Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- C. elegans förekommer i två kön: hermafroditer, som har två X-kromosomer, och män, som bara har en X-kromosom som kallas XO- eller X-null.
Hermafroditer producerar både oocyter och spermier och kan reproducera sig genom självbefruktning. Nästan alla deras könsceller bär en X-kromosom, så avkommor som är resultatet av självbefruktning är mestadels hermafroditer.
Sällan går X-kromosomen förlorad under gametogenesis, vilket resulterar i manliga avkommor endast cirka 0,1 till 0,2% av tiden.
Istället kan vi göra en hermafrodit med en hane som resulterar i att ungefär hälften av avkomman är manlig.
- Först få ett stort antal män genom att korsa fem vildtypshanar och en hermafrodit på en liten gräsmatta av E. coli OP50-bakterier som sås i mitten av en nematodtillväxtmedium eller NGM-platta. Ungefär 50% av nästa generation kommer att vara vildtypshanar.
För att samla L4 steg män, undersöka utvecklingsstadiet och svansmorfologi under ett dissekerande mikroskop. En L4-scenmask plockas baserat på svansmorfologi. En manlig mask har en rundad svans, medan en hermafrodit har en spetsig svans.
Använd en platinatråd, välj 7 till 10 L4 steg hanar per experiment och överför dem till NGM-platta sådd med OP50 och låt dem växa i en dag eller två. Växande celibathanar i avsaknad av hermafroditer förhindrar förlust av spermier och därmed kommer ett stort antal spermatider att finnas tillgängliga under försöksförfarandet.
