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Overview

출처: 케이 스튜어트, RVT, RLATG, CMAR; 발레리 A. 슈뢰더, RVT, RLATG. 노틀담 대학교, IN

분석을 위해 마우스와 쥐로부터 혈액의 수집은 다양한 방법을 통해 수행 될 수있다. 수집의 각 방법은 필요한 구속의 유형, 절차의 침습성 및 일반 마취의 필요성에 변화가 있습니다. 1 역사적으로, 복고풍 궤도 부비동 구멍의 사용은 사용되었습니다, 하지만 논쟁없이. 잠재적 인 조직 손상, 또는 심지어 실명과 관련된 논쟁은, 복고풍 궤도 출혈에 의해 발생, 마우스에서 얼굴과 하복부 정맥 출혈 방법의 개발로 이어졌다. 쥐와 쥐 모두에서 수페누스 정맥에서 혈액 수집은 개발 된 또 다른 기술이다. 이러한 절차는 마취를 필요로하지 않으며 따라서 마취제의 사용이 혈액 결과 또는 기타 데이터를 혼동 할 수있는 경우에 적합합니다.

Principles

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마우스에는 뺨을 가로 질러 안구 신경총에서 실행되는 얼굴 정맥과 아래턱을 따라 흐르는 복막 정맥이 있습니다. 두 선박 모두 턱 선 바로 아래 의 경정맥에 수렴되어 쉽게 접근 할 수 있습니다. 직렬 샘플은 사용되는 측면을 번갈아 하여 두 용기에서 채취할 수 있습니다. 그러나, 어느 쪽도 5-7 일마다 보다는 더 자주 이용해서는 안됩니다. 2

안면 정맥 출혈을 수행하는 동안 예방 조치를 취해야합니다. 외이도는 안면 정맥 근처에 위치하므로 랜싯 팁이 caudally 지시되면 운하가 관통됩니다. 이것은 귀에서 오는 혈액을 일으키는 사이펀 효력귀착될 것입니다. 그럼에도 불구하고 혈액은 여전히 수집 될 수 있으며 마우스는 영구적 인 해를 입지 않습니다. 그러나, 이것은 그 새장에 있는 혈액을 튀기는 그것의 머리를 흔들기 위하여 동물을 일으키는 원인이 될 수 있습니다.

복막 정맥에서 출혈할 때, 바늘의 삽입 깊이는 중요합니다. 4-5.5mm를 초과하는 삽입 깊이는 근육, 신경 및 머리, 목 및 구강에 있는 그밖 혈관에 외상귀착될 수 있습니다. 후속 합병증은 저혈당의 결과로 과도한 출혈을 포함, 입에 있는 액체에 기인하는 익사, 및 먹고 마시는 방해하는 경구 구조물에 손상.

동물의 구속은 안면 정맥과 복종 절차 모두에 대한 성공적인 출혈에 매우 중요합니다. 스크러프의 그립이 너무 타이트하면 안면 정맥으로의 혈류를 제한할 수 있습니다. 이렇게 하면 수집된 볼륨이 줄어듭니다. 수집 볼륨은 얼굴 정맥과 복종 정맥 출혈 모두에 따라 달라집니다. 기관 정책과 승인된 동물 프로토콜에 따라 생존 혈액 수집의 최대 볼륨을 초과하지 않도록 수집 량을 제한하는 것이 필수적입니다. 원하는 양이 수집되면 혈청을 보장하면 추가 또는 과도한 혈액 손실을 방지할 수 있습니다. 2

사페누스 정맥에서 혈액 수집은 연쇄 출혈에 대한 또 다른 실행 가능한 대안입니다. 측면 사페누스 정맥은 타르살 관절을 가로질러 뒤갈면 달리는 피상적 인 선박입니다. 3 이 절차는 복고풍 궤도 출혈보다 더 심미적으로 허용 될 수 있지만,이 방법에 대한 마취를 필요로하고 아무 소용이 없기 때문에 - 그것은 실제로 동물에게 더 스트레스가 될 수 있습니다. 사페누스 출혈에서 발생할 수있는 합병증은 천자 부위와 관련이 있습니다. 바늘 펑크가 혈관에 직접 있지 않으면 혈액이 피하로 풀이되어 혈종이 발생할 수 있습니다. 타박상, 가능한 감염 및 팔다리의 호의는 다른 가능한 문제입니다. 이 방법은 교육이 필요하지만 쉽게 파악할 수 있습니다. 이 방법으로 수집된 볼륨은 샘플링 빈도에 따라 10-150 μL 사이입니다. 4 샘플은 조직 제품을 포함할 수 있기 때문에 품질이 가변적입니다. 같은 다리에서 24시간 이내에 4개 이상의 혈액 샘플을 채취해서는 안 됩니다.

대퇴 정맥은 쥐에 혈액 수집을위한 또 다른 옵션입니다. 대퇴 정맥은 사타구니에서 무릎 관절까지 뒷다리의 내측 측면에 달려 있어 무릎을 건너 측면 사페누스가 되어 쉽게 접근할 수 있습니다. 이 절차는 마취제를 사용하지 않고 할 수 있지만, 한쪽 사람이 다리와 복부가 정맥을 폐색하는 지점에서 다리를 잡고 다른 하나는 정맥을 수행하고 혈액을 수집해야합니다.

대퇴 정맥을 사용하는 장점은 더 큰 부피가 사페누스 정맥보다 더 쉽게 수집된다는 것입니다. 그러나 대퇴 정맥이 크기 때문에 혈종 형성이 발생하기 쉽습니다. 이것은 다리에 너무 단단한 그립에 의해 악화 될 수 있습니다. 이 혈액 수집 방법으로, 바늘의 제거 후 출혈로 인해 수집 된 혈액의 양이 변이된다. 이 과도한 혈액 손실을 방지하기 위해 혈청을 보장하는 것이 필수적입니다.

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Procedure

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1. 마우스에서 출혈 얼굴 정맥

  1. 설비
    1. 혈액의 수집은 혈액 튜브 또는 엡펜도르프 튜브에 무료 캐치에서입니다. 어떤 경우에는 혈액을 헤마토크튜브로 직접 수집하는 것이 바람직합니다.
    2. 골든로드 랜싯은 나이와 성별에 따라 동물에게 적합한 크기에 따라 선택됩니다.
      1. 랜싯은 마우스의 나이/크기에 따라 다음과 같이 선택됩니다.
        4mm 랜싯: 3-4주 된 마우스 (15 그램 체중 미만)
        5mm 랜싯: 10주 미만의 여성 마우스(체중 ~20그램 미만)
        5mm 랜싯: 6주 미만의 남성 마우스(~20그램 체중 미만)
        5mm 랜싯: 단일 드롭 샘플용(혈액 얼룩용)
        5.5mm 랜싯: 10주 이상 여성 마우스(체중 ~20그램 이상)
        5.5mm 랜싯: 6주 이상 남성 마우스(체중 ~20그램 이상)
        5.5mm 랜싯: 대형 샘플
  2. 구속
    1. 마우스는 스크러핑 기술을 사용하여 제지됩니다.
    2. 헤드의 좌우 움직임을 최소화하는 것이 중요합니다. 이를 통해 랜싯으로 정확하고 안전한 비프니처를 보장합니다.
  3. 혈액 철수
    1. 적절한 크기의 랜싯은 피부 표면에 수직으로 유지됩니다.
    2. 랜싯 포인트는 약간 각도가 있으며 끝이 코를 향합니다.
    3. 랜싯 블레이드는 수직 위치에 가장 잘 사용됩니다.
    4. 마우스를 억제하는 동안 측면 캔투스 아래눈의 길이와 눈의 폭을 소싱하여 얼굴 정맥의 대략적인 영역을 찾습니다.
    5. 랜싯의 포인트와 함께 턱뼈가 끝나는 지점에 대해 부드럽게 느껴집니다.
    6. 선박을 뚫는 데 있어 더 나은 정확도를 위해 마우스를 측면 의시간에 배치합니다.
    7. 그 시점에서 랜싯의 어깨에 피부를 관통. 이것은 다트를 던지는 것이 아니라 확고한 밀어붙이는 것으로 이루어집니다.
    8. 랜싯을 제거하면 혈액이 흐르기 시작합니다.
    9. 혈류를 돕기 위해 마우스를 심장보다 낮은 머리로 배치합니다.
    10. 원하는 수집 용기에서 혈액을 수집합니다.
    11. 구멍을 뚫고 혈청부위에 압력을 가한다.

Figure 1
그림 1. 마우스에서 출혈 얼굴 정맥.

2. 쥐에서 하안 디벨큘러 출혈 : 안면 정맥 출혈에 대한 기술과 매우 유사하지만,이 출혈 절차에서 장비의 변화와 미묘한 차이가 있습니다.

  1. 설비
    1. 혈액의 수집은 혈액 튜브 또는 엡펜도르프 튜브에 무료 캐치에서입니다. 어떤 경우에는 헤마토크릿 튜브로 직접 수집하는 것이 바람직합니다.
    2. 18-22 게이지 바늘은 연령과 성별에 따라 동물에 적합한 크기에 따라 선택됩니다.
      1. 바늘은 마우스의 나이/크기에 따라 다음과 같이 선택됩니다.
        22 게이지: 3-4 주 된 쥐 (15 그램 체중 미만)
        20 게이지: 10주 미만의 여성 마우스(체중 ~20그램 미만)
        20 게이지: 6주 미만의 남성 마우스(~20그램 체중 미만)
        20 게이지: 단일 드롭 샘플용(혈액 얼룩용)
        18 게이지: 10 주 이상 여성 마우스 (이상 ~20 그램 체중)
        18 게이지: 6 주 이상 남성 마우스 (이상 ~20 그램 체중)
        18 게이지 : 대형 샘플
  2. 구속
    1. 마우스는 스크러핑 기술을 사용하여 제지됩니다.
    2. 헤드의 좌우 움직임을 최소화하는 것이 중요합니다. 이것은 바늘로 정확하고 안전한 venipuncture를 보장합니다.
  3. 혈액 철수
    1. 바늘은 피부 표면에 수직으로 유지됩니다.
    2. 마우스를 억제하는 동안, 입의 모서리에서 선이 눈의 측면 캔투스에서 선을 교차하는 지점에 의해 하위 정맥의 대략적인 영역을 찾습니다. 이것은 입의 모서리와 턱 선 아래 약간 아래로 소달을 발견 작은, 털이 없는 보조개와 일치합니다.
    3. 선박을 뚫는 데 있어 더 나은 정확도를 위해 마우스를 측면 의시간에 배치합니다.
    4. 그 시점에서 바늘끝으로 피부를 관통합니다. 이것은 다트를 던지는 것이 아니라 확고한 밀어붙이는 것으로 이루어집니다.
    5. 바늘은 벨 끝 너머에 삽입되지 않습니다.
    6. 바늘을 제거하면 혈액이 흐르기 시작합니다.
    7. 혈류를 돕기 위해 마우스를 심장보다 낮은 머리로 배치합니다.
    8. 원하는 수집 용기에서 혈액을 수집합니다.
    9. 구멍을 뚫고, 혈청부위에 압력을 가한다.

Figure 2
그림 2. 심판 정맥은 마우스에서 출혈.

3화 사페누스 출혈

  1. 설비
    1. 명확한 플라스틱, 유연한 구속 콘은 마우스 또는 쥐에 사용할 수 있습니다. 마우스의 경우, 변형된 50밀리리터 플라스틱 원모형 튜브를 구속하는 데 사용할 수 있습니다. 쥐의 경우, 뒤늦은 다리를 연장할 수 있을 만큼 넓은 슬롯을 가진 수정된 플렉시글라스 구속 튜브-사용할 수 있다.
    2. 플라스틱 콘을 살때 동물의 체길이에 따라 측정되며, 타원형 구멍은 허벅지 수준에서 절단된다.
    3. 원추형 튜브는 호흡 구멍을 허용하기 위해 튜브의 끝을 차단하여이 혈액 수집 방법에 대한 마우스를 수정 할 수 있습니다. 슬롯은 튜브의 캡 끝에서 약 1/2 인치 너비와 2 인치 길이로 절단됩니다. 가장자리는 천 테이프로 덮여 있거나 동물의 안전을 위해 부드럽게 됩니다.
    4. 지혈대는 3 cc 주사기와 2-0 비흡수성 봉합사를 사용하여 제조됩니다. 3
    5. 트리플 항생제 연고 또는 백색 석유 젤리는 피부에 방분 장벽으로 사용됩니다.
    6. 22 게이지 바늘은 venipuncture에 대 한 바람직한 크기.
    7. 혈액은 헤마토크릿 튜브로 직접 채취됩니다.
  2. 구속
    1. 유연한 플라스틱 콘
      1. 마우스 또는 쥐는 원뿔 코 에 먼저 배치됩니다.
      2. 원뿔의 끝은 동물이 구속 원뿔을 빠져나가는 것을 방지하기 위해 작은 바인더 클립을 사용하여 접혀 닫힙습니다.
      3. 뒷다리는 타원형개구를 통해 사타구니로 부드럽게 당겨져 있습니다.
    2. 마우스를 위한 원원관
      1. 마우스는 튜브 코 에 먼저 배치됩니다.
      2. 뒷다리는 슬롯으로 부드럽게 안내됩니다.
      3. 가운데 손가락은 마우스가 튜브를 빠져나가는 것을 방지하기 위해 튜브 의 끝 부분에 배치됩니다.
      4. 검지 손가락과 엄지 손가락은 마우스의 다리를 안정시합니다.
    3. 쥐플렉시글라스 구속 튜브
      1. 쥐는 튜브 코 에 먼저 배치됩니다.
      2. 뒷다리는 슬롯으로 부드럽게 안내됩니다.
      3. 튜브의 끝은 쥐가 튜브를 백업하고 빠져나가는 것을 방지하기 위해 고정됩니다.
      4. 검지 손가락과 엄지 손가락은 쥐의 다리를 안정시합니다.
  3. 혈액 철수
    1. 머리카락은 다리의 측면 측면에서 복종에서 억누르기까지 제거됩니다. 이것은 뽑아, 면도, 또는 탈모 크림을 사용하여 수행 할 수 있습니다.
    2. 모발이 제거되면 소량의 연고가 적용되어 털이 없는 부위의 매우 얇은 층으로 퍼짐됩니다.
    3. 지혈대는 가능한 한 원예롭게 적용되고 조입니다.
    4. 무릎에서 발목까지 다리의 바깥쪽 표면을 가로질러 달리는 사페누스 용기가 채우기 시작하고 제기되고 쉽게 시각화할 수 있습니다.
    5. 바늘은 혈관 을 통해 직접 피부의 표면에 수직으로 개최됩니다. 선박에 구멍을 뚫습니다. 바늘을 다리에 깊게 삽입하지 않도록주의하십시오, 근육을 천공하거나 뼈를 치는 것을 피하기 위해.
    6. 혈액은 헤마토크튜브로 수집을 위해 다리 표면에 구부러질 것입니다.
    7. 혈액이 수집되면 지혈대를 풀고 혈종염에 대한 천자에 압력을 가하십시오.
    8. 출혈이 멈춘 후, 동물을 구속에서 제거하고 홈 케이지로 돌려놓습니다.

Figure 1
그림 3. 사페누스 정맥은 마우스에서 출혈.

4. 쥐에 대한 대퇴 정맥

  1. 설비
    1. 혈액은 혈중 대두튜브로 수집됩니다.
    2. 피부/모발과 혈액 방울 사이의 장벽을 만들기 위해 삼중 항생제 연고가 필요합니다.
    3. 22 게이지 바늘은 정맥을 뚫는 데 사용됩니다.
    4. 약 1"와이드 블레이드가있는 작고 휴대용 헤어 클리퍼가 다리에서 머리카락을 잘라냅니다.
  2. 구속
    1. 쥐는 명확하고 유연한 플라스틱 구속 콘을 사용하여 억제됩니다.
    2. 플라스틱 콘은 체길이와 허벅지 수준에서 절단된 타원형 구멍에 대해 측정됩니다. 원뿔은 정맥에 접근할 수 있어 뒷다리가 외부화될 수 있도록 절단된다.
  3. 혈액 철수
    1. 머리카락은 사타구니에서 무릎까지 다리의 내부 표면에서 면도됩니다.
    2. 삼중 항생제 연고는 천자 부위의 얇은 층에 적용됩니다.
    3. 구속자는 정맥을 가리고 철근을 향한 다리의 내부 표면으로 쥐를 잡습니다.
    4. 바늘을 사용하여 정맥에 구멍을 뚫습니다. 바늘은 혈관에 수직으로 유지되고 펑크는 정맥에서 직접 수행됩니다.
    5. 펑크는 가능한 한 무릎에 가깝게 만들어지므로 첫 번째 혈액 수집 부위에 전방을 추가로 샘플링 할 수 있습니다.
    6. 선박은 피상적이다. 따라서 펑크의 깊이는 바늘의 벨 길이보다 깊어서는 안됩니다.
    7. 혈류를 돕기 위해 쥐를 심장보다 다리를 낮게 배치합니다.
    8. 피부 표면에 구슬로 헤마토크튜브에 혈액을 수집합니다.
    9. 다리에 압력을 방출하고 hemostasis를 달성하기 위해 천자 부위에 압력을 가합니다.

Figure 4
그림 4. 대퇴정맥은 쥐에서 피를 흘렸다.

쥐와 쥐에서 혈액을 수집하는 것은 과학 연구의 다양한 필요, 연구원은 특정 실험 목표를 달성하기 위해 다른 방법을 개발했다.

첫 번째 할부에서, 우리는 일반적인 혈액 철수 고려를 토론하고 복고풍 궤도 눈 출혈, 꼬리 저격 및 닉뿐만 아니라 심장 내 혈액 수집 방법을 검토했습니다. 여기에서, 우리는 안면, submandibular, saphenous 및 대퇴정맥에서 혈액 수집을 위한 절차를 설명할 것입니다. 이러한 방법은 덜 침습적이며 마취를 필요로하지 않으며 마취를 필요로하지 않으며, 마취제를 사용하면 혈액 결과 또는 기타 데이터가 혼동 될 수 있을 때 선택 방법을 선택합니다.

뮤린 페이셜 정맥에서 혈액 샘플을 얻는 절차부터 시작합시다. 마우스에는 뺨을 가로질러 쉽게 접근할 수 있는 얼굴 정맥이 있습니다. 절차에 적합한 장비를 선택하여 시작합니다. 기본적으로 혈액 수집을위한 작은 원심 분리관과 다른 크기로 사용할 수있는 랜싯이 필요합니다. 올바른 랜싯의 선택은 동물의 나이, 성별 및 체중과 수집할 샘플의 크기에 따라 달라집니다. 랜싯 선택에 대한 자세한 내용은 텍스트 프로토콜을 참조하십시오.

스크러핑 기술을 사용하여 동물을 억제하여 절차를 시작합니다. 적절한 구속은 머리의 좌우 움직임을 최소화하고 랜싯으로 정확하고 안전한 비프런크를 보장하는 데 도움이됩니다. 그립이 너무 타이트하면 혈류가 제한되어 수집된 부피가 감소할 수 있습니다. 동물이 절제되면 측면 캔투스 아래의 눈 길이와 눈의 폭을 caudally 측정하여 얼굴 정맥의 대략적인 영역을 찾습니다. 랜싯의 끝으로 턱뼈가 끝나는 지점에 대해 부드럽게 느낍니다. 선박을 뚫는 데 있어 더 나은 정확도를 위해 마우스를 측면에 배치할 수 있습니다.

이제 삽입 부위에서 팁이 코를 향해 약간 향하면서 피부 표면에 수직으로 랜싯을 고정하십시오. 랜싯 팁이 caudally 지시되는 경우 외이도가 피어지면서 귀에서 출혈을 일으키기 때문에 이것은 매우 중요합니다. 정맥을 뚫기 위해 단단한 푸시를 바르고 피부를 랜싯 어깨까지 관통하십시오. 제거시 혈액이 흐르기 시작합니다. 흐름을 돕기 위해 동물을 심장보다 낮은 머리로 놓습니다. 출혈을 멈추려면, 천자 부위를 얼룩하여 혈종증을 달성하고 과도한 혈액 손실을 방지하십시오. 마지막으로, 스크러프에 압력을 해제하고 케이지에 동물을 반환합니다. 수집 량은 다양하지만 생존 혈액 수집의 최대 볼륨을 초과하지 않는 것이 필수적입니다. 권장되는 최대 수집 량에 대한 자세한 내용은 혈액 철수 1 비디오의 텍스트 프로토콜을 참조하십시오. 직렬 샘플은 사용된 측면을 번갈아 사용하여 채취할 수 있습니다. 어느 쪽도 5-7일마다 사용하는 경우가 많습니다.

이제 하위 정맥 출혈 방법을 검토해 보겠습니다. 이것은 안면 정맥 출혈에 대한 기술과 매우 유사하지만, 장비의 변화와 출혈 절차의 미묘한 차이가 있습니다.

서브만디브 정맥은 마우스의 아래턱을 따라 흐르고 얼굴 정맥과 수렴하여 경정맥에 넣습니다. 랜싯 대신이 방법은 바늘을 사용하여 수행됩니다. 그러나 랜싯과 마찬가지로 바늘 게이지의 선택은 나이, 성별 및 동물의 체중과 샘플 크기에 따라 달라집니다 - 자세한 내용은 텍스트 프로토콜을 참조하십시오.

시작하려면, 얼굴 정맥이 출혈과 같은 방식으로 동물을 스크러프하여 머리의 최소한의 좌우 움직임이 있습니다. 리콜 - 지나치게 꽉 그립은 혈액 수집 볼륨을 감소시킬 수 있습니다. 마우스를 억제하는 동안, 얼굴과 눈의 측면 캔투스에서 라인을 가로 질러 입의 모서리에서 선을 상상해보십시오. 이 선의 교차점은 하위 정맥의 대략적인 영역입니다. 이것은 입의 모서리와 턱 선 아래 약간 아래로 소달을 발견 작은 털이 없는 보조개와 일치합니다.

더 나은 정확도를 위해 동물을 측면 의상환(3.6.1)에 배치합니다. 다음으로, 바늘을 피부 표면에 수직으로 잡고 단단한 푸시로 삽입합니다. 베벨 팁 을 넘어 바늘을 삽입하지 마십시오, 그보다 더 큰 삽입 깊이는 근육에 외상을 초래할 수 있습니다, 신경 과 머리, 목, 구강에 다른 혈관. 바늘을 제거하면 혈액이 흐르기 시작합니다. 안면 정맥 출혈과 마찬가지로 마우스를 심장보다 낮게 배치하여 혈류를 돕습니다. 마지막으로, 천자 부위를 얼룩넣어 혈류에 대한 압력을 방출하여 동물을 케이지로 돌려놓습니다.

이제 사페누스 정맥에서 혈액을 수집하는 방법을 배우십시오. 이 정맥은 타르살 관절을 가로 질러 뒤처진 다음 측면으로 실행되는 피상적 인 선박입니다.

이 절차에 필요한 장비에는 쥐용 유연한 플라스틱 이될 수 있는 제지 장치가 포함되거나, 마우스의 경우 수정된 50밀리리터 플라스틱 원뿔관을 사용할 수 있다. 튜브 끝이 잘려서 호흡 구멍을 허용하고, 하프 인치 너비와 2 인치 길이슬롯이 캡 끝에서 잘려나릅니다. 가장자리는 동물의 안전을 위해 응고 테이프로 덮여 있습니다. 이 절차는 또한 3cc 주사기와 0-2 비흡수성 봉합사, 면봉이 있는 삼중 항생제 연고를 사용하여 제조된 지혈대, 모발 클리퍼, 22게이지 바늘, 혈액 채집을 위한 헤마토크라이트 튜브를 필요로 합니다.

마우스를 제지하려면 먼저 튜브, 코에 넣습니다. 그런 다음 뒷다리를 슬롯에 부드럽게 안내하고 검지 손가락과 엄지 손가락을 사용하여 안정화합니다. 그 후, 호크에서 질식에 다리의 측면 측면에서 머리를 면도. 다음으로, 털이 없는 부위에 삼중 항생제 연고의 매우 얇은 층을 얼룩지게 한다. 그 다음, 가능한 한 멀리 두개골을 적용하고 그것을 조입니다. 무릎에서 발목까지 바깥쪽 표면을 가로질러 달리는 사페누스 용기가 채우기 시작하고 제기되고 쉽게 시각화할 수 있습니다.

다음으로, 22 게이지 바늘을 혈관 바로 위에 잡고 피부 표면에 수직으로 고정하십시오. 그리고 혈관을 구멍을 뚫고 바늘을 너무 깊게 삽입하지 않도록주의하고 근육이나 뼈를 뚫습니다. 혈액은 헤마토크튜브로 수집하기 위해 다리 표면에 구부러질 것입니다. 혈액이 수집되면 지혈대를 풀고 혈종염에 대한 천자에 압력을 가하십시오. 출혈이 멈춘 후, 동물을 구속에서 제거하고 케이지로 돌려놓습니다. 이 방법으로 수집된 볼륨은 샘플링 빈도에 따라 10~150μL 사이입니다. 그리고 샘플 품질은 조직 제품을 포함할 수 있기 때문에 가변적이다. 같은 다리에서 24시간 이내에 4개 이상의 혈액 샘플을 채취해서는 안 됩니다.

마지막으로, 우리는 대퇴 정맥에서 혈액을 수집하는 방법을 배울 것입니다, 이는 쥐에 혈액 수집을위한 또 다른 옵션입니다. 대퇴 정맥은 사타구니에서 무릎 관절에 뒷다리의 내측 측면에 실행되어 무릎을 건너 측면 사페누스 정맥이되어 쉽게 접근 할 수 있습니다.

대퇴 정맥 출혈의 장점은 더 큰 부피가 사페누스 정맥보다 더 쉽게 수집된다는 것입니다. 단점은이 절차는 의식동물에서 두 사람이 필요하다는 것입니다. 이 절차에 필요한 장비는 지혈대가 필요하지 않다는 점을 제외하고는 사페누스 정맥 방법과 유사하며, 바람직한 제지 장치는 유연한 콘이다. 올바른 원뿔을 선택하려면 동물의 신체 길이에 대해 측정한 다음 허벅지 수준에서 타원형 구멍을 잘라냅니다.

동물을 억제하려면 먼저 튜브, 코에 넣습니다. 그런 다음, 원뿔의 끝을 접고 동물이 빠져나가는 것을 방지하기 위해 작은 바인더 클립을 사용하여 닫습니다. 이제 대퇴 정맥에 액세스 할 수 있도록 타원형 개구부를 통해 뒷다리를 당깁니다. 혈종 형성을 악화시킬 수 있으므로 너무 단단히 잡히지 마십시오. 다음으로, 사타구니에서 무릎까지 다리의 내부 표면을 면도하고, 털이 없는 부위에 삼중 항생제 연고의 얇은 층을 적용한다. 그 후, 구속자는 대퇴정맥을 가리고 혈액을 뽑을 사람을 향한 다리의 내표면으로 쥐를 잡아야 한다. 22 게이지 바늘을 혈관에 수직으로 잡고 정맥을 직접 뚫고 피부 표면에 구슬로 헤마토크릿 튜브에 혈액을 수집합니다. 펑크는이 사이트에 미래의 샘플링 전방을 허용하기 위해 가능한 한 무릎에 가깝어야합니다. 또한, 펑크의 깊이가 바늘의 벨 길이보다 더 깊지 않도록하십시오. 혈류를 돕기 위해 쥐를 심장보다 다리를 낮게 배치합니다. 마지막으로, 다리에 압력을 방출하고 hemostasis를 달성하고 과도한 혈액 손실을 방지하기 위해 천자 부위에 압력을 가합니다. 이 절차를 사용하여 훨씬 더 많은 양의 혈액을 수집할 수 있습니다.

혈액 수집 기술의 기초를 논의 한 후, 이러한 절차가 과학적 연구에 유용 할 수있는 이유의 몇 가지 예를 검토 해 봅시다

혈액은 백신 개발 도중 면역 반응을 확인하기 위하여 수시로 분석됩니다. 여기에서, 연구원은 방광암으로 손해를 입는 동물에게 펩티드 백신을 전달했습니다. 다음으로, 그(것)들은 submandibular 정맥을 통해 혈액을 수집하고 백신 효과의 표시기 역할을 하는 다른 사이토카인의 수준을 검출하기 위하여 혈청을 분리했습니다.

혈액 수집은 또한 당뇨병에 있는 포도당 수준 같이 인간 적인 질병의 biomarkers를 공부하여 처리의 효험을 시험하기 위하여 일반적으로 수행됩니다. 이 연구원은 당뇨병 동물에 있는 꼬리 정맥을 통해 전달된 새로운 유전자 치료의 효험을 시험에 관심이 있었습니다. 주사 후, 이러한 연구자들은 혈액 포도당 수준에 다른 치료 프로토콜의 효과를 분석하기 위해 여러 시점에서 사페누스 정맥에서 혈액을 수집.

마지막으로, 일부 실험의 경우 염증이나 스트레스 수준과 같은 동물의 기본 상태를 아는 것이 중요합니다. 이 예에서 혈장은 스트레스가 많은 사건 전후의 쥐로부터 수집되었다. 그리고 당신이 볼 수 있듯이, 코르티코스테론, 또는 스트레스 호르몬, 수준은 스트레스 이벤트 다음 10 분 동물에서 더 높다.

당신은 쥐와 쥐에 대한 혈액 철수 기술에 JoVE의 두 번째 할부를 보았다. 이 두 비디오를 모두 시청 한 후, 당신은 이 동물에서 혈액 수집에 대한 고려 사항과 절차의 더 나은 이해와 그들이 오늘날 생물 의학 연구에서 사용되는 방법을 이해해야합니다. 언제나처럼, 시청주셔서 감사합니다!

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혈액 수집 방법은 시료의 분석에 변화를 일으킬 수 있습니다. 샘플 수집을 수행하는 기술자의 기술 수준은 샘플의 품질과 동물의 복지에 영향을 미칩니다. 마취제의 사용은 샘플 품질에도 영향을 줄 수 있습니다. 여기에 설명된 방법은 모두 마취를 사용하지 않고 수행되므로 변수가 제거되었습니다. 또한 이러한 모든 기술은 동물에 대한 최소한의 불편함으로 시리얼 샘플링에 사용할 수 있습니다.

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References

  1. Fernandez, I., Arantza, P., Del Teso, N., Perez, V. and Rodriguez-Cuesta, J. 2010. Clinical biochemistry parameters in C57BL/6J mice after blood collection from the submandibular vein and retroorbital plexus. Journal of American Association of Laboratory Animal Science. 49:2. 202-210.
  2. Joslin, O.T. 2009. Blood collection techniques in exotic small animals. Journal of Exotic Pet Medicine. 18:2. 117-139.
  3. Hem, A., Smith, A.J. and Solberg, P. 1998. Saphenous vein puncture for blood sampling of the mouse, rat, hamster, gerbil, guinea pig, ferret and mink. Laboratory Animals. 32. 364-368.
  4. Diehl, K-H., Hull, R., Morton, D., Pfister, R. Rabemampianina, Y., Smith, D., Vidal, J-M., and van de Vorstenbosch, C. 2001. A good practical guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes. Journal of Applied Toxicology. 21. 15-23.

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