Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Legen Sie einen eingeschläferten Fisch auf ein Sezierbett und verwenden Sie eine chirurgische Klinge, um den Fisch auf der Ebene der Kiemen zu enthaupten. Halten Sie den Kopf mit der ventralen Seite nach oben und entfernen Sie die Weichteile, bis Sie die optische Chiasm sehen, eine Struktur aus sehischen Nerven, die das Gehirn mit den Augen verbindet.
Schneiden Sie die Sehnerven und entfernen Sie die Augen. Nun orientieren Sie den Fisch mit der dorsalen Seite nach oben und entfernen Sie die Teile des Schädels, um das Gehirn zu isolieren. Übertragen Sie das Gehirn in eine Petrischale, die ein Seziermedium enthält, um einen konstanten pH-Wert des Gewebes zu erhalten. Beobachten Sie die Teile des Gehirns.
Die Olfaktor-Lampen sind ein Strukturpaar am vorderen Ende, das mit den Geruchsorganen verbunden ist, die Geruchssignale erkennen. Telencephalon umfasst speicherbezogene Bereiche. Die Hatula leitet Informationen aus dem Telencephalon an andere Teile des Gehirns weiter.
Das optische Tectum ist ein sensorisches Informationsverarbeitungszentrum. Das Kleinhirn spielt eine Rolle in der somatischen motorischen Funktion und Balance. Und das Medulla leitet Informationen vom Rückenmark an das Gehirn weiter. Im folgenden Protokoll werden wir das Gehirn von einem erwachsenen Zebrafisch isolieren, um neuronale Stammzellen aus verschiedenen Regionen zu sammeln.
Zu Beginn bereiten Sie ein Sezierbett vor, indem Sie eine Petrischale mit Gelpackungen füllen. Dann bedecken Sie die Schale mit dem entsprechenden Deckel und bebrüten sie bei minus 20 Grad Celsius. Sobald das Gel eingefroren ist, entfernen Sie die Schale aus dem Gefrierschrank und legen Sie ein sauberes Quadrat aus Filterpapier auf den Deckel. Gehen Sie fort, sowohl das Papier als auch die Schale mit Plastikfolie zu wickeln.
Als nächstes behandeln Sie alle Mikro-Sektionsinstrumente mit 70% Ethanol. Legen Sie diese sterilisierten Werkzeuge neben ein Seziermikroskop und positionieren Sie das fertige Sezierbett unter dem Mikroskop mit optischer Faserbeleuchtung. Legen Sie sofort eine zuvor vorbereitete Kopfprobe auf das Sezierbett und richten Sie es so aus, dass seine Rückenseite nach unten gerichtet ist.
Dann verwenden Sie eine Schere, um einen Längsschnitt durch das Weichgewebe von der Rückseite des Kopfes bis zum Mund zu machen. Danach, setzen Sie die Basis des Schädels mit Zange und entfernen Sie das gesamte angrenzende Gewebe. Als nächstes schneiden Sie eine der seitlichen Wände des Schädels beginnend an der Rückseite des Kopfes und bewegen sich in Richtung der tectum Bereich des Gehirns. Wiederholen Sie diesen Prozess für die kontralaterale Seite. Fahren Sie fort, den Sehnerv zu schneiden. Und dann entfernen Sie die beiden seitlichen meisten Seiten des Schädels auf der Ebene des Tectums
Drehen Sie schließlich die Kopfventralseite nach oben. Und mit Zangen, schälen Sie den apikalsten Teil des Schädels, um das Gehirn zu belichten. Danach übertragen Sie das Gehirn und alle verbleibenden Teile des Schädels auf eine Schale mit Seziermedium, das aus DMM F12 besteht, ergänzt mit Penicillin Streptomycin. Mit dem Plastikgriff eines Mikromessers unter dem Mikroskop, reinigen Sie das Gehirngewebe, achten Sie darauf, keine neuronalen Strukturen zu beschädigen. Verwenden Sie bis zu zwei Zebrafische, die ganze Gehirne erzeugen.
