Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Placera ett locklip med dissekerade äggkammare på mikroskopstadiet.
Drosophila nervceller är en grupp av 15 celler inuti äggkammaren som ansvarar för deponering av moderligt härledda näringsämnen och biomolekyler i den utvecklande oocyten. Ställ in mikroinjektorsystemet till lämpligt injektions- och kompensationstryck för att säkerställa konsekvent injektionsvolym och utåtflöde.
Se till att det inte finns någon luft instängd i kapillärens spets och att det finns ett kontinuerligt flöde av lösningen.
Följande protokoll visar microinjecting Drosophila sjuksköterska celler med fluorescerande oligonucleotide sonder, kallas molekylära fyrar, mot maternally bidragit mRNA transkript för levande cell imaging.
- För mikroinjektion av molekylära fyrar, välj 40x oljemålet och montera ett täckspill med den dissekerade äggkammaren på mikroskopstadiet.
Använd styrspaken för mikromanipulator, sänk försiktigt en nål laddad med en mikroliter molekylär fyrlösning i oljedroppen.
Fokusera på äggkammaren som ska mikroin injiceras och sätt nålen i fokus igen nära äggkammarens kant. Gör en fin justering av Z-positionen för målet så att membranet som separerar follikelcellerna från sjuksköterskecellerna är i fokus.
- För att säkerställa reproducerbar mikroinjektionsframgång, fokusera noggrant på membranet som separerar follikelcellerna och sjuksköterskecellerna som injiceras, samtidigt som nålens spets i fokus med mikromanipulatorn.
- När alla molekylära fyrar har injicerats, ta försiktigt bort nålen och dra tillbaka den till hempositionen. Ändra målet till önskad förstoring för bildförvärv, fokusera sedan på äggkammaren under det nya målet och börja bildförvärvet.
