Encyclopedia of Experiments: Biology
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Transcript
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- Prepare agulhas de injeção afiladas puxando capilares de vidro de paredes finas usando um puxador de agulha. Segure uma agulha sob um microscópio e quebre a ponta, certificando-se de que a abertura é grande o suficiente para perfurar a cutícula de mosca adulta sem feri-la mais do que o necessário. Meça o volume de injeção carregando sua agulha com uma solução de corante estéril e tampão de sal e, em seguida, ejetando-a em uma gota de óleo mineral em um micrômetro de palco. configurações em conformidade.
Carregue a agulha com sua solução de injeção e monte-a em um bocal de injeção. Anesthetize suas moscas com CO2 e organize-as em uma plataforma de mosca de CO2 que as manterá anestesiadas. Uma vez que as moscas estejam na orientação correta para o seu experimento, proceda com as injeções. No protocolo de exemplo, injetaremos moscas adultas com partículas rotuladas por fluoresceína para imagens in vivo.
- Depois de puxar capilares de vidro de parede fina com um puxador de agulha, use um micrômetro para segurar a agulha sob um microscópio e use o número cinco pinças de aço inoxidável de ponto fino para quebrar a ponta para um diâmetro de ponta de 100 micrômetros. Para medir o volume de líquido que será injetado em cada mosca, carregue uma agulha capilar com coloração alimentar estéril de 5% em PBS e expela o líquido em uma gota de óleo mineral em um micrômetro de estágio de 0,01 milímetros.
Distribua 10 microlitadores de 1,6 miligramas por partículas mililitros em um pequeno quadrado de parafilm e puxe o líquido para dentro da agulha. lado ventral para cima, com as cabeças orientadas para a frente da almofada. Coloque os frascos em áreas correspondentes no banco e injete as moscas no canto superior do abdômen com cinco bombas de 100 milissegundos de líquido para entregar cerca de 10 nanoliters de partículas totais. o tempo no frasco.
Em seguida, carregue uma nova agulha com 0,4% de solução Trypan Blue e ajuste o injetor pneumático para 'fechado' para permitir um fluxo constante de ar para empurrar o líquido para fora da agulha. 30 minutos após a injeção inicial, injete cada abdômen de mosca com Trypan Blue até que os abdômens estejam cheios e distendidos. Monte as moscas em slides de microscópio com fita adesiva para baixo, empurrando as asas para o lado da mosca para fixá-las à fita.
