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Usando Lustro para Caracterização Optogenética Automatizada de Leveduras de Alto Rendimento
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JoVE Journal Bioengineering
Using Lustro for Automated High-Throughput Optogenetic Characterization of Yeast

Usando Lustro para Caracterização Optogenética Automatizada de Leveduras de Alto Rendimento

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02:29 min

August 04, 2023

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02:29 min
August 04, 2023

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Comece configurando a estação de trabalho de automação. Incorpore um dispositivo de iluminação de microplaca, como um optoPlate, que permite o acesso conveniente ao braço da garra do robô. Em seguida, processe uma planilha com o script MATLAB disponível para programar o optoPlate.

Execute o programa de estimulação da luz piscando na optoPlate. Para programar o robô, solucione possíveis erros para garantir o bom funcionamento da operadora e das definições do LabWare. Execute uma placa vazia através do loop de script várias vezes para verificar a capacidade do braço da garra do robô de pegar e colocar a placa com precisão.

Em seguida, selecione colônias das placas para configurar a placa de amostra. Em seguida, inocular-os em três mililitros de meio sintético completo em tubos de cultura de vidro. Incube essas culturas durante a noite a 30 graus Celsius em um tambor de rolo no escuro.

Na cubeta, diluir 200 microlitros da cultura em um mililitro de meio sintético completo. Registre sua densidade óptica usando um espectrofotômetro. Em seguida, diluir cada cultura noturna para uma densidade óptica de 0,1 em tubos de cultura de vidro.

Pipetar as culturas diluídas em uma placa de 96 poços. Incluir poços com meios em branco e células não fluorescentes como controles negativos. Incubar a placa de amostra numa incubadora a 30 graus Celsius durante cinco horas.

Agora, coloque a placa de amostra no agitador do aquecedor. Inicie o script de automação clicando em Executar. Uma vez que a medição inicial tenha sido registrada no leitor de placas, inicie o programa de estimulação da luz ligando a faixa de energia do dispositivo de iluminação.

Os valores de fluorescência ao longo do tempo para uma cepa optogenética mostraram que o nível geral de fluorescência foi proporcional ao ciclo de trabalho da estimulação luminosa. Os valores de densidade óptica correspondentes foram consistentes, sugerindo que o crescimento permaneceu inalterado pela variação das condições de luz. Diferentes linhagens optogenéticas empregaram diferentes respostas às variações de intensidade de pulso de luz, período e ciclo de trabalho.

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