comprobar la precisión de etiquetado de alimentos.

Que la modificación genética introducida a un cultivo confiere resistencia a plaguicidas, algunos estudios han expresado preocupación por la producción de "súper malezas". Esencialmente, estos pueden ser cualquier planta no inicialmente destinado a la modificación que se obtiene la resistencia a pesticidas a través de mecanismos como introgresión o hibridación. Estas plantas se pueden entonces capaces de difundir con más éxito y ser más difíciles de controlar que los sin el inserto. PCR prueba de modificación genética puede ayudar a destacar y seguir tales poblaciones potenciales para determinar si esta extensión podría resultar problemática.

Sólo ha visto introducción de Zeus para pruebas de alimentos transgénicos. Ahora debe comprender los principios detrás de identificar los alimentos genéticamente modificados mediante PCR, cómo extraer y amplificar ADN de los alimentos y cómo determinar si la muestra de alimento se ha modificado genéticamente. ¡Gracias por ver!

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