Drosofilia Saggio del labirinto Y: un metodo per valutare le risposte olfattive nelle mosche

- Un labirinto Y è costituito da un connettore a forma di Y con tre flaconcini a mosca collegati ad esso da tubi dritti o rastremati. Le mosche si muovono attraverso il labirinto verso il lato con lo stimolo che preferiscono. Per avviare l'esperimento, posizionare una carta velina con la soluzione contenente le sostanze chimiche volatili in ogni flaconcino. Quindi, collegarle ai tubi rastremati. I tubi rastremati limitano la capacità delle mosche di tornare al centro del labirinto e rallentano la diffusione delle sostanze chimiche volatili.

Successivamente, il freddo affamato vola per rallentarli. Non utilizzare anestesia chimica, in quanto ciò potrebbe influire sull'esito del saggio. Collegare rapidamente il flaconcino con le mosche refrigerate al lato finale del labirinto. Lasciare le mosche per esplorare il labirinto. Per ridurre qualsiasi preferenza causata dalla luce intensa, eseguire questo passaggio sotto la luce rosso lontano, che le mosche non vedono. Infine, contare le mosche su ciascun lato del labirinto. La loro posizione nel labirinto indica la loro preferenza verso quel profumo chimico volatile.

Nel protocollo di esempio, vedremo una configurazione del saggio Y-maze con tipo selvaggio Drosophila.

- Prima di condurre il saggio la mattina seguente, alla fine della giornata, trasferire coorti da 10 a 20 linee sperimentali su fiale di vetro con umidità fornita da un asciugamano bagnato. Le mosche devono essere testate in 16-18 ore oppure potrebbero morire a causa di essiccazione o fame. Il giorno successivo, assemblate il labirinto Y. Inizia unendo il connettore a forma di Y a due flaconcini di vetro utilizzando connettori in schiuma con punte di pipetta tagliate che rendono i condotti. La loro forma affusolato rende questi passaggi a senso unico.

Il terzo ramo della "Y" è attaccato a un tubo di carico, realizzato dalla grande porzione di una punta di pipetta e consente il passaggio dal flaconcino di carico al punto di scelta del labirinto. Oltre ogni tunnel di rastremare c'è un flaconcino di vetro, uno dei quali deve essere caricato con un odorante. Caricarli come boli da 40 microlitri imbevuti di quadrati di carta velina da 28 millimetri. Quale dei due contiene l'odore deve alternarsi casualmente.

Per eseguire il test, raffreddare prima brevemente le mosche sul ghiaccio, quindi le mosche vengono rallentate. Questo dovrebbe essere sotto la luce rossa lontana dalle lampadine a LED e a 25 gradi Celsius. Far cadere delicatamente la coorte di mosche nel flaconcino di carico e caricare il labirinto Y con le mosche di prova. Non usare l'anestesia del gas.

- È davvero fondamentale trasferire le mosche al flaconcino di carico sia rapidamente che delicatamente. In realtà è il passo più difficile di questo esperimento perché le mosche devono svegliarsi rapidamente prima della diffusione degli odori nel labirinto Y.

- Le mosche dovrebbero essere autorizzate a esplorare il labirinto per 24 ore, quindi un numero massimo di mosche si sposta sull'una o sull'altra fiala di vetro. Il numero di mosche presenti nei diversi tubi serve a calcolare l'indice olfattivo. I metodi statistici standard devono essere applicati a questo valore, raccolto dal comportamento di un massimo di 10 mosche.

Se le coorti a 10 voli non forniscono risultati coerenti, le prove possono essere eseguite con coorti a 20 voli. Per pulire i componenti del labirinto, immergerli, smontati, in RBS 35 MD durante la notte. Seguire questo con risciacqui in acqua del rubinetto e un risciacquo finale in acqua DI prima dell'essiccazione all&aria.