尼罗河红染色 C. elegans： 固定动物脂质液滴可视化的方法

-当可视化脂质液滴时，中性脂质的细胞内储存细胞器首先在样品中加入洗涤剂溶液，例如含有 Triton X-100 的溶液。这将渗透到蠕虫的细胞中。接下来，将样品固定在适当浓度的异丙帕诺中，例如 40%。

然后，在样品中加入尼罗河红，并保护它免受光线的照射，因为染料对光线敏感。 固定允许染料进入整个动物的脂质液滴。尼罗河红是一种嗜脂染料，其荧光发射谱取决于当地脂质环境的极性。

当暴露在极性脂质（如磷脂）中时，尼罗河红的发射光谱处于较高的红色波长。当暴露在脂质液滴中性核心的三氯二醇和固醇酯酯中时，尼罗河红的发射光谱会转移到较低的黄金波长。

因此，使用荧光显微镜的绿色通道，收集黄金波长的排放物，可视化尼罗河红染色整个动物的脂质液滴。在示例协议中，我们将看到尼罗河红染色程序，并在固定样品中对脂质液滴进行成像。

- 进行尼罗河红脂染色，板虫线虫生长介质，或NGM，播种晚日志OP50大肠杆菌，并在20摄氏度到L4早期生长蠕虫。用1毫升PBST溶液清洗蠕虫，并将蠕虫悬架转移到1.5毫升微胶管。

以560倍重力对蠕虫进行一分钟的离心处理，然后去除超细剂，重复PBST洗涤，直到大肠杆菌从悬架中清除。接下来，在蠕虫颗粒中，加入100微升的40%异丙酚，或60%用于ORO染色，并在室温下孵育样品3分钟。

- 添加异丙帕诺对染色前蠕虫的适当渗透至关重要。

- 以 560 倍重力对蠕虫进行离心，并在不破坏蠕虫颗粒的情况下去除超母体。

-在离心过程中尽量减少光线照射非常重要。

- 现在，在黑暗中，向每个样品添加600 微升以前准备好的 NR 工作解决方案。将管子倒置三次，并完全混合蠕虫和溶液。然后在室温下在黑暗中孵化样品两个小时。

孵化后，将蠕虫离心并去除超细剂。然后加入600微升PBST，在黑暗中孵化样品30分钟，去除多余的NR污渍。在像以前一样再次旋转样品后，除大约50微升的超自然分子之外，全部去除。