Overview
Fonte: Vy M. Dong e Daniel Kim, Departamento de Química da Universidade da Califórnia, Irvine, CA
As reações de substituição nucleofílica estão entre os temas mais fundamentais abordados na química orgânica. Uma reação de substituição nucleofílica é aquela em que um nucleófilo (base lewis rica em elétrons) substitui um grupo de saída de um átomo de carbono.
SN1 (S = Substituição, N = Nucleofílico, 1 = cinética de primeira ordem)
SN2 (S = Substituição, N = Nucleofílico, 2 = cinética de segunda ordem)
Este vídeo ajudará a visualizar as diferenças sutis entre uma reação SN1 e SN2 e quais fatores ajudam a acelerar cada tipo de reação de substituição nucleofílica. A primeira seção se concentrará em reações que ajudarão a entender melhor e aprender sobre reações de substituição nucleofílica. A segunda seção se concentrará em um exemplo real de uma reação de substituição.
Principles
Em uma reação de substituição nucleofílica, um nucleófilo substitui um grupo de saída em um átomo de carbono. Uma substituição nucleofílica de uma etapa é um exemplo do mecanismo SN2. Esta reação é uma reação concertada onde os laços quebrando e formando estão ocorrendo ao mesmo tempo. Uma coisa a ter em mente é que os orbitais moleculares envolvidos na reação indicam que o ataque nucleofílico deve vir a 180 ° do grupo de saída. Portanto, alguns apelidam a reação SN2 do "ataque back-side". Este ataque back-side inverte a estereoquímica no carbono reagindo. Este é um exemplo de uma reação estereospecífica onde a estereoquímica no início da reação dita o resultado da estereoquímica após a reação.
Uma substituição nucleofílica de duas etapas é um exemplo do mecanismo SN1. Na primeira etapa, o grupo de saída sai e forma um intermediário chamado carbocation. Na segunda etapa, o nucleófilo ataca a carbocação. Como a carbocação é achiral (não quiral), qualquer estereótipo no início da reação é perdida. O produto ainda é quiral, mas agora é uma mistura uniforme de ambos os enantiomers que é chamado de mistura racial. As reações SN1 não são estereospecíficas.
Em duas partes, examinaremos os fatores que afetam as taxas relativas das reações SN1 e SN2.
Na primeira parte, estudaremos a reação SN1 usando 11 reações de tubo de ensaio. Todas as reações têm o mesmo esquema de reação geral:
Todas as taxas das reações são relativas umas às outras. A taxa de reação será determinada pelo indicador visual na reação. Como o cloreto de prata precipita-se fora de solução, o momento em que a reação vai de claro a nublado dá uma indicação visual da velocidade relativa da reação.
Em três das reações do tubo de ensaio, como a estrutura de halido alquila desempenha um papel na taxa das reações será testada. Três cloretos de alquila diferentes sob as mesmas condições serão testados:
Em duas das reações do tubo de ensaio, os efeitos de polaridade solvente na reação serão testados. Dois solventes diferentes serão testados:
| Tubo de ensaio | Solvente | Tipo de Solvente |
| 1 | 100% etanol | Prost polar |
| 2 | 5% de etanol:95% acetona | Principalmente apíptico polar |
Em duas das reações do tubo de ensaio, os efeitos do grupo de saída serão testados. Dois halidos alquilos diferentes serão usados:
Finalmente, quatro dos tubos de ensaio serão usados para medir a lei de taxas das reações. A taxa de reação será medida com concentrações variadas de solução de iodeto de sódio e soluções de 1-bromobutano.
| Tubo de ensaio |
cloreto tert-butil concentração |
Nitrato de prata concentração |
Tempo até precipitação |
| 1 | 0,1 M | 0,1 M | |
| 2 | 0,2 M | 0,1 M | |
| 3 | 0,1 M | 0,1 M | |
| 4 | 0,1 M | 0,05 M |
Na segunda parte, estudaremos a reação SN2 usando 11 reações de tubo de ensaio. Todas as reações têm o mesmo esquema de reação geral:
Todas as taxas das reações são relativas umas às outras. A taxa de reação será determinada pelo indicador visual de cloreto de sódio ou brometo de sódio precipitando-se fora de solução. Isso será indicado quando a reação for de claro a nublado.
Em três das reações do tubo de ensaio, como a estrutura de halido alquila desempenha um papel na taxa das reações será testada. Isso vai comparar os efeitos estéricos do carbono que está ligado ao bromo. Três cloretos de alquila diferentes sob as mesmas condições serão testados:
Em duas das reações do tubo de ensaio, os efeitos estéricos secundários do halido alquilo serão testados. Estes são efeitos estericos na molécula, não incluindo o carbono ligado ao brometo. Dois brometos alquil primários diferentes, sob as mesmas condições, serão testados:
Em duas das reações do tubo de ensaio, os efeitos do grupo de saída serão testados. Dois halidos alquilos diferentes serão usados:
Finalmente, quatro tubos de ensaio serão usados para medir a lei de taxas das reações. A taxa de reação será medida com concentrações variadas de solução de iodeto de sódio e soluções de 1-bromobutano.
| Tubo de ensaio |
Iodeto de sódio Concentração |
1-Bromobutano Concentração |
Tempo até precipitação |
| 1 | 15% | 1,0 M | |
| 2 | 15% | 2.0 M | |
| 3 | 15% | 1,0 M | |
| 4 | 7.5% | 1,0 M |
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Procedure
Parte 1: Estudar reações SN1
Estrutura Alkyl Halide:
- Meça 2 mL de uma solução de 0,1 M de nitrato de prata em etanol absoluto em cada um dos três tubos de ensaio.
- Adicione 2 gotas de 1-bromobutano no primeiro tubo de ensaio. Adicione 2 gotas de 2-bromobutano no segundo tubo de ensaio.
- Adicione 2 gotas de 2-bromo-2-metilpropano no último, terceiro tubo de ensaio.
- Rolha e agite cada tubo de ensaio.
- Observe o momento em que os primeiros sinais de nebulosidade ou precipitação aparecem.
Deixando efeitos de grupo:
- Meça 2 mL de uma solução de 0,1 M de nitrato de prata em etanol absoluto em cada um dos dois tubos de ensaio.
- Adicione 2 gotas de 2-bromo-2-metilpropano no primeiro tubo de ensaio e 2 gotas de 2-cloro-2-metilpropano no segundo tubo de ensaio.
- Rolha e agite cada tubo de ensaio.
- Observe o momento em que os primeiros sinais de nebulosidade ou precipitação aparecem.
Efeitos de polaridade solvente:
- Meça 2 mL de uma solução de 0,1 M de nitrato de prata no etanol absoluto no primeiro tubo de ensaio e meça 2 mL de uma solução de 0,1 M de nitrato de prata em 5% etanol/95% acetona no segundo tubo de ensaio.
- Adicione 2 gotas de 2-bromo-2-metilpropano em ambos os tubos de ensaio.
- Rolha e agite cada tubo de ensaio.
- Observe o momento em que os primeiros sinais de nebulosidade ou precipitação aparecem.
Determinando a Lei de Taxas SN1:
- Meça 0,5 mL de uma solução de 0,1 M de 2-cloro-2-metilpropano no etanol no primeiro tubo de ensaio.
- Meça 0,5 mL de uma solução de 0,2 M de 2-cloro-2-metilpropano no etanol no segundo tubo de ensaio.
- Adicione 1,0 mL de uma solução de 0,1 M de nitrato de prata em etanol absoluto em ambos os tubos de ensaio.
- Meça cuidadosamente o tempo necessário para observar nebulosidade ou precipitação.
- Meça 1,0 mL de uma solução de 0,1 M de nitrato de prata no etanol no terceiro tubo de ensaio.
- No quarto tubo de ensaio, meça 0,5 mL de uma solução de 0,1 M de nitrato de prata no etanol e adicione mais 0,5 mL de etanol.
- Em ambos os tubos de ensaio, adicione 1,0 mL de 0,1 M 2-cloro-2-metilpropano no etanol e meça cuidadosamente o tempo necessário para observar a nebulosidade ou precipitação.
Parte 2: Estudando reações SN2
Estrutura Alkyl Halide:
- Meça 2 mL de iodeto de sódio de 15% em acetona em cada um dos três tubos de ensaio.
- Adicione 2 gotas de 1-bromobutano no primeiro tubo de ensaio.
- Adicione 2 gotas de 2-bromobutano no segundo tubo de ensaio.
- Por fim, adicione 2 gotas de 2-bromo-2-metilpropano no último terceiro tubo de ensaio.
- Rolha e agite cada tubo de ensaio.
- Observe o momento em que os primeiros sinais de nebulosidade ou precipitação aparecem.
Efeitoséricos:
- Meça 1 mL de iodeto de sódio de 15% na solução de acetona em cada um dos dois tubos de ensaio.
- Adicione 2 gotas de 1-bromobutano no primeiro tubo de ensaio e adicione 2 gotas de brometo de neopentil no segundo tubo de ensaio.
- Rolha e agite cada tubo de ensaio.
- Observe o momento em que os primeiros sinais de nebulosidade ou precipitação aparecem.
Deixando efeitos de grupo:
- Meça 1 mL de iodeto de sódio de 15% na solução de acetona em cada um dos dois tubos de ensaio.
- Adicione 2 gotas de 1-bromobutano no primeiro tubo de ensaio e adicione 2 gotas de 1 clorobutano no segundo tubo de ensaio.
- Rolha e agite cada tubo de ensaio.
- Observe o momento em que os primeiros sinais de nebulosidade ou precipitação aparecem.
Determinando a Lei de Taxas SN2:
- Meça 1,0 mL de iodeto de sódio de 15% na solução de acetona em dois tubos de ensaio.
- Adicione 0,1 mL de solução de 1,0 M de 1-bromobutano em acetona no primeiro tubo de ensaio.
- Meça cuidadosamente o tempo necessário para observar o primeiro sinal de nebulosidade.
- No segundo tubo de ensaio, adicione 0,1 mL de uma solução de 2,0 M de 1-bromobutano em acetona.
- Meça cuidadosamente o tempo necessário para observar o primeiro sinal de nebulosidade.
- Meça 1,0 mL de 1,0 M 1-bromobutano em acetona no terceiro e quarto tubos de ensaio.
- Adicione 0,1 mL de um iodeto de sódio de 7,5 % na solução de acetona no terceiro tubo de ensaio.
- Meça cuidadosamente o tempo necessário para observar o primeiro sinal de nebulosidade.
- No quarto tubo de ensaio, adicione 0,1 mL de um iodeto de sódio de 15% na solução de acetona e meça cuidadosamente o tempo necessário para observar o primeiro sinal de nebulosidade.
A substituição nucleofílica é uma das reações mais fundamentais utilizadas na síntese orgânica.
Um "nucleófilo" é uma espécie rica em elétrons. Em uma substituição nucleofílica, um nucleófilo reage com um halido alquil para formar um produto com um novo grupo funcional. Esta reação é o ponto de partida para uma vasta gama de sínteses orgânicas.
Este vídeo ilustrará os princípios de duas categorias de substituições nucleofílicas, demonstrará os efeitos de diferentes reagentes na taxa de reação de cada um e discutirá algumas aplicações.
A substituição nucleofílica requer dois reagentes: um acano funcionalizado e um nucleófilo.
O alkane funcionalizado pode ser um álcool ou um halido sulfônico, mas geralmente é um halido alquilo. Em um halide alquila, o carbono ligado ao halogênio é chamado de carbono "alfa", e deve ser hibridizado sp3 para ser submetido à substituição nucleofílica. Qualquer carbono ligado ao alfa é um carbono "beta". Importante, o halógeno é um poderoso grupo de retirada de elétrons que faz com que o carbono alfa seja pobre em elétrons. O carbono alfa é, portanto, um "eletrófilo", o que significa que ele tem uma escassez de elétrons e pode aceitar mais.
Um "nucleófilo" é o oposto; uma espécie que pode doar elétrons. É geralmente um grupo funcional carregado negativamente, como um íon cloreto, ou o ânion de um sal orgânico, como um íon acetato. Os nucleófilos geralmente contêm pares de elétrons não compartilhados.
Em uma substituição nucleofílica, o nucleófilo reage com o halido alquila atacando o carbono alfa eletrofílico. O nucleófilo age como uma base de Lewis, doando um par de elétrons para o carbono alfa. Enquanto isso, a ligação entre o carbono alfa e o halogênio quebra. Os elétrons originalmente nessa ligação se juntam ao halógeno para formar um grupo de saída halide.
Uma substituição nucleofílica pode ocorrer através de um dos dois mecanismos. O primeiro começa com um lento ataque nucleofílico na parte traseira do carbono alfa - o lado oposto ao halógeno- seguido pela rápida partida do grupo de saída. Uma vez que tanto o halido alquila quanto o nucleófilo participam do passo lento, este mecanismo é chamado de "Substituição: Bimolecular Nucleofílico", ou "SN2", para abreviar. O mecanismo SN2 conclui com as outras ligações no carbono alfa mudando suas orientações e invertendo a configuração. Como o nucleófilo só ataca a parte traseira do carbono alfa, o mecanismo produz apenas um estereómero invertido do produto.
O outro mecanismo começa com a lenta dissociação do halido alquilo em um grupo de saída e uma "carbocação", um carbono altamente reativo e carregado positivamente. Ao contrário do mecanismo SN2, o nucleófilo pode atacar de ambos os lados. Ambos os estereosomers são produzidos, uma distinção detectada experimentalmente pela medição da rotação óptica. Uma vez que apenas uma molécula - o halide alquila-participa do passo lento, este mecanismo é chamado de "Substituição, Unimolecular Nucleofilílico", ou "SN1".
Agora que vimos os mecanismos de substituição nucleofílica, vamos explorar como ele se aplica a diferentes reagentes em diferentes condições.
Nesta seção, examinaremos os efeitos da estrutura de halídeos alquila, deixando a seleção do grupo e a polaridade de solventes no mecanismo SN1. As condições foram escolhidas para suprimir as reações do SN2.
Primeiro, estudamos o efeito da estrutura de halido alquilo. Meça 2 mL de nitrato de prata de 0,1 M em etanol absoluto em três tubos de ensaio.
Adicione 2 gotas de 1-bromobutano ao primeiro tubo de ensaio, 2 gotas de 2-bromobutano ao segundo tubo de ensaio, e duas gotas de 2-bromo-2-metilpropano no terceiro tubo de ensaio. Regissua o tempo em que a reação começa.
Aplique uma rolha em cada tubo e agite.
Registo o tempo em que a solução se torna turva ou um precipitado aparece, indicando a formação de brometo de prata insolúvel.
Em seguida, voltamos-nos para os efeitos de diferentes grupos de saída. Meça 2 mL de nitrato de prata de 0,1 M em etanol absoluto em dois tubos de ensaio.
Adicione 2 gotas de 2-bromo-2-metilpropano no primeiro tubo de ensaio, e 2 gotas de 2-cloro-2-metilpropano no segundo. Como antes, registe o tempo em que a reação começa, aplique uma rolha em cada tubo, agite e registe o tempo em que um precipitado aparece.
Finalmente, para estudar o efeito de diferentes solventes, meça 2 mL de nitrato de prata de 0,1 M em etanol absoluto em um tubo de ensaio. Meça 2 mL de nitrato de prata de 0,1 M em 95% de acetona em um segundo tubo de ensaio. Adicione 2 gotas de 2-bromo-2-metilpropano em cada tubo de ensaio.
Novamente, registe o tempo em que a reação começa, rolha e agite cada tubo, e registe o tempo em que um precipitado aparece.
A taxa de reação de um SN1 depende fortemente da natureza do halido alquila e do solvente.
Primeiro, vamos examinar a estrutura do halide alquilo. Nesta demonstração, 2-bromo-2-metilpropano reagiu a uma taxa muito mais rápida do que 2-bromobutano, que por sua vez reagiu mais rápido do que 1-bromobutano.
Estes resultados decorrem da natureza do intermediário de carbocação formado na lenta etapa inicial do mecanismo SN1. As carbocações estabilizam-se dispersando a carga positiva do carbono alfa sobre os carbonos beta através da polarização e hiperconjugação. Este efeito estabilizador é maior em halidos alquila terciários, que têm vários carbonos beta, e que, portanto, formam carbocações na taxa mais rápida durante uma reação SN1. Halidos alquilas secundários e primários têm efeitos de estabilização progressivamente menores e, portanto, taxas de reação progressivamente mais baixas.
Agora vamos explorar o grupo de saída. Nesta demonstração, 2-bromo-2-metilpropano reagiu a uma taxa mais rápida do que 2-cloro-2-metilpropano.
Isso ocorre porque o bromo forma uma ligação mais fraca com o carbono alfa comparado ao cloro. Em geral, os halógenos encontrados mais baixos na tabela periódica formam laços mais fracos do que os encontrados mais alto na tabela. A taxa da etapa inicial de dissociação em um mecanismo SN1 aumenta com a diminuição da força dos títulos. Essa tendência é comum tanto aos mecanismos SN1 quanto ao SN2.
Agora nos voltamos para efeitos solventes. Nesta demonstração, a reação entre 2-bromo-2-metilpropano e nitrato de prata ocorreu em uma taxa mais rápida quando dissolvida no etanol do que na acetona.
O etanol é altamente polar e prostício: tem um átomo de hidrogênio terminal eletropositivo e, portanto, é capaz de formar ligações de hidrogênio. É, portanto, mais eficaz em estabilizar tanto a carbocação quanto o grupo de saída do que a acetona, que é menos polar e apótica. Geralmente, as taxas de reações de SN1 aumentam com a polaridade do solvente.
Agora exploramos os efeitos da estrutura de halídeos alquila, deixando a polaridade do grupo e do solvente no mecanismo SN2. Mais uma vez, foram escolhidas condições para suprimir as reações do SN1.
Começamos estudando o efeito da estrutura alquila ao redor do carbono alfa. Meça 2 mL de iodeto de sódio de 15% em acetona em três tubos de ensaio. Adicione 2 gotas de 1-bromobutano ao primeiro tubo de ensaio, 2 gotas de 2-bromobutano no segundo, e 2 gotas de 2-bromo-2-metilpropano no terceiro. Registo o tempo necessário para que o precipitado, brometo de sódio, se forme como antes.
Em seguida, examinamos o efeito da estrutura alquila em torno do carbono beta. Meça 1 mL de iodeto de sódio de 15% em acetona em dois tubos de ensaio. Adicione 2 gotas de 1-bromobutano ao primeiro tubo de ensaio, e 2 gotas de brometo de neopentil para o segundo. Regisso tempo de reação como antes.
Finalmente, recorremos a efeitos de polaridade solvente. Adicione 1 mL de iodeto de sódio de 15% no etanol no primeiro tubo de ensaio, e 1 mL 15% de iodeto de sódio em acetona para o segundo. Adicione 2 gotas de 1-bromobutano a ambos, e registre o tempo necessário para que um precipitado se forme.
Primeiro, vamos examinar a estrutura alquila em torno do carbono alfa. Neste exemplo, 1-bromobutano reagiu na taxa mais rápida, 2-bromobutano reagiu mais lentamente, e 2-bromo-2-metilpropano mais lento de todos. Estes resultados são opostos aos encontrados nas reações do SN1.
A diferença é devido à geometria. O aumento do número de carbonos beta reduz a área exposta no carbono alfa sobre o qual pode ocorrer um ataque nucleofílico de costas bem sucedido. Este fenômeno é chamado de "obstáculo estérico". Halidos alquil primários são os menos esticamente dificultados, e experimentam as taxas mais rápidas de reação do SN2, enquanto halidos alquila terciários são mais dificultados, e experimentam as reações mais lentas.
Em seguida, voltamos-nos para a estrutura alquila em torno dos carbonos beta. 1-Bromobutane reagiu instantaneamente enquanto brometo neopentil não reagiu em tudo.
Isso também é explicado através de obstáculos estéricos. A presença de grupos volumosos no carbono beta reduz novamente a área do carbono alfa exposta ao ataque nucleofílico. Um carbono beta esticamente dificultado experimenta uma taxa de reação menor do que uma sem obstáculos.
Finalmente, olhamos para efeitos solventes. A taxa de reação de 1-bromobutano em acetona é muito maior do que no etanol. Isso é contrário aos resultados da reação do SN1.
Isso porque nas reações do SN2, solventes protéticos polares como o etanol estabilizam o nucleófilo, tornando-o menos reativo e, portanto, diminuindo a taxa de reação. Em contraste, solventes apóticos como a acetona não podem estabilizar o nucleófilo na mesma medida.
Resumindo: as taxas de reações SN2 diminuem através de obstáculos estéricos em carbonos alfa e beta. Isso é contrário às reações do SN1, onde os carbonos beta estabilizam a carbocação e aumentam a taxa. As taxas de ambas as reações aumentam à medida que a força de ligação entre o grupo de saída e o carbono alfa diminui. Finalmente, solventes protéticos polares retardam as reações do SN2 estabilizando o nucleófilo, mas aceleram as reações do SN1 estabilizando intermediários. Com esses resultados em mente, vamos examinar algumas aplicações.
A substituição nucleofílica é um passo fundamental na polimerização peptóide. Peptoides, monômeros sintéticos relacionados aos peptídeos, fornecem uma abordagem simples para o design de proteínas sintéticas altamente sintonizadas. Os polímeros são formados por aminas secundárias alternadamente broinas secundárias e substituindo o brometo terminal resultante por uma amina através de substituição nucleofílica. Este método pode ser usado para produzir cadeias poliméricas e nanofolhas auto-montadas.
Outra aplicação está na fabricação de substratos de cultura celular. Técnicas de litografia altamente automatizadas foram desenvolvidas para criar padrões com recursos de 10 mícrons em substratos revestidos de ouro. Um polímero é então impresso nas características e reagido através de substituição nucleofílica para adicionar azides ou outros ligantes à sua superfície. Isso fornece uma superfície altamente controlada sobre a qual as células podem ser cultivadas, e permite a exploração do impacto dos ligantes no crescimento e comportamento celular.
Você acabou de assistir a introdução de JoVE à substituição nucleofílica. Agora você deve entender os mecanismos SN1 e SN2, os efeitos de diferentes halidos e solventes alquil em cada um, e algumas aplicações. Obrigado por assistir!
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Results
Parte 1: Estudar reações SN1
Estrutura Alkyl Halide:
Deixando efeitos de grupo:
Efeitos de polaridade solvente:
Determinando aLei de Taxas SN1:
| Tubo de ensaio |
Nitrato de prata Concentração |
1-Bromobutano Concentração |
Tempo até precipitação |
| 1 | 0,1 M | 0,1 M | 20 s |
| 2 | 0,1 M | 0,2 M | 10 s |
| 3 | 0,1 M | 0,1 M | 20 s |
| 4 | 0,05 M | 0,1 M | 20 s |
Parte 2: Estudando reações SN2
Estrutura Alkyl Halide:
Efeitoséricos:
Deixando efeitos de grupo:
Determinando aLei de Taxas SN2:
| Tubo de ensaio |
Iodeto de sódio Concentração |
1-Bromobutano Concentração |
Tempo até precipitação |
| 1 | 15% | 1,0 M | 20 s |
| 2 | 15% | 2.0 M | 10 s |
| 3 | 15% | 1,0 M | 20 s |
| 4 | 7.5% | 1,0 M | 40 s |
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Applications and Summary
Esses experimentos são projetados para mostrar rapidamente tendências nas reações de substituição nucleofílicas. Testar experimentalmente essas tendências ajuda a entender melhor as diferenças sutis entre uma reação SN1 e SN2. Os químicos aprenderam a desenvolver e otimizar as condições de reação. Tudo decorre primeiro de entender a reação: o que acelera ou retarda uma reação e como podemos tirar proveito disso? Escolher o melhor solvente, temperatura ou concentração de reagentes pode afetar muito a rapidez com que uma reação terminará. Com o tempo, os químicos não se preocuparam apenas com a velocidade, mas também com seletividade e rendimentos. As reações de substituição nucleofílicas são uma reação importante para aprender, pois podem ser encontradas ao longo da literatura sintética.
Esta demonstração pode ser usada como recurso para reações de substituição nucleofílica; no entanto, é um esboço áspero sobre como estudar qualquer reação orgânica. Como mudar as condições de reação (mudar uma variável de cada vez) e observar seus afetos é a base do uso do método científico. Isso pode ser aplicado a outros tipos de reações além de reações de substituição, por exemplo, outras reações de substituição, como reações de substituição aromática e reações de substituição aciótica.
As reações são otimizadas para seus rendimentos, seletividade e velocidade (eficiência). Como o químico altera os parâmetros de reação - como catalisador, temperatura, solvente e capacidade de deixar o grupo - pode impactar em grande parte a reação. Conhecer a cinética de uma reação pode dar informações valiosas sobre a reação, e geralmente este é o começo para entender o mecanismo de uma reação.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
