Souris cellules épithéliales mammaires forme Mammospheres cours de la différenciation lactogène

Bonjour, je suis Bethany Morrison du laboratoire de la Dre Mary Lou Cutler au Département de pathologie de l’Université des sciences de la santé des services uniformes. Aujourd’hui, nous allons vous montrer une procédure pour le développement de sphères de mammos à partir de cellules épithéliales mammaires de souris HC 11. Nous utilisons cette procédure dans notre laboratoire pour étudier la lactodifférenciation.

Alors commençons, pour démarrer ce protocole. Les cellules HC 11 sont cultivées jusqu’à la confluence pendant six jours dans le milieu RPMI 1640, qui est complété par 10 % de sérum de veau fœtal cinq microgrammes par millilitre d’insuline, 10 micromolaires de Heiss et 10 nanogrammes par millilitre. Facteur de croissance épidermique EGF pour établir la compétence.

Ces cellules ont été largement utilisées par les laboratoires de Nancy Hines et Bernard Groner pour étudier la régulation de la différenciation génique dans le capot de culture tissulaire. Les cellules sont ensuite lavées avec du PBS et maintenues dans un milieu de croissance sans EGF pendant 24 heures. Suite à cette incubation, les cellules sont incubées dans un milieu de différenciation composé de RPMI complété par de la dexaméthasone, de l’insuline et de la prolactine afin d’induire une lacto-différenciation après l’incubation.

Dans le milieu de différenciation, un microscope Olympus IX 71 équipé d’un appareil photo numérique est utilisé pour photographier et énumérer les sphères mamo. Par microscopie à contraste de phase, les sphères mamo sont photographiées et dénombrées plusieurs fois pendant 120 heures après l’induction. Cette image montre un grossissement de faible puissance d’une mémoire normale.

Les cellules monocouches des cellules épithéliales doivent être maintenues à la confluence pendant environ trois jours avant d’être stimulées par des hormones géniques. Voici un aperçu de nouvelles sphères de mamammos formées trois jours après l’induction à un grossissement de faible puissance. Ils commencent à apparaître sous la forme de petites structures en forme de dôme espacées au hasard dans les cellules épithéliales.

Encore une fois à faible puissance. Voici un aperçu de plusieurs mammosphères qui se sont développées cinq jours après l’induction. Les sphères mamos ont continué à croître à la fois en taille et en nombre ici à fort grossissement, la bulle ou le dôme caractéristique de la sphère mamos peut être clairement vu.

Nous venons de vous montrer comment induire des cellules épithéliales à mémoire, afin qu’elles forment des sphères de mammos, qui sont utilisées comme marqueurs de différenciation génique. Lors de cette procédure, il est important de se rappeler de maintenir les cellules de confluence avant l’induction, car pendant ce temps, les cellules produisent des protéines matricielles avec lesquelles elles doivent interagir afin d’être pleinement confiantes pour répondre aux hormones géniques. Il est également important de ne pas oublier de retirer l’EGF du milieu avant le traitement, car l’EGF inhibera le processus de différenciation.

Donc c’est tout. Merci d’avoir regardé et bonne chance dans vos expériences.