Uzun vadeli potansiyelize bir çok Kararlı ve tekrarlanabilir Kayıt için geliştirilmiş Hazırlık ve Hipokampal Fare Dilimleri korunması

Bu prosedürün genel amacı, akut hipokampal dilimlerde çok stabil ve tekrarlanabilir uzun süreli potansiyasyonu kaydedebilmektir. Bu, önce fare beyninin çıkarılması ve hipokampusun mikroskop altında soğuk A BOS'ta diseke edilmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adım, enine hipokampal dilimleri bir doku kıyıcı ile kesmektir.

Daha sonra dilim, oksijenli yapay beyin omurilik sıvısı ile perfüze edilecek olan arayüz kayıt odasına yerleştirilir. Son adım, elektrotları yerleştirmek ve sinaptik aktiviteyi hipokampusun CA bir bölgesindeki kaydetmektir. Sonuç olarak, çok kararlı bir uzun vadeli potansiyasyonun indüksiyonunu göstermek için bir yüksek frekanslı stimülasyon protokolü kullanılır.

Bu yöntem sayesinde sinaptik plastisitenin altında yatan mekanizma hakkında fikir verebilir. Nörodejeneratif veya sinir sisteminin hayvan modelleri gibi diğer sistemlere veya bağışıklık hastalığına da uygulanabilir. Genel olarak, bu yönteme yeni olan kişiler mücadele edecektir çünkü tüm manipülasyonlar büyük beceri ve çok fazla pratik gerektirir.

Bu prosedüre, perfüzyon devresini distile su ile en az 20 dakika durulayarak başlayın. Ardından ısıtma sistemlerini açın. Devrede karbojen köpürmesini başlatın.

Karbojen, hava difüzörleri aracılığıyla kayıt odasının altındaki su banyosuna iletilir. Ardından, su banyosundaki akış hızını bir akış ölçer ile kontrol edin Daha sonra, devreyi boşaltın ve kabarcıkları çıkarmak için filtrelenmiş A BOS musluğu ile doldurun. Ardından, dilimi destekleyecek olan halkayı tutma odasına yerleştirin.

Devredeki tüm hava kabarcıklarını dikkatlice çıkarın. Daha sonra emme iğnesinin vidası ile kayıt odasındaki A BOS seviyesini ayarlayın, giriş pompasının hızı dakikada bir mililitreye ayarlanır ve çıkış pompası dakikada beş mililitreye ayarlanır. Diseksiyondan önce tüm cerrahi aletleri hazırlayın.

Kurban edilen bir farenin beynini çıkarmak için. İşaret parmağınız ve baş parmağınızla başını tutun ve giyotinin kenarından başlayarak başın üst kısmının ortası boyunca diseksiyon makası ile bir kesi yapın, kesin ve ön kemiğe kadar ilerletin. Ardından, kafatası plakalarını tamamen ortaya çıkarmak için başın her iki yanındaki kutanöz kası kesin.

Ardından başın kucak tarafındaki kasları çıkarın. Daha sonra, temporalis kasını temporalis plakası boyunca her iki tarafta kesin. Ardından ön plakaları ortadan enlemesine kesin.

Şimdi iki plaka arasındaki oksipital kemik üzerinde küçük bir kesim yapın. Her iki taraftaki oksipital plakaların coddle tabanında kesin. Daha sonra yaylı makasla sagital sütür boyunca kesin.

Son olarak, yarımları forseps ile birbirinden uzağa yayarak kafatasını çıkarın. Şimdi neşter beyincikten hemen önce ve koku ampulünden hemen sonra kesildiğinde, enine çıkarılan beyni soğuk A BOS ile diseksiyon kabına aktarın. Beyin diseksiyon kabında ortaya çıktıktan sonra, bir binoküler cerrahi mikroskop altında ortasına yerleştirilmiş bir neşter ile iki yarım küreyi birbirinden ayırın, lateral ventrikülü ortaya çıkarmak için bir yarım kürenin yapısını dikkatlice yayın.

Bir spatulayı frontal kortekse ve diğer spatulayı sefalonun üzerine koyarak beyin sapını ve sefalonu çıkarın. Doku kesiti sırasında hipokampusa spatula ile dokunmamaya ve germemeye dikkat edin. Bundan sonra, forniksi kesin.

Daha sonra ventriküle bir spatula sokarak hipokampusu korteksten yavaşça dışarı itin. Hipokampus çıkarıldığında, fazla kortikal dokuyu ve kalan kan damarlarını geniş ağızlı plastik bir mera pipeti ile çıkarın. Hipokampusu, alvi yüzeyi yukarı bakacak şekilde bir kaşık içinde doğrayıcının platformuna aktarın.

Standart bir plastik mera pipeti ile kaşıktaki fazla sıvıyı alın. Bundan sonra, kaşığı dikey olarak yukarı kaldırın ve doğrayıcının üzerindeki filtre kağıdına neredeyse dokunun. Filtre kağıdına hızlıca dokunarak hipokampusu bırakın.

Sonra kaşığı geri çekin. Sonra, hipokampusu yönlendirin ve dilimleyin. Doğrayıcı ile enlemesine 400 mikrona.

Prosedürü mümkün olduğunca çabuk gerçekleştirin. Daha sonra, hipokampal dilimlerle birlikte filtre kağıdını çıkarın ve dilimleri biraz yaymak için metalik silindirin etrafına sarın. Daha sonra dilimleri standart bir plastik pastoral pipet kullanarak A CSF spreyleri ile serbest bırakın ve bunları soğukla doldurulmuş bir Petri kabında toplayın.

Bir CSF. Seçilen dilimi standart bir plastik geçmiş pipet ile kayıt odasına aktarın. Dilimin, 28 santigrat derecede kayıt arayüz odasındaki diseksiyon travmasından kurtulmasına izin verin.

Dilim batarsa, A CSF seviyesini dilim seviyesine düşürün, ardından dilimin yüzmesini sağlamak için A CSF seviyesini tekrar yükseltin. Bundan sonra, dilimi CA bir bölgesinde elektrotların konumlandırılmasını kolaylaştıracak konuma yönlendirin. Arayüzdeyken A CSF seviyesini düşürmeyi bırakın.

Dilimin etrafındaki medianın menisküsü, yeterli düzeyde A BOS'un göstergesidir. Ağ, ortamla doyurulmalı, ancak tamamen suya batırılmamalıdır. Ardından hazneyi delikli kapağın üzerinde filtre kağıtları ile kapalı tutun.

Kaydetmeden önce dilimi 28 santigrat derecede en az bir saat 30 dakika dinlendirin. İşte aynı nöronal popülasyona bir ve S iki olmak üzere iki bağımsız sinaptik girdiyi gösteren bir çizim. LTP'yi indüklemek için S bir yol kullanılırken, S iki yolu kontrol görevi gördü.

Bunlar, kırmızı izlerle gösterildiği gibi LTP indüksiyonundan hemen önce ve mavi izlerle gösterilen LDP indüksiyonundan bir saat sonra kaydedilen numune F-E-P-S-P izleridir. İşte mükemmel derecede sağlıklı bir dilimden elde edilen F EPSP'ler ve burada dilimler tamamen sağlıklı olmadığında yüksek düzeyde uyarılabilirlik sunan bir dilimden elde edilen F EPSP'ler. Polis sinaptik tepkileri gözlenir ve F-E-P-S-P eğim potansiyonu azalır.

Laboratuvarımızda 2005, 2010 ve 2011 yıllarında kaydedilen tek bir yüksek frekanslı stimülasyon dizisinin neden olduğu LTP'den sonra F-E-P-S-P eğiminin zaman rotalarının bir karşılaştırması. İlk deneyler 2005 yılında kaydedilmiş ve dolu dairelerle gösterilmiştir. Doldurulmuş karelerle gösterilen sonraki kayıtlar, gelişmiş bir diseksiyon prosedüründen yararlandı.

Mevcut sonuçlar, açık dairelerle gösterildiği gibi elektrot standardizasyonunun yanı sıra arayüz oksijenasyonu ve sıcaklık kontrolünün optimizasyonundan kaynaklanmaktadır. Burada, kayıt odasının altındaki su banyosundaki oksijen akış hızının, mavi eğri ile gösterildiği gibi dakikada 0,15 litreden 0,25 litreye çıkarılmasının, F-E-P-S-P eğiminde %20'lik bir azalmaya neden olduğunu ve sıcaklığın 28 dereceden 29 santigrat dereceye çıkarıldığını gösteriyoruz. Belirtildiği gibi, yeşil eğri F-E-P-S-P eğiminde %50'den fazla bir artışa neden olur.

Bu prosedürü denerken, her adımın çok önemli olduğunu ve protokoldeki hataların farklı sonuçlara yol açabileceğini unutmamak önemlidir. Bu videoyu izledikten sonra, çok kararlı uzun vadeli güçlendirmenin nasıl elde edileceğini iyi anlayacaksınız. Akut hipokampal dilimlerde kayıt.