Augenlinsen-Dissektion: Eine Technik zur Beobachtung der Morphologie von Zebrafischlinsen

- Ein Zebrafischauge besteht aus Hornhaut, Sklera, Linse und Netzhaut. Die Hornhaut ist ein transparentes Gewebe, das Licht in das Auge eindringen lässt. Die Sklera ist ein undurchsichtiges Gewebe, das kontinuierlich mit der Hornhaut ist und eine äußere Schutzschicht bildet.

Um das Auge zu sezieren, füllen Sie eine Petrischale mit Silikon und lassen Sie es setzen. Nun legen Sie einen anästhesierten Fisch in die Schale und verbrauchen die Augen mit einer Mikroschere. Übertragen Sie die Augen auf eine Platte mit PBS gefüllt, um einen konstanten pH-Wert im Gewebe zu halten und richten Sie das Auge mit der hinteren Seite nach oben. Halten Sie das Auge mit Zange und sorgfältig machen drei radiale Schnitte durch die Sklera und Netzhaut.

Als nächstes falten Sie das Gewebe heraus, um die Linse zu offenbaren. Positionieren Sie nun das Auge mit der vorderen Seite nach oben und entfernen Sie die Sklera und die Netzhaut. Schaufeln Sie die Linse aus dem sezierten Auge und entfernen Sie das verbleibende Gewebe um sie herum. Im folgenden Protokoll führen wir Larven- und adulte Zebrafischlinsen-Dissektionen durch, um die Linsenmorphologie zu analysieren.

Nach Bestätigung von Ausreichend Sedierung Mit Tricaine, Verwenden Microdissection Schere An Sofort Verbrauchsteuern Beide Augen Von Entweder Eine Erwachsene Oder larval Zebrafisch, Und Ort Beide Augen In Eine 35-Millimeter maßgeschneidert Petri Gericht Mit Eine Silikon Präparation Form Gefüllt Mit Pbs. An Ernte das Objektiv Von Eine Erwachsene Zebrafisch, Ort das Auge Posterior Seite oben Und Einfügen Zange Auf Eine Weniger Als 45 Grad Winkel Durch das Optik Datenträger. Verwenden Präparation Schere An Machen Zwei Oder Drei Radiale Einschnitte Durch das Netzhaut Und Sklera Von das Optik Datenträger An das ziliary Zone In das Immobilisiert Auge Und Schale Zurück das Netzhaut Und Sklera mögen Blume Blütenblätter. Invertieren das Auge Hornhaut Seite oben Und Verwenden das Flach Seite von das Schere An Immobilisieren das Objektiv Indirekt Über Manipulation von das Sklera Und Hornhaut Während Mit Zange An Ziehen Weg das Netzhaut Und Angefügt Gewebe. Dann Sorgfältig Trimmen Weg jegliche Überschuss Gewebe Von das Objektiv.

Für Larven Zebrafisch Linsenernte, spielt ein Larvenauge hintere Seite auf den flachen Teil einer Silikonschale von PBS. Und verwenden Sie eine geschärfte Wolframnadel, um Radioschnitte durch die Netzhaut und Sklera zu machen, während das Auge mit einer anderen Nadel oder Zange immobilisieren. Dann schaufeln Sie sanft die Linse aus dem dissoziierten Auge mit der stumpfen Seite einer maßgeschneiderten Wolframdrahtnadel und ziehen Sie vorsichtig weg.