Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Encyclopedia of Experiments
Encyclopedia of Experiments: Biology

A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 20 seconds.

I Vivo Elektroporation

 
Click here for the English version

I Vivo Elektroporation: En stedsspecifik metode til at transfekte zebrafisk

Article

Transcript

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the English version.

- Først skal du placere en bedøvet fisk med den dorsale side vendt op i en forskudt svamp. Før elektroporation injiceres genetisk materiale i målvævet, i dette tilfælde en del af forhjernen kaldet telencephalon. Næste sættes en lille mængde ultralydgel hovedet. Påfør også gelen spidsen af elektroderne for at lette effektiv drift. Placer den positive elektrode hovedets ventrale side og den negative elektrode dorsalsiden.

Tryk nu elektroderne forsigtigt mod hovedet og administrer flere impulser af elektrisk strøm. Strømmen skaber midlertidige porer i plasmamembranen af elektroporated celler og gør dem gennemtrængelige. Strømmen letter også bevægelsen af negativt ladede partikler, såsom DNA-udtryk plasmider eller RNAi oligonukleotider til stede i de omkringliggende, ind i cellerne. I følgende eksempel vil vi bruge elektroporation til at introducere en rekombinant plasmid i ependymogliale celler, stamceller, der er ansvarlige for generering af nye neuroner.

- Dæk fisken telencephalon med en lille mængde ultralyd gel. For elektroporation af plasmid-injiceret dyr, fjerne svampen fra udslyngning oprettet og nedsænke indersiden af elektrode tips i ultralyd gel. Placer fiskehovedet mellem elektroderne med den positive elektrodehovedets ventrale side og den negative elektrode den dorsale side. Derefter, mens du stadig holder fiskens krop i svampen, skal du trykke elektroderne forsigtigt og præcist mod telencephalonen og administrere strømmen med fodpedalen og holde elektroderne plads, indtil alle fem impulser er færdige.

Read Article

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter