Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Plaats een geëuthanaseerde vis op een dissectiebed en gebruik een chirurgisch mes om de vis ter hoogte van de kieuwen te onthoofden. Houd het hoofd met de ventrale kant naar boven gericht en verwijder de zachte weefsels totdat u het optische chiasme ziet, een structuur gemaakt van oogzenuwen die de hersenen met de ogen verbindt.
Snijd de oogzenuwen door en verwijder de ogen. Oriënteer nu de vis met de rugzijde naar boven gericht en verwijder de delen van de schedel om de hersenen te isoleren. Breng de hersenen over in een Petrischaal met een dissectiemedium om een constante pH van het weefsel te behouden. Observeer de delen van de hersenen.
De olfactorische bollen zijn een paar structuren aan het voorste uiteinde verbonden met de reukorganen die geursignalen detecteren. Het telencephalon omvat geheugengerelateerde gebieden. De habenula geeft informatie van het telencephalon door aan andere delen van de hersenen.
Het optische tectum is een sensorisch informatieverwerkingscentrum. Het cerebellum speelt een rol in de somatische motorische functie en balans. En de medulla geeft informatie door van het ruggenmerg naar de hersenen. In het volgende protocol isoleren we de hersenen van een volwassen zebravis om neurale stamcellen uit verschillende regio's te verzamelen.
Om te beginnen bereidt u een dissectiebed door een Petrischaaltje te vullen met gelverpakkingen. Bedek het gerecht vervolgens met het bijbehorende deksel en incubeer het op min 20 graden Celsius. Zodra de gel bevroren is, haalt u de schaal uit de vriezer en plaatst u een schoon vierkant filterpapier op het deksel. Ga verder met het inpakken van zowel het papier als de schaal met plastic folie.
Behandel vervolgens alle microdissectie-instrumenten met 70% ethanol. Plaats deze gesteriliseerde gereedschappen naast een ontledingsmicroscoop en plaats het voltooide dissectiebed onder de microscoop met optische vezelverlichting. Plaats onmiddellijk een eerder voorbereid hoofdmonster bovenop het dissectiebed en oriënteer het zodat de dorsale kant naar beneden is gericht.
Gebruik vervolgens een schaar om een longitudinale snede te maken door het zachte weefsel van de achterkant van het hoofd naar de mond. Stel daarna de basis van de schedel bloot met een tang en verwijder al het aangrenzende weefsel. Snijd vervolgens een van de laterale wanden van de schedel vanaf de achterkant van het hoofd en beweeg naar het tectumgebied van de hersenen. Herhaal dit proces voor de contralaterale kant. Ga verder met het snijden van de oogzenuw. En verwijder vervolgens de twee laterale meest zijden van de schedel ter hoogte van het tectum.
Draai ten slotte de hoofdventerale kant naar boven. En met een tang, pel het meest apicale deel van de schedel af om de hersenen bloot te leggen. Breng daarna de hersenen en eventuele resterende delen van de schedel over naar een schaal met dissectiemedium dat bestaat uit DMM F12 aangevuld met penicilline streptomycine. Met de plastic handgreep van een microknife onder de microscoop reinigt u het hersenweefsel en moet u ervoor zorgen dat er geen neurale structuren worden beschadigd.
