Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Først skal du placere en bedøvet fisk med den dorsale side vendt op i en forskudt svamp. Før elektroporation injiceres genetisk materiale i målvævet, i dette tilfælde en del af forhjernen kaldet telencephalon. Næste sættes en lille mængde ultralydgel på hovedet. Påfør også gelen på spidsen af elektroderne for at lette effektiv drift. Placer den positive elektrode på hovedets ventrale side og den negative elektrode på dorsalsiden.
Tryk nu elektroderne forsigtigt mod hovedet og administrer flere impulser af elektrisk strøm. Strømmen skaber midlertidige porer i plasmamembranen af elektroporated celler og gør dem gennemtrængelige. Strømmen letter også bevægelsen af negativt ladede partikler, såsom DNA-udtryk plasmider eller RNAi oligonukleotider til stede i de omkringliggende, ind i cellerne. I følgende eksempel vil vi bruge elektroporation til at introducere en rekombinant plasmid i ependymogliale celler, stamceller, der er ansvarlige for generering af nye neuroner.
- Dæk fisken telencephalon med en lille mængde ultralyd gel. For elektroporation af plasmid-injiceret dyr, fjerne svampen fra udslyngning oprettet og nedsænke indersiden af elektrode tips i ultralyd gel. Placer fiskehovedet mellem elektroderne med den positive elektrode på hovedets ventrale side og den negative elektrode på den dorsale side. Derefter, mens du stadig holder fiskens krop i svampen, skal du trykke elektroderne forsigtigt og præcist mod telencephalonen og administrere strømmen med fodpedalen og holde elektroderne på plads, indtil alle fem impulser er færdige.
