Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Encyclopedia of Experiments
Encyclopedia of Experiments: Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

שחייה-Induced שיתוק (SWIP) Assay

 
Click here for the English version

שחייה-Induced שיתוק (SWIP) Assay: שיטה לכמת תנועה דופמין בתיווך C. elegans

Article

Transcript

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the English version.

- כדי לבצע את השיתוק שחייה-iduced, או SWIP assay, להעביר L4 מבוים C. זחלים אלגנים לצלחת נקודה זכוכית מלא נוזל.

כדי להעריך שחייה בתיווך דופמין, להקליט את תנועת התולעת המאופיינת על ידי כיפוף גוף בצורת C והתנהגות חבטות. בדרך כלל, נוירונים דופאמין לשחרר דופמין לתוך שסוע סינפטית, אשר בתורו, קושר קולטני דופמין על התא המקבל.

לאחר המסר מועבר הלאה, דופמין הוא שוחרר מן הקולטנים, נוירוטרנסמיטורים מאוגדים ניתן לקחת על ידי נוירון דופאמין באמצעות חלבוני טרנספורטר מיוחדים בשימוש חוזר.

בזחלים עם שינוי דופמין איתות, הנגרמת על ידי השבתת מוטציות טרנספורטר דופמין או טיפולים תרופתיים המגבירים את שחרור דופמין, דופמין מצטבר שסוע סינפטית. עודף דופמין מעל מגרה את קולטני דופמין להפריע לתוכנית המוטורית ולהשאיר את הזחלים משותקים.

בפרוטוקול הדוגמה, נראה הדגמות מפורטות של מבחני SWIP ידניים ואוטומטיים ב- C. elegans שטופלו באמפטמין.

- להערכה ידנית של SWIP, להוסיף 40 מיקרוליטרים של פתרון בקרה עם או בלי 0.5 מילימולאר אמפטמין לתוך צלחת ספוט זכוכית. תחת סטריאוסקופ, לבחור 8 עד 10 תולעי שלב L4 מאוחר עם להרים ריסים, ולהטביע את הבחירה בבאר המכילה את הפתרון עד התולעים לעבור את הבחירה לשחות לתוך הפתרון.

התחל את שעון העצר. שים לב למספר התולעים ששוחררו לבאר, והתבונן והקלט את מספר התולעים המציגות SWIP בכל סימן דקה במשך 10 דקות בסך הכל.

בסוף ההליך, להעתיק את הנתונים הגולמיים לתוך גיליון אלקטרוני ולחשב את אחוז התולעים משותק על ידי חלוקת מספר התולעים משותק בכל דקה על ידי המספר הכולל של תולעים שנבדקו לאורך כל ההסתערות והכפלה על ידי 100. העתק את ערכי האחוזים לכל תוכנה גרפית וסטטיסטית והתווה את הנתונים עם ערכי אחוז SWIP על ציר y וזמן על ציר x באמצעות xy graph

ניתוח סטטיסטי בין קבוצות הבקרה והאמפטמין המטופלות וזמן הטיפול יכול להתבצע. לדוגמה, באמצעות ניתוח ANOVA ופוסט הוק דו כיווני.

לניתוח אוטומטי של שיתוק המושרה בשחייה, הגדר את המצלמה, תוכנת מעקב התולעים והתסריט כדי להפעיל את ניתוח תוכנת המעקב.

לאחר מכן, להקליט קטעי וידאו שחייה של תולעת אחת בכל פעם, ולהשתמש בתוכנת מעקב תולעת כדי לחשב את התדירות של כיפופי גוף. בעקבות התסריט שסופק עם תוכנת המעקב כדי להשיג את התדר תולעת חבטות וליצור מפות חום מן התולעת חבטות נתונים.

Tags

ערך ריק הנפקה
Read Article

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter