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Retiro de la sangre II

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Recogida de sangre de ratones y ratas es necesaria para una gran variedad de estudios científicos y los investigadores han desarrollado diferentes métodos para lograr objetivos experimentales concretos.

En la primera entrega, discutimos la consideración de retirada de sangre general y había revisado el sangrado retro orbital ojo, cola tijeras y nicks, así como métodos de recolección de sangre intra cardiaca. Aquí, se describen los procedimientos para recolección de sangre de las venas facial, submaxilares, safenas y femorales. Estos métodos son menos invasivos y no requiere anestesia, que los métodos de elección cuando el uso de anestésicos puede confundir los resultados de sangre u otros datos.

Vamos a empezar con el procedimiento para la obtención de una muestra de sangre de una vena facial murina. En el ratón, hay una fácil acceso vena facial que se extiende por la mejilla. Empezar por elegir el equipo adecuado para el procedimiento. Básicamente, usted necesita un tubo de centrífuga pequeña para recolección de sangre y una lanceta, que está disponible en diferentes tamaños. Selección de lancet correcto es dependiente de la edad, sexo y peso corporal del animal y el tamaño de muestra a recoger. Ver protocolo de texto para más detalles sobre la selección de The lancet.

Comenzar el procedimiento por el animal mediante la técnica de scruffing de restricción. Restricción adecuada minimiza el movimiento de lado a lado de la cabeza y ayuda a asegurar la venopunción precisa y segura con la lanceta. Si el agarre es demasiado apretado, el flujo de sangre puede restringir resultando en un menor volumen recogido. Una vez que el animal es inmovilizado, localice el área aproximada de la vena facial por la medición de la longitud del ojo debajo del canto lateral y el ancho del ojo caudalmente. Con la punta de la lanceta con cuidado siento por el punto en que termina la mandíbula. Para mejor precisión de puncionar el vaso, puede que desee posicionar el ratón en su lado.

Ahora, en el sitio de inserción, sujete la lanceta perpendicular a la superficie de la piel con la punta mirando ligeramente hacia la nariz. Esto es fundamental, porque si la extremidad de la lanceta se dirige caudalmente, el canal auditivo se traspasaron lo que causa hemorragia del oído. Punción de la vena, aplique una presión firme y perforar la piel hasta el hombro lanceta. Al retirarla, la sangre comenzará a fluir. Para ayudar en el flujo, la posición del animal con la cabeza más baja que el corazón. Para detener el sangrado, secar el sitio de punción para conseguir la hemostasia y prevenir la pérdida de sangre excesiva. Por último, suelte la presión en el pescuezo y devolver el animal a su jaula. Tenga en cuenta que los volúmenes de la colección puede variar, pero es imprescindible no debe exceder el volumen máximo para recolección de sangre de supervivencia. Vea el protocolo de texto del sangre retirada un vídeo para obtener más información sobre volumen máximo recomendado de colección. Pueden tomar muestras de la serie alternando el lado utilizado. Ninguno de los dos debe utilizarse más a menudo que cada 5-7 días.

Ahora vamos a revisar el método de sangrado de la vena submaxilar. Aunque esto es muy similar a la técnica para el sangrado de la vena facial, hay variaciones en el equipo y sutiles diferencias en el procedimiento de purga.

La vena submaxilar corre a lo largo de la mandíbula del ratón y converge con la vena facial en la vena yugular. En lugar de una lanceta, este método se realiza mediante agujas. Pero similar a lancetas, selección de aguja de calibre depende de la edad, sexo y tamaño de muestra y el peso del animal - ver protocolo de texto para detalles.

Para empezar, pescuezo del animal de la misma manera que el facial vena sangrado para que exista un mínimo movimiento de lado a lado de la cabeza. Recordar - agarre demasiado apretado puede disminuir el volumen de la colección de la sangre. Mientras el ratón, imagina una línea desde la esquina de la boca en toda la cara y una línea desde el ángulo lateral del ojo. El punto de intersección de estas líneas es el área aproximado de la vena submaxilar. Esto coincide con un pequeño hoyuelo sin pelo encontrado caudal a la esquina de la boca y ligeramente por debajo de la línea de la mandíbula.

Para mayor precisión, coloque el animal en recumbency lateral (3.6.1). A continuación, sujete la aguja perpendicular a la superficie de la piel e insértela con un firme empujón. No inserte la aguja más allá de la punta de bisel, como la profundidad de inserción mayor de lo puede provocar un trauma a los músculos, nervios y otros recipientes que están en la cabeza, cuello y cavidad bucal. Al retirar la aguja, la sangre comenzará a fluir. Como para el sangrado de la vena facial, coloque el ratón con la cabeza más baja que el corazón para ayudar con el flujo de sangre. Por último, seque el sitio de punción para conseguir la hemostasia y librar la presión sobre el pescuezo a regresar el animal a su jaula.

Ahora, vamos a aprender a recoger la sangre de la vena safena. Esta vena es un vaso superficial que se extiende dorsal y lateralmente a través de la articulación tarsal.

El equipo que usted necesita para este procedimiento incluye un dispositivo de restricción, que puede ser un plástico flexible una de ratas o ratones que puede utilizarse un tubo cónico plástico modificado de 50 mililitros. Tenga en cuenta que el extremo del tubo se corta para permitir que un agujero de respiración, y se corta una ranura larga media pulgada de ancho y 2 pulgadas desde el extremo del casquillo. Los bordes están cubiertos de cinta del coágulo para la seguridad del animal. Este procedimiento también requiere un torniquete--fabricado usando una jeringa de cc de 3 y una longitud de 0-2 sutura no-absorbible, ungüento triple antibiótico con un hisopo, para ser utilizado como una barrera de prueba de humedad entre la piel y la gota de sangre, una recortadora de pelo, una 22 calibre aguja para venopunción y el tubo de hematocrito para recolección de sangre.

Para frenar un ratón, colocar en el tubo, primero la nariz. Entonces, suavemente la pata trasera de la guía en la ranura y estabilizar con el dedo índice y el pulgar. Posteriormente, afeita el pelo de la cara lateral de la pata desde el corvejón a la Babilla. A continuación, Unte una capa muy delgada de ungüento antibiótico triple a la zona sin pelo. A continuación, aplique el torniquete cranially tan lejos como sea posible y apretar. El buque safeno corriendo por la superficie externa de la rodilla hasta el tobillo comenzará a llenar y se convertirá en elevado y fácil de visualizar.

A continuación, mantenga una aguja de 22 calibradores directamente sobre los vasos sanguíneos y perpendicular a la superficie de la piel. Y perforar el recipiente, teniendo cuidado de no insertar la aguja demasiado profundo y penetrante del músculo o del hueso. La sangre se grano para arriba en la superficie de la pierna para la recogida en un tubo de hematocrito. Una vez que se ha recogido la sangre, afloje el torniquete y aplique presión sobre la punción para la hemostasia. Después de que el sangrado se ha detenido, quitar el animal de la restricción y volver a su jaula. Volúmenes recogidos con este método son entre 10 a 150 μL, dependiendo de la frecuencia de muestreo. Y la calidad de la muestra es variable, ya que puede contener productos de tejido. No son más que muestras de sangre 4 deben tomarse dentro de un período de 24 horas de la misma pierna.

Por último, aprenderemos a recoger la sangre de la vena femoral, que es otra opción para recolección de sangre de una rata. La vena femoral corre en el aspecto medial de la pierna trasera desde la ingle a la rodilla antes de cruzar la rodilla y convirtiéndose en la vena safena lateral, lo que es fácilmente accesible.

La ventaja de sangrado de la vena femoral es que un volumen mayor se obtiene más fácilmente que de la vena safena. La desventaja es que este procedimiento, en un animal consciente, requiere de dos personas. El equipo necesario para este procedimiento son similares al método de la vena safena, excepto que no requiere el torniquete y el dispositivo que refrena preferible es un cono flexible. Para seleccionar el cono correcto, medir contra la longitud del cuerpo del animal y luego realizar un orificio oval corte a nivel del muslo.

Para frenar al animal, lo coloca en el tubo, primero la nariz. Luego, doble el extremo del cono y cerrar con un broche aprietapapel pequeño impidiendo la salida de los animales. Ahora tire de la pierna trasera a través de la oval abertura para acceder a la vena femoral. No agarre demasiado ya que podría exacerbar la formación del hematoma. A continuación, afeitar la superficie interna de la pierna desde la ingle hasta la rodilla y aplique una capa delgada de ungüento antibiótico triple en la zona sin pelo. Posteriormente, la persona de alojamiento debe ocluir la vena femoral y agarrar la rata con la superficie interna de la pierna frente a la persona que va a extraer la sangre. La aguja de calibre 22 perpendicular a los vasos sanguíneos, directamente pinchar la vena y recoge la sangre en tubos hematocrito como granos en la superficie de la piel. La punción debe ser tan cerca de la rodilla como sea posible para permitir un muestreo futuro anterior a este sitio. Además, asegúrese de que la profundidad de la punción es no más profunda que la longitud del bisel de la aguja. Para ayudar el flujo sanguíneo, coloque la rata con la pierna más baja que el corazón. Finalmente, suelte la presión en la pierna y aplique presión sobre el sitio de punción para conseguir la hemostasia y prevenir la pérdida de sangre excesiva. Tenga en cuenta que significativamente más cantidad de sangre se puede recoger mediante este procedimiento.

Después de discutir los fundamentos de las técnicas de colección de sangre, vamos a repasar algunos ejemplos de por qué estos procedimientos pueden ser útiles para la investigación científica

Sangre se analiza a menudo para confirmar la respuesta inmune durante el desarrollo de una vacuna. Aquí, los investigadores entregaron una vacuna peptídica a animales que sufren de cáncer de vejiga. Después, recogieron la sangre vía la vena submaxilar y separó el suero para detectar los niveles de diversas citocinas, que sirven como indicadores de la eficacia de la vacuna.

Colección de sangre se realiza comúnmente para probar la eficacia de un tratamiento mediante el estudio de biomarcadores de la enfermedad humana, como los niveles de glucosa en la diabetes. Estos investigadores estaban interesados en las pruebas de la eficacia de una terapia de gene nuevo entregada vía la vena de la cola en los animales diabéticos. Después de la inyección, estos investigadores obtuvieron sangre de la vena safena en varios puntos del tiempo para analizar el efecto de diferentes protocolos de tratamiento en el nivel de glucosa en sangre.

Por último, para algunos experimentos, es importante conocer la situación básica del animal, tales como los niveles de inflamación o de estrés. En este ejemplo, plasma de sangre se obtuvo de una rata antes y después de un evento estresante. Y como se puede ver, la corticosterona y la hormona del estrés, el nivel es mayor en animales diez minutos después del evento estresante.

Sólo ha visto segunda parte de Zeus en técnicas de retirada de la sangre de ratones y ratas. Después de ver tanto estos videos, debe tener una mejor comprensión de las consideraciones y procedimientos para recolección de sangre de estos animales y cómo se están utilizando en la investigación biomédica hoy. ¡Como siempre, gracias por ver!

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