Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Legg en euthanized fisk på en disseksjonsseng og bruk et kirurgisk blad for å halshugge fisken på gillsnivået. Hold hodet med ventralsiden vendt opp og fjern bløtvevet til du ser den optiske chiasmen, en struktur laget av optiske nerver som forbinder hjernen med øynene.
Klipp synsnervene og fjern øynene. Orienter fisken med dorsalsiden vendt opp og fjern delene av skallen for å isolere hjernen. Overfør hjernen til en Petri-tallerken som inneholder et disseksjonsmedium for å opprettholde en konstant pH i vevet. Observer delene av hjernen.
De olfaktoriske pærene er et par strukturer i den fremre enden som er koblet til de olfaktoriske organene som oppdager luktsignaler. Telencephalon inkluderer minnerelaterte områder. Habenula videresender informasjon fra telencephalon til andre deler av hjernen.
Det optiske tectum er et sensorisk informasjonsbehandlingssenter. Cerebellum spiller en rolle i somatisk motorisk funksjon og balanse. Og medulla videresender informasjon fra ryggmargen til hjernen. I følgende protokoll vil vi isolere hjernen fra en voksen sebrafisk for å samle nevrale stamceller fra forskjellige regioner.
Til å begynne med, lag en disseksjonsseng ved å fylle en Petri-tallerken med gelepakker. Dekk deretter parabolen med det tilsvarende lokket og inkuber den ved minus 20 grader Celsius. Når gelen er frosset, fjern parabolen fra fryseren og legg et rent kvadrat av filterpapir på toppen av lokket. Fortsett å pakke både papiret og parabolen med plastfilm.
Deretter behandler du alle mikro disseksjonsinstrumenter med 70% etanol. Plasser disse steriliserte verktøyene ved siden av et dissekeringsmikroskop og plasser den ferdige disseksjonssengen under mikroskopet med optisk fiberbelysning. Plasser straks en tidligere forberedt hodeprøve på toppen av disseksjonssengen og orienter den slik at dorsalsiden vender ned.
Bruk deretter saks for å lage et langsgående kutt gjennom bløtvevet fra baksiden av hodet til munnen. Deretter eksponerer du bunnen av skallen med tang og fjerner alt tilstøtende vev. Deretter kutter du en av sideveggene i skallen som starter på baksiden av hodet og beveger seg mot tectum-regionen i hjernen. Gjenta denne prosessen for den kontralaterale siden. Fortsett å kutte synsnerven. Og fjern deretter de to laterale de fleste sidene av skallen på nivået av tectum
Til slutt snur du hodet ventral side opp. Og med tang, skrell av den mest apikale delen av skallen for å eksponere hjernen. Etterpå, overfør hjernen og eventuelle gjenværende deler av skallen til en tallerken som inneholder disseksjonsmedium som består av DMM F12 supplert med penicillin streptomycin. Med plasthåndtaket til en mikroknife under mikroskopet, rengjør hjernevevet, vær forsiktig så du ikke skader noen nevrale strukturer. Bruk opptil to sebrafiskhjerner for å generere hele hjernen.
