Øyelinse disseksjon: En teknikk for å observere sebrafisklinsemorfologi

- Et sebrafiskøye består av hornhinne, sclera, linse og netthinne. Hornhinnen er et gjennomsiktig vev som gjør det mulig for lys å komme inn i øyet. Sclera er et ugjennomsiktig vev som er kontinuerlig med hornhinnen, og danner et ytre beskyttende lag. Linsen er en sfærisk struktur som fokuserer lys på netthinnen, som er et lysfølsomt lag av vev som konverterer lys til et nevralt signal.

For å dissekere øyet, fyll en Petri-tallerken med silikon og la den sette. Legg nå en bedøvet fisk i parabolen og sluk øynene ved hjelp av en mikrosaks. Overfør øynene til en tallerken fylt med PBS for å opprettholde en konstant pH i vevet og orienter øyet med den bakre siden vendt opp. Hold øyet med tang og lag forsiktig tre radiale kutt gjennom sclera og netthinnen.

Deretter bretter du ut vevet for å avsløre linsen. Nå, plasser øyet med den fremre siden vendt opp og fjern sclera og netthinne. Scoop ut linsen fra det dissekerte øyet og fjern eventuelt gjenværende vev rundt det. I følgende protokoll vil vi utføre larval og voksen sebrafisk linse disseksjoner for å analysere linsemorfologi.

Etter Bekreftelse Av Tilstrekkelig Sedasjon Med trikain, Bruke mikrodisseksjon Saks Å Umiddelbart Avgiftsdirektoratet Både Øyne Fra Enten En Voksen Eller larv sebrafisk, Og Sted Både Øyne I A 35 millimeter Skreddersydd Petri Parabolen Med A Silikon Disseksjon Mold Fylt Med Pbs. Å Harvest den Linsen Fra En Voksen sebrafisk, Sted den Øye Bakre side Up Og Sette inn Tang På A Mindre Enn 45 Grad Vinkel Gjennom den Optikk Disk. Bruke Disseksjon Saks Å Gjøre To Eller Tre Radial Incisions Gjennom den Netthinnen Og Sclera Fra den Optikk Disk Å den ciliary Sonen I den Immobilisert Øye Og Skallet Tilbake den Netthinnen Og Sclera Som Blomst Kronblad. Inverter den Øye Hornhinnen side Up Og Bruke den Flat side Av den Saks Å immobilisere den Linsen Indirekte Via Manipulasjon Av den Sclera Og Hornhinnen Mens Bruke Tang Å Trekke Unna den Netthinnen Og Knyttet Vev. Deretter Nøye Trim Unna Noen Overflødig Vev Fra den Linsen.

For larval sebrafish linse innhøsting, spiller en larval øye posterior side opp på den flate delen av en silikon parabolen av PBS. Og bruk en skjerpet wolfram nål for å lage radio kutt gjennom netthinnen og sclera mens immobilisere øyet med en annen nål eller tang. Deretter forsiktig scoop linsen fra det dissociated øyet med den stumpe siden av en skreddersydd wolfram wire nål og forsiktig trekke bort den vedlagte vevet.