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JoVE Encyclopedia of Experiments
Encyclopedia of Experiments: Biology

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Nematode Slide Preparation

 
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Nematode Slide Preparation: Eine Methode, um Tiere auf einem Agar Pad zu mounten

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- Legen Sie zunächst ein Mikroskop-Dia zwischen zwei anderen Dias mit Klebeband. Diese bieten Unterstützung und Abstandshalter für die Agarose-Pad-Vorbereitung. Als nächstes legen Sie einen Tropfen geschmolzene Agarose auf die Folie. Drücken Sie sofort auf sie mit einem anderen Dia.

Nachdem die Agarose verfestigt ist, trennen Sie die Dias sorgfältig, so dass die Agarose auf einem Dia bleibt. Verwenden Sie immer frisch gemachte Pads, da ausgetrocknete Pads die Tiere dehydrieren können. Stellen Sie sicher, dass es keine Risse oder Blasen gibt, die die Pad-Integrität stören können.

Als nächstes fügen Sie einen Tropfen Anästhetikum in das Pad-Center und übertragen Sie 10 bis 15 Tiere, so wenig Bakterien mit ihnen wie möglich. Überschüssige Bakterien könnten mit der Bildgebung stören. Wenn die Anästhesielösung austrocknet, fügen Sie einen zweiten Tropfen auf die Tiere.

Legen Sie vorsichtig einen Deckelschlupf über das Pad. Vermeiden Sie blasen oder setzen Sie ihn zu stark unter Druck, um eine Beschädigung der Tiere zu verhindern. Beschriften Sie schließlich den Dia, der für die Bildgebung bereit ist.

- Beginnen Sie mit der Vorbereitung von Dias für die Bildgebung. Legen Sie einen Tropfen geschmolzener Agarose auf ein Mikroskopschlitten und drücken Sie sofort den Tröpfchen mit einem anderen Mikroskopschlitten, der die Agarose sanft abflacht.

Dann trennen Sie vorsichtig die beiden Dias und lassen Sie das erstarrte Pad auf einem der Dias. Legen Sie das Dia auf die Mikroskopbühne und fügen Sie einen 5- bis 10-Mikroliter-Tropfen Anästhetikum in die Mitte des Agras-Pads.

Verwenden Sie einen wärmesterilisierten Pick, um schnell 10 bis 15 Tiere von der Stockplatte auf das Anästhetikum zu übertragen, bevor die Lösung austrocknet. Dann tragen Sie einen Deckelschlappe auf, indem Sie ihn direkt über dem Agarose-Pad positionieren und vorsichtig fallen lassen.

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