Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Science Education Library
Lab Animal Research

A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 20 seconds.

 

撤退の血私

Article

Transcript

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the English version.

採血は、マウスやラットを含むいくつかの研究に共通する要件です。これらの動物の血液回収のための方法の選択はのような多くの要因、必要血液量、サンプリングの頻度、抽気される動物の健康状態、技術者のスキルレベルに依存。

ここでは、これらの考慮事項を復習し、アウトライン採血手順レトロ軌道目出血を含む、尾の切れ端し、ニックネーム、心臓内の血液のコレクションだけでなく。他の方法は、このシリーズの 2 番目のビデオを参照してください。

血撤退プロトコルを掘り下げる前にサンプル タイプ、針の選択、収集することができます最大血液量などいくつかの一般的な考慮事項をまず確認してみましょう。マウスやラットの血液を収集する前に必要な血液サンプルの種類を決定する必要があります。実験手順は、全血、血漿または血清を必要があります。

全血を収集、抗凝固剤が凝固を防ぐためにサンプルに追加する必要があります。一般的に使用される抗凝固薬は、ヘパリン、クエン酸ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸、EDTA と略します。抗凝固剤は、表面をコートする注射器に直接ロードできます。これにより、抗凝固薬の接触直接描画する血凝固の防止を支援します。齧歯動物の血液が急速に凝固、ためには、適切な割合の血液に抗凝固剤を使用することが重要です。プラズマ コレクション全血の凝固を遠心分離が必要です。次のスピン、白血球と血小板の層の上の透明の液体は、プラズマです。他の凝固因子、フィブリノーゲンを含まれています。一方で血清、全血サンプルなし抗凝固薬から収集されます。トップ プレーヤーである血清にフィブリノゲンや他の凝固因子が含まれていないのでサンプルは消退します。

針の選択は、動物のサイズと静脈穿刺のサイトに基づいています。一般に、大口径針は血液細胞に損傷の少ないより迅速な血液コレクションを有効にします。血管損傷を引き起こす可能性が高いです。針の長さも考慮する必要があります。針が長すぎる場合、使いにくいかもしれないまたは血液凝固針内に始めることができます。18 29 ゲージと長さは 0.5 から 1.5 インチからサイズの範囲の選択肢。各メソッドの適切な針のサイズは、手順のセクションで説明されます。

最後に、齧歯動物のサイズが小さいため、有機体に深刻な害をもたらすない単一血液から集めることができる血の最大量があります。血撤退はなし、または流体交換 - 通常行われます 0.9% 生理食塩水を使用して可能性があります。各場合の上限は、テキスト プロトコルの下に表示されます。さらに、いくつかの実験を必要とする複数のサンプルのコレクション、動物においても水分補給と共に同様の血液細胞を補充するために間に時間を必要があります。再び、シリアルのコレクション中に集めることができる最大量があるし、上限は以下のプロトコルに記載されています。

いくつかの一般的な考慮事項を確認した後 let's レトロ軌道出血始まる特定血液回収技術にジャンプ - 目の近くの血管から少量を収集するために科学者によって使用される技術。眼窩領域の解剖学的構造はマウスとラット間で異なることに注意してください。ラット、目の奥に流れる血管の神経叢、マウスの作成、レトロな軌道副鼻腔血管のコレクションはマウスでこの手順を実行しやすくなります。

血のコレクションの管を掴んで開始します。50-75 マイクロリットルを保持マイクロ ヘマトクリット管が優先されます。いくつかのペーパー タオルや作業台の上の他の絶縁材料を置きます。これは、プロシージャの間に動物の体の熱を維持するためにです。今イソフルラン麻酔などの麻酔を使用して動物を麻酔します。動物完全に麻酔をかけられ、一度部屋から削除し、臥床の横方向の位置には、その側にそれを置きなさい。次に、あごのラインに沿って、頭の上に指を置く皮膚を引き戻すし、下向きの眼球突出を誘発します。窒息によって死を引き起こす可能性がありますを気管に圧力を適用することを避けるため。その後、目の眼でマイクロ ヘマトクリット チューブを置き、尾側鼻の面から 30 に 45 度の角度でそれを直接します。軽くチューブを回転させながら圧力を適用します。これは結膜膜を切って、眼の神経叢や副鼻腔を破裂します。毛管作用によってヘマトクリット管に血液が流れます。眼腔の後ろに骨を叩くので、深いチューブを押すことは避けてください。血は流れを開始、一度はみ出した目を維持する圧力を維持します。出血を止める、皮を解放でき、目正常な位置に戻ります。止血を促進するために圧力を適用します。繰り返されるサンプル コレクションの裁ち落としの間 10 日間の最小値を許可します。癒すために組織のいくつかの時間を提供します。

レトロな軌道出血は一般的なプロシージャが、その挫折について多くの懸念があります。ヘマトクリット管の過剰な運動による腫れが含まれます。これは順番眼球突出を引き起こす、角膜乾燥、損傷、痛み、傷、自傷を引き起こすことで生じる瞼の閉鎖を妨げることができます。ヘマトクリット管の不適切な配置は、失明の生じる視神経を断ち切ることができます。別の可能な合併症は、眼球の後ろに落下するまぶたをできるように、軌道を外れて目が出来ます。さらに、眼球の硝子体液の損失結果極度の痛み、目の奥に血腫の形成の浸透、壊れやすい軌道骨の破砕から問題が発生します。すべてのこれらの懸念にもかかわらず、熟練した技術者は、手順を実行し、動物完全に麻酔をかけられ、レトロ軌道出血が効果的な方法である齧歯動物の血のコレクションの。

今小さなボリュームのシリアル サンプルのコレクションを可能にする考慮事項と尾が出血のため手順を確認してみましょう。装置に必要なこのプロシージャの滅菌数 11 メスが含まれます。はさみは使えませんので、はさみでカットを粉砕すると、凝固を促進して血流を減らすことができます。他の楽器は、動物の尻尾へのアクセスを可能にする拘束チューブ吸水紙タオルコレクションまたはヘマトクリット管および styptic 粉 - 止血を支援します。

拘束チューブに動物を保護することによって開始します。その後、暖かい水の残骸を削除し、わずかな血管拡張を引き起こすと尾を拭いてください。お湯を使用しないでください。尾を拡張し、メスの刃でヘマトクリット値またはコレクション チューブを使用して血液を収集する尾の非常に端を切り取る。尻尾を撫でまたは「搾乳」血の流れを奨励する先端に尻からできます。サンプルの品質が低くなります、ただし、これ。

出血を止めるには、ガーゼのパッドと尾の先端に圧力を適用します。Styptic 粉は止血を達成するために使用可能性があります。繰り返しサンプリングの後に遅れる可能性があります止血が達成されていることを確認するすべて 5 〜 10 分の動物を確認します。尻尾切り取り領域から採取された試料は、組織製品汚染と一緒に、動脈、静脈の血液を含めることができます。血のコレクションのこのプロシージャはかさぶたか尾の末尾に元のカットの塊を破壊してシリアル コレクションとします。

尻尾切り取り領域に代替血液コレクション メソッドは、尾容器ニックは、比較的低侵襲です。このため、同じメス刃を使用してカットをする小さな直接外側尾静脈、約 3 分の 2 以上臀部からの距離。として尻尾の切れ端と血を収集できますコレクションまたはヘマトクリット管に。サイトに圧力をかけて、5-10 分ごとに動物を再確認して止血を確保することが不可欠です。ただし、組織の製品と、尻尾切り取り領域とサンプルを汚染可能性があります。

多くの場合心臓内出血または後大静脈経由で外れると出血によって非生存大きな血のサンプルを必要とする研究。

マウスの心臓内のメソッド、22-25 ゲージ 1 インチの針で 3 cc 注射器が必要です。ラットの 1.5 インチ、18 ゲージの針で 10-12 cc 注射器が好ましい。理由を理解するのには、以下のプロトコルを参照してくださいこれらのニーズと注射器が最適です。

二酸化炭素を用いた動物を安楽死させるから始めます。次の安楽死、垂直にぶら下がって体と襟首齧歯類を保持します。この抑制は、体がまっすぐ心のたわみや胸のねじれを防ぐためにする必要がありますが重要です。中心部が肘のレベルに約あることに注意してください。挿入側は、剣、肋骨の下に平行に背骨の左側にちょうどノッチです。

針を挿入、胸に、ベベルし、中心部に穴をあけます。注射器でわずかな背圧を適用します。中心部に針がある場合は、血液が注射器に流れます。血が追加の背を追加する前にバレルをいっぱいまで待ちます。約心臓穿刺によってマウスまたはラットからこの全体の血液量の半分を収集できます。これはマウスの平均から平均のラットからの血液の約 10 mL の血液の約 1 mL に相当

代替位置は、外側アプローチによる背臥床です。この場合は、左のわき腹の肋骨の間針を配置します。エントリ ポイントは、胸部に肘のポイントに対して測定されます。針を挿入し、胸壁のポイント中間でテーブルの平面に垂直に、ベベルします。注射器でわずかなバック プレッシャを適用します。針は、心臓は血液の場合は、注射器に流れます。再び、血が追加の背を追加する前にバレルをいっぱいまでを待機します。いずれかの位置に過度の背が倒れるかもしれない心針ベベルを遮蔽し、注射器への血流を停止するに注意してください。

心臓の血液を収集する別の方法は後大静脈、です。この手順に必要な装置が適切なシリンジ添付; 正しいサイズ針付き腹腔内、小さな非外科的親指鉗子とガーゼ スポンジを開くためのはさみ。この手法では、動物が深く麻酔し、プロシージャ全体で麻酔維持を必要があります。CO2 ナルコーシスはこのプロシージャの動物の心臓を打つ必要がありますので、オプションではありません。背臥床位置に動物を置き、プラットフォームに手足を固定します。手足は、身体から拡張する必要があります。

ピンセットで皮膚を持ち上げるし、骨盤のすぐ上の皮膚を通して小さな横カットは、女性または男性の包皮にはさみを使用します。次、カットにはさみの点を配置し、剣に骨盤や包皮から皮膚を通して正中切開します。横方向に反映肌、持ち上げる筋肉と皮膚切り取りの真上の筋肉の小さな横カットを作る。

腹部にシザーの点を配置し、剣に筋を正中切開を加えます。シザー ポイント任意の臓器を切断を防ぐために上向きの角度を確認します。両側の肋骨の曲線に沿って横にカットします。肝臓を穿刺しないように注意します。優しく腸を後部の上大静脈を公開する動物の左に移動します。肝臓にガーゼのパッドを配置し、人差し指と中指を上に置きます。もう一方の手で針を挿入し、下大静脈、腎血管の接合部と腸骨の分岐の中間にベベルを。ゆっくりと肝臓に加圧しながら血を撤回します。

容器破裂が発生する可能性がありますので、手の動きを避けてください。また、あまりにも急速な血撤退オープニングの予防および採血を遮蔽かさに折りたたみに容器を引き起こします。この手法の主な利点は、針が皮膚を通過しませんので滅菌サンプルを収集する機能です。

最後に、これらの血液回収技術のいくつかのアプリケーションを見てみましょう。免疫腫瘍、新興分野であるし、この分野で研究者はしばしば癌の開発のさまざまな段階で免疫細胞を研究するための血のコレクションを実行します。たとえば、ここで研究者は腫瘍生着 20 と 30 日の 10 時に好中球を定量化して担癌マウスから血を収集しました。

一方、血液組成を生理学者によって研究されても頻繁。本研究でのような研究者は、糖尿病で腎臓機能の評価に興味を持っていた。そのために、これらの科学者は最初糖尿病動物モデルに色素を注入します。次に、彼らは、糖尿病腎臓機能の違いを強調した糸球体濾過率の計算に使用された最終的に血液中の染料濃度を評価するためのいくつかの時点で血液を収集するのに尻尾切り取り領域法を使用誘導。

最後に、幹細胞の研究者は、受信者のシステムにドナー細胞の成立の成否を評価するのに血液サンプルを使用します。ここでは、調査官は最初野生型および尾静脈注射を介して雌の遺伝子組み換え動物に男性マウスの骨髄細胞を移植しました。次に、彼らはポリメラーゼ連鎖反応を使用して血液細胞のゲノム DNA を研究する受信者のマウスのレトロな軌道洞から血液を収集しました。これは動物の 2 つのタイプのドナー細胞の生着率を提供されます。

ゼウスの血回収技術の最初の割賦を見てきただけ。実験動物の血のコレクションの他の一般的に使用されるテクニックを実行する方法を確認するシリーズの次のビデオを参照してください。いつも見てくれてありがとう!

Read Article

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter