成人 果蝇 注射：化合物或标签递送方法

- 使用针头拉拔器拉动薄壁玻璃毛细管，准备锥形注射针头。在显微镜下拿一根针头并折断尖端，确保开口刚好足以刺穿成蝇角质层，而不会造成不必要的伤害。通过在针头中加入无菌染料和盐缓冲溶液，然后将其喷射到载物台千分尺上的一滴矿物油上来测量注射体积。使用千分尺上的刻度测量喷射液滴的直径，该直径可用于计算分配的体积，并相应地校准您的注射器设置。

将注射液装入针头，并将其安装到注射喷嘴上。用 CO2 麻醉你的苍蝇，并将它们放在 CO2 飞垫上，这将使它们保持麻醉状态。一旦果蝇处于实验的正确方向，即可继续进行进样。在示例方案中，我们将用荧光素标记的颗粒注射成蝇进行体内成像。

- 用针头拉出薄壁玻璃毛细管后，用千分尺将针头放在显微镜下，并使用 5 号细尖不锈钢镊子将针头折断成 100 微米的针尖直径。要测量将注入每个苍蝇的液体体积，请在 PBS 中加入无菌 5% 食用色素的毛细管针头，然后将液体排放到 0.01 毫米平台千分尺上的一滴矿物油上。

将 10 微升每毫升 1.6 毫克的颗粒分配到一小块封口膜上，然后将液体拉入针头中。将针头安装到注射器喷嘴中，将麻醉的果蝇沿着它们在飞垫上的指定区域排成一行，腹面朝上，头部朝向垫的前部。将小瓶放在工作台上的相应区域，用 5 个 100 毫秒的液体泵将果蝇注射到腹部的上角，总共输送约 10 纳升的颗粒。进样时将每只果蝇转移到适当的样品瓶中，注意样品瓶上的时间。

接下来，在一根新针头中加入 0.4% 台盼蓝溶液，并将气动注射器设置为"门控"，以允许恒定的空气流将液体从针头中推出。初次注射后 30 分钟，向每只果蝇腹部注射台盼蓝，直到腹部充盈和膨胀。将苍蝇安装在显微镜载玻片上，电工胶带腹侧朝下，将翅膀推到苍蝇的一侧以将它们固定在胶带上。然后轻轻地将头部推入胶带中，以确保苍蝇不会移动。