Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Science Education
General Laboratory Techniques

A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 20 seconds.

 
Click here for the English version

הבנת נפחי ריכוז ומדידה

Overview

פתרונות מנוצלים במידה מסוימת כמעט בכל יישומי המחקר הביולוגי. לכן ההבנה כיצד למדוד ולתפעל אותם היא הכרחית לכל ניסוי. בסרטון זה מוצגים מושגים בהכנת פתרונות. הפתרונות מורכבים מ- solute מומס בממס כדי להניב תערובת הומוגנית של חומרים מולקולריים. פתרונות מזוהים בדרך כלל על ידי הרכיבים שלהם וריכוזים מתאימים. פתרונות מרוכזים מדוללים בשיטות שונות, כגון דילול סדרתי. וידאו זה גם מניח בסיס להכנת פתרונות מדויקים. לדוגמה, הווידאו סוקר כיצד למדוד אמצעי אחסון בדיוק באמצעות שימוש במיכל נפח המתאים, כמו גם כיצד לקרוא את הכרך כאשר מניסקוס קיים. לאחר מכן מוצגים יישומים מסוימים למדידת אמצעי אחסון. אלקטרופורזה ג'ל הוא הליך מעבדה נפוץ הדורש הכנת פתרון נפח משקל אחוז, כמו גם דילול מקביל של פתרון מלאי מרוכז. כמו כן, מודגם שימוש בדילול טורי להכנת תקנים ליצירת עקומה סטנדרטית בכמות החלבון.

Procedure

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

הבנת המושגים שמאחורי ריכוז הפתרון ומדידת נפחים במעבדה הם שני היבטים חשובים כמעט בכל ניסוי.

הפתרונות מורכבים ממס מומס בממס כדי להניב תערובת הומוגנית.

פתרונות מזוהים בדרך כלל על ידי הרכיבים שלהם וריכוזים מתאימים.

כדי להגיע כראוי לריכוז הפתרון הנכון, עליך להכיר את הגורמים המכילים השונים הרבים הזמינים למדידות נפח.

טכניקה גרועה בעת מדידת כרכים יכולה להוביל לריכוזים שגויים ולהיות ההבדל בין ניסוי מוצלח או כושל.

בעת ביצוע ניסויים, חובה לדעת את הריכוז המדויק של פתרונות בשימוש.

ריכוז מתבטא בדרך כלל כמו טחינה. תמיסה טחנת אחת מכילה מולה אחת של סולקט לליטר של תמיסה (B +C). בעת ביצוע פתרונות במעבדה, mols של solute ניתן לקבוע מן המסה הנמדדת של המולקולה ואת המשקל המולקולרי שלה.

פתרונות יכולים גם להיות מוכנים וכימות כמו אחוז ריכוזים ממשקל של solute ליחידה נפח של ממס, המכונה פתרון אחוז משקל נפח.

זכור כי solute הוא לפעמים בצורה נוזלית. במקרה זה, ריכוז אחוז יכול לבוא לידי ביטוי כמו נפח של נוזל solute ליחידה נפח של ממס, המכונה פתרון נפח נפח אחוז.

לשימוש תכוף, ניתן להכין פתרונות מרוכזים של תרכובות יציבות, המכונות פתרונות מלאי. פתרונות מלאי עשויים להיות מסומנים כמכפלה של הריכוז בפתרון העבודה הסופי. כאן אתה רואה פתרון פי 10.

פתרונות מלאי אלה ניתן לדלל לפי הצורך עם ממס כדי להשיג את הריכוז הרצוי.

לחלופין, ניתן להכין דילול מפתרון מרוכז יותר באמצעות דילול מקביל. באמצעות חישוב פשוט זה, פתרון של ריכוז הרצוי ואת הנפח הרצוי ניתן להכין מפתרון מלאי של ריכוז ידוע. ניתן לדלל את הנפח המתקבל לנפח הכולל של הפתרון כדי להשיג את הריכוז הרצוי.

עם זאת, במצבים מסוימים, גורם הדילול, השווה לנפח הסופי חלקי נפח פתרון המלאי הדרוש לדילול, גדול מדי. זה עושה דילול מקביל לא מעשי כמו הנפח הדרוש של פתרון המלאי יהיה קטן מדי כדי למדוד במדויק.

עם טכניקת הדילול הסדרתי, פתרון מניות יכול לשמש כדי להפוך פתרון לדלל, אשר לאחר מכן ניתן לדלל עוד יותר כדי להפוך פתרון לדלל יותר וכן הלאה עד הריכוז הרצוי הוא נפגש.

בעת מדידת נפחים במעבדה תיתקל במיכלים רבים שיכולים להחזיק נוזלים. עם זאת, חשוב להבין כי לא כל כלי אלה נועדו למדידת נפח מדויקת.

מיכלים שאינם נפחיים, כגון כוסות ובקבוקי ארלנמייר, מיועדים לערבוב ולאחסון פתרונות ובדרך כלל אינם מכוילים. במקום זאת, המדידות, או טקסי הסיום, בצד מייצגים קירובים של קיבולת נוזלית.

לעומת זאת, מעבדה נפחית נועדה למדוד כמויות מדויקות של חומרים נוזליים. מעבדה נפחית מסומנת עם הקיבולת שהוא מכויל להחזיק, כמו גם את האותיות TC או TD.

TC מייצג "להכיל" והוא נמצא בדרך כלל על צלוחיות נפחי וצילינדרים מדורגים, אשר מכוילים להחזיק נפח מדויק של נוזל.

TD מציין "לספק" ונמצא בדרך כלל במכשירי מדידה המיועדים לחלק נוזלים, כגון פיפטות ומזרקים.

צלוחיות נפחיות משמשות בדרך כלל להכנת פתרונות של ריכוז מסוים. לאחר המסת solute, ממס מתווסף הבקבוקון עד הנפח הכולל מגיע לקו הסיום. הוספת "הכמות מספיקה" כדי להגיע לאמצעי אחסון זה ידועה בשם Q.S.'ing הפתרון.

כאשר Q.S.'ing הפתרון, החלק העליון של עקומות הנוזל שבו הוא פוגש את הבקבוקון. זה נקרא המניסקוס והוא נגרם על ידי מתח פני השטח. בפתרון מימי, המניסקוס קעור, ויש לקרוא אותו בנקודה הנמוכה ביותר של העקומה.

ישנם מספר כלי שיט שנועדו למדוד ולספק כמויות ספציפיות של נוזל. בעת בחירת כלי מעבדה נפחיים, בחר תמיד את ההתקן הקטן ביותר שיתאים לנפח הרצוי כדי להשיג את הדיוק הגבוה ביותר.

בעת מדידת נפחי נוזל מעל 50 מ"ל, צילינדרים מדורגים הם הבחירה המתאימה.

צינורות סרולוגיים משמשים בדרך כלל למדידת ואספקת נפחים בטווח של 0.1 עד 50 מ"ל.

עבור נפחים של 0.2 מיקרוליטרים עד 5 מ"ל, יש להשתמש במיקרופיפטורים.

כאשר טיפים של פיפטה מפלסטיק אינם תואמים לנוזל שיש למדוד, מזרקי המילטון מזכוכית הם חלופה למדידה מדויקת של נפחים בטווח המיקרוליטר.

כעת, לאחר שכיסינו את היסודות של עבודה עם פתרונות, נדון באופן שבו חלק מהמושגים האלה מיושמים במחקר.

אלקטרופורזה של ג'ל DNA היא טכניקה המשמשת להפרדת אוכלוסייה מעורבת של שברי DNA, כדי להעריך את גודלם, על ידי החלת שדה חשמלי כדי להזיז את המולקולות הטעונות שלילית באמצעות מטריצת ג'ל עשויה אגרוז – פחמימה מאצות

בהכנת מטריצת הג'ל, פתרונות משקל/נפח אחוז משמשים בדרך כלל כדי להפוך 1% משקל / נפח agarose ג'לים.

בדרך כלל אלקטרופורזה דורש כמויות גדולות של מאגרי ריצה. בגלל השימוש התכוף שלהם ונפחים גדולים, מאגרים אלה מדוללים בדרך כלל מפתרונות מלאי מרוכזים יותר 10x.

כדי להשיג את מאגר 1x הרצוי, נפח יחידה אחת של פתרון המלאי מדולל בנפחים של 9 יחידות של מים מטוהרים.

בניסויים של קורא מיקרו-לוח, ריכוז הדגימות הלא ידועות של חלבון נקבע לעתים קרובות על סמך קבוצה של דגימות של ריכוזים ידועים הנקראים סטנדרטים.

דילול סדרתי משמש לעתים קרובות כדי ליצור סטנדרטים של ריכוזים גבוהים יותר בהדרגה, כך שבסופו של דבר, ניתן ליצור עקומה סטנדרטית ואת הריכוז של מדגם לא ידוע נקבע.

הרגע צפיתם בהקדמה של JoVE להבנת ריכוז ומדידת כרכים. בסרטון זה סקרנו כמה מושגים בסיסיים כגון חישוב ריכוז, ביצוע דילול , וכיצד סוגים שונים של תוכנות מעבדה משמשים למדידת נפחים. יישומים של כמה מהמושגים שהוצגו בסרטון זה נדונו גם לביולוגיה מולקולרית וביוכימיה.

תודה על הצפייה וזכרו תמיד להשתמש בדיוק ודיוק בעת מדידת נפחים.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

לא הוכרזו ניגודי אינטרסים.

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter