C.エレガンス 化学式アッセイ:ワームの化学感覚をテストする方法

-遭遇した状態を理解し、それに応じてそれらに応答するために、ワームC.エレガンスは、とりわけ、多種多様な異なる化学物質を検出することができる高度に発達した化学感覚システムを有する。

頭部の感覚ニューロン、アンフィドおよび内側の唇神経、ならびに尾のニューロンであるファミドニューロンは、キューティクルを通して直接的または間接的に外の状態にさらされます。

揮発性臭気や水溶性の手がかりに対する化学戦術反応をテストするには、所望の発達段階のワームを分離し、以前に調製された実験場で試験化学物質にさらします。

逆に、重金属のようなあまり好ましくないまたは有毒な化学物質にさらされると、ワームは負の気化を示し、化学物質を避ける。したがって、嗅覚またはガスタトリー突然変異体は回避化学物質を避けることができず、回避状態を避ける野生型動物とは対照的に好ましくない状態にとどまる。

プロトコルの例では、銅に対するワームの嫌悪感をテストする、化学軸アッセイのデモンストレーションが見られます。

- 一晩インキュベーターからプレートを取り出し、プレートのマークされた下側をガイドとして使用して、寒天の端に作りたての0.5モル銅2硫酸溶液のピペット100マイクロリットルを使用して、外側の銅障壁を作り出します。

銅2つの硫酸溶液が細菌パッチに接触していないことを確認し、銅溶液がプレート上に乾燥することを可能にする。

アッセイの直前に、実験生物を細菌を含まない寒天プレートに移し、線虫が1分間自由に動いて余分な細菌を除去できるようにします。

次に、ミクロ遠心分離管にワームを洗浄するために24時間前に移された若い成人とプレートにM9のピペット1ミリリットル。線虫を3,000倍gで遠心分離機1分間。

ワームは、ワームペレットを破壊することなく、チューブの底にペレットを形成する必要があります。

もし過剰な細菌が最初にワームと一緒に移された場合は、合計5回繰り返す。最終洗浄後、上清をM9溶液100マイクロリットルまで吸引し、虫ペレットが残る。

チューブの底から細菌を含まない半分のアッセイプレートに20マイクロリットルのミネットペレットを入れ替え、10個のワームをアッセイプレートに移し、汚染食品が存在しないようにしてください。

1分以内に実験室組織で線虫から余分なM9溶液を取り除く。M9溶液が銅2つの硫酸溶液に接触せず、ワームと寒天表面がそのまま残っていることを確認してください。

M9溶液が取り除かれ、すべてのワームが非液体の運動パターンを開始したら、すなわち、彼らがスラッシングを停止したとき、アッセイストップウォッチを開始します。

30分ごとにアッセイプレートをチェックしてください。細菌パッチ付きのアッセイプレートでは、4時間にわたって食品パッチに達した場合に生物に正のスコアを付けます。