Name: Kemirgenler gelen akut Hipokampal Dilimleri kullanarak Synaptic Etiketleme / yakalama ve Çapraz yakalama İncelenmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-09-04T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 29 s
Description: Öğrenin kemirgenlerden elde edilen akut hipokampal dilimleri kullanarak CA1 piramidal nöronlarında sinaptik etiketleme, yakalama ve çapraz yakalama mekanizmalarını incelemeyi. Bu yöntem uzun süreli plastisite ve bellek oluşumu süreçlerini araştırmada değerlidir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu video makalesi Cerebos Pacific Limited tarafından desteklenmektedir. Bu çalışma, Ulusal Tıbbi Araştırma Konseyi İşbirlikçi Araştırma Hibesi (NMRC-CBRG-0041/2013) ve Milli Eğitim Bakanlığı Akademik Araştırma Fonu (MOE AcRF- Tier 1 - T1-2012 Ekim -02) tarafından desteklenmektedir.

Bütün hayvan prosedürleri Singapur Ulusal Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır. Yapay Beyin Omurilik Sıvısı 1. Hazırlama (ACSF) <ol><li> , 124 NaCl, 3.7 KCl (mM olarak) MgSO 4 .7H 2 O 1,0, 2,5 CaCl2 .2H 2 O&#39;dan oluşan ACSF, 1,2 KH 2 PO 4, 24.6 NaHCO 3 ve 10 D-glikoz hazırlayın. Elektrofizyolojik kayıtlar sırasında% 95 O 2 ve% 5 CO 2 karışımı (karbojen). Her iki diseksiyonu, dilim hazırlanması için 21 kullanın, bu ACSF ve perfüzyon ile doygunluk kabarmış zaman ACSF pH 7.2-7.4 arasında olduğundan emin olun. NOT: ölçme ve ACSF tutmak için temiz cihazı kullanın. Kirli cihaz kullanılarak parçalı çözeltiler ya da çökeltiler oluşumuna neden olabilir. Tüm hazırlıkları için deiyonize su kullanın. </li><li> NaHCO 3 hariç 2 L 10x ACSF stok hazırlayın </sub&gt; ve volümetrik bir şişede, D-Glukoz. Aşağıdaki sırayla deiyonize suya reaktif ekleyin: NaCl (144.96g), KCl (5.52g), MgSO 4 .7H 2 0 (4.92g), CaCl2 .2H 2 0 (7.56 g), KH 2 PO 4 (3.28 2 L&#39;lik bir hacme kadar g) ve üst kadar olan tüm reaktifler çözündürülür sağlamak için, bir manyetik karıştırıcı kullanılarak, en az 30 dakika süreyle sürekli olarak karıştırılır. 4 o C stok saklayın ve 2 hafta içinde kullanın. </li><li> Diseksiyon ve deneyleri öncesinde NaHCO 3 ve D-glikozun gerekli miktarlarının ilave edilmesi ile birlikte, bir hacimli şişe içinde ACSF stokları seyreltin. 1 L çözelti için 2.07 g NaHCO 3 ve 1,802 g D-glikoz eklemeden sonra, 1 L stoklar 100 ml seyreltilir. ACSF bir çökelti ve çözünmemiş partiküllerin serbest berrak bir çözelti olması gerekir. </li><li> Serin yaklaşık 200-300 ml buz üzerinde ACSF, diseksiyon sırasında kullanılacak. Diseksiyon için kullanılan ACSF 2-4 ° C arasında olduğundan emin olun. Electrop kalan ACSF kullanınhysiological deneyler. Kabarcık tüm solüsyonlar sürekli olarak ACSF karbojen (% 5 CO2,% 95 O 2) doyurma. ACSF soğumasını beklerken, diseksiyon alanı ve dilim odasını hazırlar. </li></ol> Arayüz Odası 2. Hazırlık NOT: Bir arabirim beyin dilim odası, (Şekil 2B) dilimleri kuluçkaya ve elektrofizyolojik kayıtlar sırasında onları korumak için kullanılan, iki bölmeden oluşmaktadır. Alt bölme, bir sıcaklık kontrol cihazı tarafından 32 ° C &#39;de muhafaza damıtılmış su sürekli karbojen kabarcıkları içerir. <ol><li> Sıcaklık kontrolörü açın ve 32 ° C&#39;de bunu önceden. Akış boru boyunca damıtık su geçirilerek 10 ila 15 dakika için, üst bölme yıkayın. Üst kamara net yerleştirmeden önce temiz olduğundan emin olun. Alt bölmesi içindeki su seviyesi, distile su ile doldurulmuş 70% olduğu edin. </li><li> YeriÜst bölme net dilimleri için bir dinlenme yüzeyi (Şekil 2C) elde edildi. Çözelti düzeyi yeterince net tüm alanı ıslatma emin olmak için çıkış hortumunu ayarlayın. Üst bölme içinde nemlendirilmiş karbojen atmosferini korumak için filenin üzerinde kapağı yerleştirin. </li><li> 1 ml / dakika akış hızı ayarlanır. Dilim kuluçka dönemi ve deney boyunca bu akış hızını sürdürmek. Taze hazırlanmış 1x ACSF carbogenating başlayın ve ACSF içine giriş hortumunu batırmayın. ACSF bununla doldurulması için karbojen ve üst bölmesi için doymuş için 20 dakika bekleyin. </li></ol> Akut Hipokampal Dilimleri 3. Hazırlık NOT: Diseksiyon protokolü soğuk ACSF ve (2) İzolasyon ve hipokampus dilimleme içine hayvana beyin (1) Temizleme oluşur. Nöronlar, canlı kalır izole etmek ve hızlı bir şekilde soğuk ACSF beyin koyun ve bütün tamamlamak için sırayla3-5 dakika içinde dilimleme dahil süreci. <ol><li> Soğuk ACSF içine beynin çıkarılması <ol><li> Şekil 1A gösterilen şekilde diseksiyon araçlarını yatıyordu. Diseksiyon sürecini kolaylaştırmak için kullanım sırasına göre araçları düzenleyin. Başlamadan önce, tüm diseksiyon araçları hazır olun. </li><li> , Etil asetat, etanol ve distile mutlak su ile temizlenmelidir bir jileti, monte manuel doku kıyıcı (Şekil 1B) üzerine, sıkıca sabitlemek ve kesme kenarı eşit hizada olduğundan emin olun. Filtre bir parça kağıt doğrama test bıçağı sıkıca güvenli olduğundan emin olmak için. Başlangıç ​​pozisyonuna kayar Vernier mikrometre ayarlayın. </li><li> Indüksiyon odasında hayvan kullanılarak karbondioksit (CO 2) Euthanize ve bandaj makas veya Giyotin ile başını kesmek. Bir İris makas kullanarak, kafatası üzerinde cilt ve kürk çıkarın. Brainstem.Make th boyunca küçük bir kesi kaldırmak için arka aracılığıyla bir kesim yapmakKafatasının sağ tarafını ve sol tarafta daha uzun bir kesi e. DİKKAT! Hasar görmesini önlemek için deneyler için kullanılan yanına sadece küçük bir kesi yapmak. Makas takarken, uygulanan kuvvet beyne zarar görmesini önlemek için yukarı doğru olduğundan emin olun. </li><li> Dikkatle korteksi ortaya çıkarmak için kafatasının sağ tarafına soldan başlayarak rongeur bir kemik kafatası çıkarın. Dura ince bir tabaka, aynı zamanda görülebilir. Dikkatle rongeur ile frontal plakaları çıkarın. Frontal plakalar ile birlikte dura en çıkartın. DİKKAT! Dura beyin dokusu aracılığıyla dilim olmadığı dikkatli olun. </li><li> Özellikle bir spatula düz ucuyla korteks ve serebellumda arasındaki eklem, eğer varsa kalan dura çıkarın. Adımlar 3.1.5 ve 3.1.6 için bu zarar vermemek için beyin uzak, yukarı doğru, yani basıncı korumak. Spatula kullanarak, yavaşça soğuk carbogenated ACSF (2-4 ° C) ile doldurulmuş bir petri çanağı, pla halinde beyin kepçebir alüminyum soğutma bloğuna CED. </li></ol></li><li> Hipokampüsün izolasyonu <ol><li> Bir neşter kullanılarak, düz bir kesim beyin (yaklaşık dörtte biri) ön kısmını kaldırmak için serebellum ve başka kesim kaldırmak için yapmak. Orta hat boyunca sığ bir kesim olun. </li><li> Dikkatle dorsal hipokampus ortaya çıkarmak için orta hat başlayarak, bir orak Ölçekleyicili korteks kaldırmak. Hipokamp Yukarıdaki korteksin tabakayı çıkarın. Beyin desteklemek için parmaklarınızı veya açılı forseps kullanın. Hipokampal komissür küçük bir kesim olun. Yavaşça haddeleme hareketlerini kullanarak dorsal hipokampusun itibaren orak Ölçekleyicili hipokampus çıkarın. DİKKAT! Germe ve hipokampus yırtılmasını önlemek için nazik olun. </li><li> Orak Ölçekleyicili izole hipokampus etrafında herhangi bir korteks ve bağ dokuları çıkarın. </li></ol></li><li> Hipokampal doku dilimleme ve arayüz odasının üzerine dilim aktarılması <ol><li> ACSF- bir parça koyunmanuel dilimleme makinesi dilimleme aşamasında ıslatılmış filtre kağıdı (Grade 1, 30 mm). Kepçe ve filtre kağıdı üzerine hipokampal doku yerleştirin. Hipokamp yaklaşık 70 o fimbriya arasında bir açıyla kesilmiştir, böylece kesici bıçak ile ilgili olarak uygun bir oryantasyonda hipokampus hizalamak için filtre kağıdı getirin. </li><li> Katlanmış filtre kağıdı ile hipokampal doku (Grade 1, 85 mm) hafif ıslak hipokampus bırakarak çevreleyen aşırı çözüm kurulayın. Enine hipokampus dilimleme başlayın. Dilim morfolojisi net olmadığı durumlarda Dilim hipokampus aşırı ucundan doku atmak ve. </li><li> 400 mikron kalınlığında dilimler halinde kalan doku dilimleyin. Nazik swiping hareketlerini kullanarak yumuşak kıllı bir fırça ile bıçak hafifçe hipokampal dilim Pick up ve soğuk carbogenated ACSF dolu küçük bir behere dilimleri yerleştirin. Adımları gerçekleştirin 3.3.1-3.3.3 mümkün olduğunca çabuk hipokampal doku havaya maruz beri. NOT: Genellikle hipokampus üçte ikisinin dilimlenmiş ve net morfolojisi ile 4-6 dilim hazırlanabilir. </li><li> Yavaşça (ucu 2-3 cm uzağa keserek yapılan) geniş uçlu temiz bir plastik Pasteur pipeti kullanarak dilim odasında net üzerine dilimleri aktarın. Dikkatle bükülmüş ucu ile küçük bir şırınga kullanarak net dilim konumunu ayarlamak. Elektrot konumu ve kayıt kolaylaştıran bir şekilde dilimleri yerleştirin. Dilim yeterince ACSF çevrili ama batık ya da (Şekil 2C-D) yüzer olmadığını kontrol ediniz. Odasına örtün ve 2-3 saat süreyle dilimleri kuluçkaya yatmaktadır. NOT: Sağlıklı dilimler halinde piramidal hücre tabakası, bazı şeffaflık göstermesi gerekir. </li></ol></li></ol> CA3-CA1 Synaptic Cevaplarının 4. Kayıt NOT: Alan potansiyel kayıt için kullanılan elektrofizyoloji set-up Şekil 2A gösterilmiştir. Bir Faraelektriksel girişim elektrik ayarları düzgün topraklama sonra kontrolü dışında ise günlük kafes şiddetle tavsiye edilir. Daldırılmış ve arayüz odaları çok farklı tipte ticari olarak temin edilebilir. Ancak, arabirim odaları onları dilim sergi daha sağlam sinaptik yanıtları olarak tercih edilmektedir. <ol><li> Elektrotların Konumlandırma <ol><li> Elektrikli cihazlar açın (uyarıcıları ve amplifikatörler) kullanılacak. Dağı ve mikromanipülatörler pleksiglas tutuculara uyarıcı ve kayıt elektrotları sabitleyin. NOT: monopolar, hem uyarıcı ve kayıt amaçlı 5 M? Direnci lake kaplı paslanmaz çelik elektrotlar kullanın. </li><li> Kullanmadan önce, çekti cam kılcal damarların içinde bu elektrotlar eklemek ve epoksi tutkal elektrot ucu (Şekil 2E) yalnızca küçük bir kısmını açığa sabitleyin. Bu başka türlü ince elektrotlar kuvvet verir ve Elektronik endüstri sıkıca onları korumak için yardımcı olurctrode sahipleri. </li><li> Mikroskop altında Güdümlü, alan EPSP (fEPSP) yanıtları kaydetmek için CA1 apikal dendritik bölgesinde Schaffer teminat lifleri ve kayıt elektrot uyarmak için CA1 bölgenin stratum radiatum uyarıcı elektrot (lar) yerleştirin. NOT: elektrotlar ile dilim üzerinde sıvı yüzey yaklaşırken hızla dilim (sağlanan amplifikatör bir hoparlöre bağlanır) yüzeyini bulmak için yardımcı olan bir ses verir. </li><li> Sinaptik etiketleme ve yakalama deneylerinde, deney ihtiyaca göre, kayıt elektrot her iki tarafında pozisyonu, iki veya üç uyarıcı elektrotlar (S1, S2 veya S3), iki ya da daha çok bağımsız, fakat üst üste giriş uyarmak için. Ayrı 200 mikron ilgili uyarıcı ve kayıt elektrotları yerleştirin. </li><li> Gerekirse, popülasyon artışı (Şekil 3A) kayıt için startum pyramidale tabakasında bir kayıt elektrot bulmak tutulduktan ikielektrotlar elde etme yazılımı kullanarak, dilim dokundu, düzgün bir fEPSP sinyalini sağlamak için bir test uyarımı verin. NOT: Test uyarılması için bifazik, sabit akım darbelerini (darbe süresi 0,1 ms / yarım dalga) kullanın. </li><li> Uygun bir fEPSP sinyali elde edildikten sonra, dikkatlice derin manipülatör şık hareketlerden düğmeleri kullanarak 200 mikron hakkında elektrotlar indirin. Dilim kurtarmak için 20 dakika bekleyin. Eşleştirilmiş darbe kolaylaştırma protokolü 27,28 ile yolu bağımsızlığını sınayın. </li></ol></li><li> Girdi-çıktı ilişkisi <ol><li> Geçerli şiddetlerinin aralığında eğim değerini ölçerek her giriş için giriş-çıkış ilişkisini (fEPSP yamaç vs afferent stimülasyon) belirleyin. 100 uA 20 uA arasındaki bu gerçekleştirin. Sonra maksimum fEPSP yamaç% 40 elde etmek için her giriş için stimülasyon yoğunluğu ayarlayın. Deney boyunca bu sabit tutun. </li><li> 15-20 dakika sonra, taban çizgisini kaydetmeye başlamak. F MonitörEPSP bu dönemde yakından eğim ve eğim ayar değerinden% 10&#39;dan fazla dalgalanma olursa uyaran yoğunluğunu sıfırlamak ve yeni bir temel başlatın. Devam etmeden önce Tutanak, en az 30 dakika ya da 1 saat stabil bazal. NOT: Eğer test ya da bazal stimülasyon için, her 5 dakikada bir verilen 0.2 Hz bifazik, sabit akım darbelerinin dört temizleyicileri (kutupluluk başına 0,1 msn) kullanın. Bu dört yanıtın bir ortalama eğim sonra bir tekrar olarak kabul edilir. Sinyallerini bir analog-dijital dönüştürücü kullanarak dijitalize ve ısmarlama yazılım ile online olarak izlenmektedir bir diferansiyel amplifikatör tarafından filtre edilmiş ve amplifiye edilir. </li></ol></li><li> LTP / LTD İndüksiyon uyarılması protokollerini kullanarak NOT: LTP ve LTD Hem erken sınıflandırılmış edilmiş ve protein sentezi gereklerine dayalı geç LTP / LTD; onun geç bakım için ikincisi gerektiren çeviri ve / veya transkripsiyon [incelenmek üzere 4 görmek]. Elektriksel stimülasyon paradigmalar çeşitli specificall edebilirsinizy LTP ve LTD farklı şekillerde neden. <ol><li> WTET: 100 Hz, 21 bifazik sabit akım darbeleri (faz başına 0.2 milisaniye). </li><li> STET: bir saniyede (100 Hz) her 10 dakikada (faz başına genişliği 0.2 msn&#39;den Darbe) 100 darbeleri Üç patlamaları. </li><li> 15 dk süresi boyunca 900 patlamaları. 1 çoğuşma 50 ms (20 Hz) bir ara dalga zaman aralığı ile 3 darbe (0,2 msn genişlik) oluşur. Arası patlama aralığı 1 sn (bakliyat 2700 sayısı) &#39;dir. </li></ol></li></ol> Dilim Odası ve Perfüzyon Sistemi 5. Temizlik <ol><li> Kayıt bittikten sonra, daha ileri biyokimyasal analiz için hipokampal dilim toplamak veya başka uygun atın. Karbojen arz ve sıcaklık kontrolörü kapatın. Damıtılmış su içinde karbojen bubbler yıkayın. </li><li> Bir fırça ve distile su ile iyice net temizleyin. Daha yüksek bir akış oranında damıtılmış su ile 15-20 dakika boyunca teçhizat yıkayın. 3-4 günde bir, damıtılmış su değiştirmekAlt bölmenin bölmesi ve% 3 hidrojen peroksit çözeltisi ile oda düzenli da temiz mantar gelişimini önlemek için. </li></ol>

<ol><li>Bliss, T. V. P., Collingridge, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+synaptic+model+of+memory%3A+long-term+potentiation+in+the+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A synaptic model of memory: long-term potentiation in the hippocampus.</a> Nature. 361, 31-39 (1993).</li>
<li>Siegelbaum, S. A., Kandel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Learning-related+synaptic+plasticity%3A+LTP+and+LTD.%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Learning-related synaptic plasticity: LTP and LTD.</a> Current Opinion in Neurobiology. 1, 113-120 (1991).</li>
<li>Martin, S. J., Grimwood, P. D., Morris, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+plasticity+and+memory%3A+an+evaluation+of+the+hypothesis%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+review+of+neuroscience%22%5BJournal%5D)">Synaptic plasticity and memory: an evaluation of the hypothesis.</a> Annual review of neuroscience. 23, 649-711 (2000).</li>
<li>Malenka, R. C., Bear, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LTP+and+LTD%3A+An+Embarrassment+of+Riches%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">LTP and LTD: An Embarrassment of Riches.</a> Neuron. 44, 5-21 (2004).</li>
<li>Krug, M., Lossner, B., Ott, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anisomycin+blocks+the+late+phase+of+long-term+potentiation+in+the+dentate+gyrus+of+freely+moving+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+research+bulletin%22%5BJournal%5D)">Anisomycin blocks the late phase of long-term potentiation in the dentate gyrus of freely moving rats.</a> Brain research bulletin. 13, 39-42 (1984).</li>
<li>Frey, U., Krug, M., Reymann, K. G., Matthies, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anisomycin+blocks+an+inhibitor+of+protein+synthesis%2C+blocks+late+phases+of+LTP+phenomena+in+the+hippocampal+CA1+region+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+research%22%5BJournal%5D)">Anisomycin blocks an inhibitor of protein synthesis, blocks late phases of LTP phenomena in the hippocampal CA1 region in vitro.</a> Brain research. 452, 57-65 (1988).</li>
<li>Otani, S., Marshall, C. J., Tate, W. P., Goddard, G. V., Abraham, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maintenance+of+long-term+potentiation+in+rat+dentate+gyrus+requires+protein+synthesis+but+not+messenger+RNA+synthesis+immediately+post-tetanization%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Maintenance of long-term potentiation in rat dentate gyrus requires protein synthesis but not messenger RNA synthesis immediately post-tetanization.</a> Neuroscience. 28, 519-526 (1989).</li>
<li>Frey, U., Frey, S., Schollmeier, F., Krug, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+actinomycin+D%2C+a+RNA+synthesis+inhibitor%2C+on+long-term+potentiation+in+rat+hippocampal+neurons+in+vivo+and+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+physiology%22%5BJournal%5D)">Influence of actinomycin D, a RNA synthesis inhibitor, on long-term potentiation in rat hippocampal neurons in vivo and in vitro.</a> The Journal of physiology. 490 (3), 703-711 (1996).</li>
<li>Nguyen, P. V., Kandel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+macromolecular+synthesis-dependent+late+phase+of+long-term+potentiation+requiring+cAMP+in+the+medial+perforant+pathway+of+rat+hippocampal+slices%29%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">A macromolecular synthesis-dependent late phase of long-term potentiation requiring cAMP in the medial perforant pathway of rat hippocampal slices).</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 16, 3189-3198 (1996).</li>
<li>Manahan-Vaughan, D., Kulla, A., Frey, J. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Requirement+of+translation+but+not+transcription+for+the+maintenance+of+long-term+depression+in+the+CA1+region+of+freely+moving+rats%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Requirement of translation but not transcription for the maintenance of long-term depression in the CA1 region of freely moving rats.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 20, 8572-8576 (2000).</li>
<li>Frey, U., Morris, R. G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+tagging+and+long-term+potentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Synaptic tagging and long-term potentiation.</a> Nature. 385, 533-536 (1997).</li>
<li>Frey, U., Morris, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Weak+before+strong%3A+dissociating+synaptic+tagging+and+plasticity-factor+accounts+of+late-LTP%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">Weak before strong: dissociating synaptic tagging and plasticity-factor accounts of late-LTP.</a> Neuropharmacology. 37, 545-552 (1998).</li>
<li>Redondo, R. L., Morris, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Making+memories+last%3A+the+synaptic+tagging+and+capture+hypothesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Making memories last: the synaptic tagging and capture hypothesis.</a> Nature reviews. Neuroscience. 12, 17-30 (2011).</li>
<li>Martin, K. C., Kosik, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+tagging+--+who%27s+it%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Synaptic tagging -- who's it?</a> Nature reviews. Neuroscience. 3, 813-820 (2002).</li>
<li>Frey, U., Morris, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+tagging%3A+implications+for+late+maintenance+of+hippocampal+long-term+potentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+neurosciences%22%5BJournal%5D)">Synaptic tagging: implications for late maintenance of hippocampal long-term potentiation.</a> Trends in neurosciences. 21, 181-188 (1998).</li>
<li>Martin, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+tagging+during+synapse-specific+long-term+facilitation+of+Aplysia+sensory-motor+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+learning+and+memory%22%5BJournal%5D)">Synaptic tagging during synapse-specific long-term facilitation of Aplysia sensory-motor neurons.</a> Neurobiology of learning and memory. 78, 489-497 (2002).</li>
<li>Shires, K. L., Da Silva, B. M., Hawthorne, J. P., Morris, R. G., Martin, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+tagging+and+capture+in+the+living+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+communications%22%5BJournal%5D)">Synaptic tagging and capture in the living rat.</a> Nature communications. 3, (2012).</li>
<li>Ramachandran, B., Frey, J. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interfering+with+the+actin+network+and+its+effect+on+long-term+potentiation+and+synaptic+tagging+in+hippocampal+CA1+neurons+in+slices+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Interfering with the actin network and its effect on long-term potentiation and synaptic tagging in hippocampal CA1 neurons in slices in vitro.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 29, 12167-12173 (2009).</li>
<li>Sajikumar, S., Navakkode, S., Frey, J. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+compartment-+and+process-specific+molecules+required+for+%27synaptic+tagging%27+during+long-term+potentiation+and+long-term+depression+in+hippocampal+CA1%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Identification of compartment- and process-specific molecules required for 'synaptic tagging' during long-term potentiation and long-term depression in hippocampal CA1.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 27, 5068-5080 (2007).</li>
<li>Sajikumar, S., Navakkode, S., Sacktor, T. C., Frey, J. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+tagging+and+cross-tagging%3A+the+role+of+protein+kinase+Mzeta+in+maintaining+long-term+potentiation+but+not+long-term+depression%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Synaptic tagging and cross-tagging: the role of protein kinase Mzeta in maintaining long-term potentiation but not long-term depression.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 25, 5750-5756 (2005).</li>
<li>Redondo, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+Tagging+and+Capture%3A+Differential+Role+of+Distinct+Calcium%2FCalmodulin+Kinases+in+Protein+Synthesis-Dependent+Long-Term+Potentiation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Synaptic Tagging and Capture: Differential Role of Distinct Calcium/Calmodulin Kinases in Protein Synthesis-Dependent Long-Term Potentiation.</a> The Journal of Neuroscience. 30, 4981-4989 (2010).</li>
<li>Sajikumar, S., Frey, J. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Late-associativity%2C+synaptic+tagging%2C+and+the+role+of+dopamine+during+LTP+and+LTD%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+learning+and+memory%22%5BJournal%5D)">Late-associativity, synaptic tagging, and the role of dopamine during LTP and LTD.</a> Neurobiology of learning and memory. 82, 12-25 (2004).</li>
<li>Sajikumar, S., Navakkode, S., Frey, J. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+synthesis-dependent+long-term+functional+plasticity%3A+methods+and+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Protein synthesis-dependent long-term functional plasticity: methods and techniques.</a> Current Opinion in Neurobiology. 15, 607-613 (2005).</li>
<li>Villers, A., Ris, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+preparation+and+preservation+of+hippocampal+mouse+slices+for+a+very+stable+and+reproducible+recording+of+long-term+potentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Improved preparation and preservation of hippocampal mouse slices for a very stable and reproducible recording of long-term potentiation.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , (2013).</li>
<li>Pohle, W., Reymann, K., Jork, R., Malisch, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+experimental+conditions+on+the+morphological+preservation+of+hippocampal+slices+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedica+biochimica+acta%22%5BJournal%5D)">The influence of experimental conditions on the morphological preservation of hippocampal slices in vitro.</a> Biomedica biochimica acta. 45, 1145-1152 (1985).</li>
<li>Reymann, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+duration+of+long-term+potentiation+in+the+CA1+region+of+the+hippocampal+slice+preparation%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+research+bulletin%22%5BJournal%5D)">The duration of long-term potentiation in the CA1 region of the hippocampal slice preparation.</a> Brain research bulletin. 15, 249-255 (1985).</li>
<li>Sajikumar, S., Korte, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Different+compartments+of+apical+CA1+dendrites+have+different+plasticity+thresholds+for+expressing+synaptic+tagging+and+capture%5BTitle%5D)+AND+%22Learning+%26+Memory%22%5BJournal%5D)">Different compartments of apical CA1 dendrites have different plasticity thresholds for expressing synaptic tagging and capture.</a> Learning & Memory. 18, 327-331 (2011).</li>
<li>Li, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Making+Synapses+Strong%3A+Metaplasticity+Prolongs+Associativity+of+Long-Term+Memory+by+Switching+Synaptic+Tag+Mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Cerebral+Cortex%22%5BJournal%5D)">Making Synapses Strong: Metaplasticity Prolongs Associativity of Long-Term Memory by Switching Synaptic Tag Mechanisms.</a> Cerebral Cortex. 24, 353-363 (2014).</li>
<li>Sajikumar, S., Frey, J. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anisomycin+inhibits+the+late+maintenance+of+long-term+depression+in+rat+hippocampal+slices+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Anisomycin inhibits the late maintenance of long-term depression in rat hippocampal slices in vitro.</a> Neuroscience Letters. 338, 147-150 (2003).</li>
<li>Ishikawa, Y., Tamura, H., Shiosaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diversity+of+neuropsin+%28KLK8%29-dependent+synaptic+associativity+in+the+hippocampal+pyramidal+neuron%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+physiology%22%5BJournal%5D)">Diversity of neuropsin (KLK8)-dependent synaptic associativity in the hippocampal pyramidal neuron.</a> The Journal of physiology. 589, 3559-3573 (2011).</li>
<li>Ishikawa, Y., Horii, Y., Tamura, H., Shiosaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuropsin+%28KLK8%29-dependent+and+-independent+synaptic+tagging+in+the+Schaffer-collateral+pathway+of+mouse+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Neuropsin (KLK8)-dependent and -independent synaptic tagging in the Schaffer-collateral pathway of mouse hippocampus.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 28, 843-849 (2008).</li>
<li>Sajikumar, S., Morris, R. G. M., Korte, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Competition+between+recently+potentiated+synaptic+inputs+reveals+a+winner-take-all+phase+of+synaptic+tagging+and+capture%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Competition between recently potentiated synaptic inputs reveals a winner-take-all phase of synaptic tagging and capture.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 111, 12217-12221 (2014).</li>
<li>Navakkode, S., Sajikumar, S., Frey, J. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+type+IV-specific+phosphodiesterase+inhibitor+rolipram+and+its+effect+on+hippocampal+long-term+potentiation+and+synaptic+tagging%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The type IV-specific phosphodiesterase inhibitor rolipram and its effect on hippocampal long-term potentiation and synaptic tagging.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 24, 7740-7744 (2004).</li>
<li>Kohl, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemisphere-specific+optogenetic+stimulation+reveals+left-right+asymmetry+of+hippocampal+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Hemisphere-specific optogenetic stimulation reveals left-right asymmetry of hippocampal plasticity.</a> Nature. 14, 1413-1415 (2011).</li>
<li>Frey, U., Huang, Y. Y., Kandel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+cAMP+Simulate+a+Late+Stage+of+LTP+in+Hippocampal+CA1+Neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Effects of cAMP Simulate a Late Stage of LTP in Hippocampal CA1 Neurons.</a> Science. 260, 1661-1664 (1993).</li>
<li>Erdogdu, G., Uto, A., Hossmann, K. -A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+global+ischemia+and+recirculation+of+rat+brain+on+protein+synthesis+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Metab+Brain+Dis%22%5BJournal%5D)">The effect of global ischemia and recirculation of rat brain on protein synthesis in vitro.</a> Metab Brain Dis. 8, 199-206 (1993).</li>
<li>Djuricic, B., Berger, R., Paschen, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+synthesis+and+energy+metabolism+in+hippocampal+slices+during+extended+%2824+hours%29+recovery+following+different+periods+of+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Metab+Brain+Dis%22%5BJournal%5D)">Protein synthesis and energy metabolism in hippocampal slices during extended (24 hours) recovery following different periods of ischemia.</a> Metab Brain Dis. 9, 377-389 (1994).</li>
<li>Park, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NMDA+receptor-dependent+long-term+potentiation+comprises+a+family+of+temporally+overlapping+forms+of+synaptic+plasticity+that+are+induced+by+different+patterns+of+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Philosophical+Transactions+of+the+Royal+Society+B%3A+Biological+Sciences%22%5BJournal%5D)">NMDA receptor-dependent long-term potentiation comprises a family of temporally overlapping forms of synaptic plasticity that are induced by different patterns of stimulation.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society B: Biological Sciences. 369, 20130131(2014).</li>
</ol>

Bu video makalede Açık erişim Cerebos Pasifik Limited tarafından desteklenmektedir.

Akut hipokampal dilim LTP ve STC ve çapraz yakalama gibi diğer fonksiyonel plastisite süreçlerinin çalışma için mükemmel bir model sistemidir. Bu hipokampal devrelerin laminer yapısal ağının çok hassas elektrot konumları izin verir ve bir kan-beyin bariyeri olmadan, yanında hızlı nörofarmakolojik manipülasyon için açık bir platform sunuyor korur. Bu makalede, genç yetişkin sıçanlardan uygulanabilir akut hipokampal dilim hazırlanması için bir metodoloji tarif eder ve STC ve çapraz etiketleme araştırmak için kullanılması. Önceki araştırmalar hayvanların cinsiyet ve yaş elektrofizyoloji çalışmalarında kullanılmak üzere düşünülmesi gereken önemli faktörlerdir vurguladı. Tam olarak ifade yetişkin reseptör fonksiyonları (5-7 hafta arası erkek Wistar sıçan) ile 27,28 nedenle genç erişkin hayvanların kullanılmaktadır. 23 asimetriler Sağ ve sol hipokampus arasındaki bağlantılarda kemirgenler 29 not edilmiş veNMDA reseptör ifadesinde önemli farklılıklar oyuk 34 olarak rapor edilmiştir. Biz, ancak. Önceki LTP çalışmalar ile uyumlu olması için 23,32 doğru hipokampus kullanmış hipokampi biri sürece kıvamlılık muhafaza edilir olarak kullanılabilir. Herhangi bir protokolde olduğu gibi, tecrit ve doku, gergin hasarlı, kuru veya hipoksik hale değil hızlı prosedürleri dilimleme ama özen gerçekleştirmek için çok önemlidir. PH, sıcaklık ve çözeltilerinin iyonik bileşim içinde varyasyonlar dilimleri ve sonuçların canlılığı üzerinde derin bir etkiye sahip olabilir. Bu nedenle bu tür varyasyonlar kaçınılmalıdır. Bu hazırlık adımları sırasında oluşan glutamat reseptör-bağımlı kalsiyum salma tersinmez sinir dokusunda 35,36, 37 protein sentezini etkileyebilir gözlenmiştir. Manuel doku dilimleme kullanma vi kıyasla çok hızlı bir şekilde tamamlanması süreci izin vererek bu en aza indirmek için yardımcı olabilirbraslicers. Ancak, birçok laboratuvarlar da etkili bir dilim canlılığını korumak için gerekli önlemler ile vibraslicers kullanın. Dikkate diğer önemli faktör deneyler başlamadan önce uzun kuluçka dönemi olduğunu. Bu rahatsızlık hazırlama 23. sırasında neden sonra dilimler metabolik devlet ve kinaz aktivasyon düzeylerinde istikrar sağlamak için gerçekten çok önemli olduğu not edilmiştir. Bu stabilite, uzun süreli kayıtlar tutarlılık için gereklidir. Bu gözlem yeniden vurgulamak ve yaklaşık 3 saat uzun inkübasyon saatleri öneririz. Stimülasyon parametreleri çeşitli LTP sebep olduğu bilinen, ancak her durumda ortaya moleküler mekanizmalar (inceleme için 38 bakınız) aynı olmayabilir. Bu dayanıklılık ve sırayla, sinaptik etiketleme ve yakalama deneylerin sonuçlarını etkileyebilir, LTP diğer özelliklerini etkileyebilir. Dolayısıyla stimülasyon paradigmalar ve özelliklerini doğrulamak için önemlidirortaya çıkardı LTP performans laboratuvar koşullarında ve tutarlılığı korumak. Biz genellikle çok büyük presinaptik lif yaylım ile ve maksimal 0,5 mV daha az fEPSPs ve kayıtlar da reddedilir sırasında lif voleybolu önemli değişiklikleri içeren deneyleri deneyler düşünmüyoruz. Bundan başka, iki ya da üç yol yol deneyler ise, bu yolun bağımsızlık sağlamak için önemlidir. Bu eşleştirilmiş darbe kolaylaştırma protokolü 28 ile yapılabilir. Arabirim kayıt sistemlerinden biri dezavantajı odası ve çevre arasındaki sıcaklık ve nem farklılıklar nedeniyle uzun kayıt saatlerinde elektrotlar üzerinde yoğunlaşma damlacıklarının oluşumu. Bu damlacıklar dikkatli bir şekilde, zaman zaman, lekelenen gerekir. Aksi halde damlacıklar dilimleri üzerine damla ve rahatsızlığı veya sinyallerin hatta kaybına neden olabilir. Biz genellikle bu b mücadeley ustaca elektrotları dokunmadan, bir ince filtre kağıdı fitil kullanılarak mikroskop altında güdümlü damlacıkların blot. Ancak, en iyi çözüm gibi Edinburgh araştırmacılar Üniversitesi tarafından geliştirilen ETC sistemi gibi merkezi bir ısıtma sistemi, kullanmak olacaktır. Bir sonuç not, metodolojiler çeşitli farklı deneysel amaçlar için hipokampal dilim hazırlanmasında kullanılan dünya çapında laboratuarlarda var. Prosedürün birbirleri üzerinde bazı avantajlar sunmaktadır. Bir dikkatlice deney amacına uygun protokol dakika ayrıntıları optimize etmek gerekiyor. Biz bu makalede bu tür STC ve çapraz yakalama gibi geç-ilişkisel süreçleri incelemek için metodolojinin bazı yönlerini geliştirmeye yardımcı umuyoruz.

Beyindeki bilgilerin kodlanması ve depolanması, sinirbilimde hala en önemli ve hevesle takip edilen zorluk olmaya devam ediyor. Yıllar geçtikçe, uzun süreli güçlenme (LTP) ve uzun süreli depresyon (LTD), hafızanın önde gelen hücresel korelasyonları olarak ortaya çıkmıştır1,2. Girdi özgüllüğü ve ilişkilendirilebilirlik sergileyen bu aktiviteye bağlı değişiklikler, nöronal ağlardaki hafıza izlerinin stabilizasyonu ile sonuçlanır 1,3,4. İki sinaptik plastisite formunun korunması, plastisite ile ilgili ürünlerin (PRP'ler) sentezini gerektirir5-10. Yeni sentezlenen proteinin sadece LTP veya LTD eksprese eden spesifik aktive edilmiş sinapslarla etkileşimini içeren sinaps özgüllüğü, hafıza için kritik öneme sahiptir. Bu özgüllük, PRP'lerin yakın zamanda aktif, 'etiketlenmiş' sinapslarla etkileşime girdiği 'Sinaptik Etiketleme ve Yakalama' (STC) kavramı ile açıklanmaktadır11,12. STC süreci, hücresel düzeyde anıların çağrışımsal özellikleri için bir çerçeve sunar. Kısa dönemli plastisite biçimlerinin, çağrışımsal ve zamana bağlı bir şekilde nasıl uzun süreli plastisite biçimlerine dönüştürüldüğüne dair kavramsal bir temel sağlar13.
STC süreci sırasında, protein sentezine bağlı geç LTP'ye yol açan bir girdide güçlü bir tetanizasyon, aynı nöron popülasyonuna başka bir bağımsız girdide indüklenen bir protein sentezinden bağımsız erken LTP'nin kalıcı bir nöron popülasyonuna takviye edilmesiyle sonuçlanır13. Geçici bir nöral aktivite ile lokal bir sinaptik etiketin ayarlanması ve güçlü nöral aktivite ile yayılabilir PRP'lerin sentezi, STC13,14 sırasındaki iki anahtar olaydır. PRP'lerin yakın zamanda güçlendirilmiş 'etiketlenmiş' sinapslar tarafından yakalanması, uzun vadeli potansiyesyonun sürdürülmesi için esastır. STC fenomeni15-17'nin varlığını doğrulamak ve aday 'etiketleri'18 ve 'PRP'leri'19 tanımlamak için birçok çalışma yapılmıştır. Kalsiyum/kalmoduline bağımlı protein kinaz II (CaMKII) ve hücre dışı sinyal regüle kinaz1/2 (ERK1/2); CaMKIV, Protein Kinaz M (PKM) ve beyin kaynaklı nörotrofik faktör (BDNF) sırasıyla 'tag' ve 'PRP' için aday moleküllerden bazılarıdır19-21. Sinaptik etiketleme modeli, LTP ve LTD arasındaki pozitif çağrışımsal etkileşimleri içerecek şekilde daha da genişletilmiştir - "sinaptik çapraz etiketleme"22. Sinaptik çapraz etiketlemede, bir sinaptik girdideki geç bir LTP/LTD, bağımsız bir girdideki zıt protein sentezinden bağımsız erken LTD/LTP'yi uzun ömürlü formuna dönüştürür veya bunun tersi de geçerlidir22. 
Hipokampal dilim hazırlığı, uzun süreli sinaptik plastisite çalışmalarında en yaygın kullanılan modeldir23,24. Sinaptik etiketleme ve çapraz etiketleme kavramları hakkındaki anlayışın çoğu, hipokampusun CA1 bölgesinde yapılan çalışmalardan kaynaklanmaktadır ve teknik karmaşıklık nedeniyle laboratuvarların çoğu hala bu süreçleri inceleyememektedir. Sıçan hipokampal dilimlerinin hazırlanması ve uzun saatler boyunca stabil geç LTP/LTD'nin kaydedilmesi için deneysel koşullar, sinaptik etiketleme/çapraz etiketleme23,25,26 çalışmaları için son derece önemlidir. Bu makale, sıçanların akut hipokampal dilimlerinden kararlı, uzun vadeli alan potansiyeli kayıtları kullanarak CA1 piramidal nöronlarında STC ve çapraz etiketleme gibi uzun vadeli plastisite süreçlerini incelemek için ayrıntılı deneysel prosedürleri açıklamaktadır.

<table><tbody><tr><td>I. Diseksiyon Araçları</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1. Bandaj makası</td><td>KLS Martin, Almanya</td><td>21-195-23-07</td><td></td></tr><tr><td></td><td>B-Braun/Aesculap, Almanya</td><td>LX553R</td><td></td></tr><tr><td>2. İris makası</td><td>B-Braun/Aesculap, Almanya</td><td>BC140R,BC100R</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>3. Bone rongeur</td><td>World Precision Instruments (WPI), Almanya</td><td>14089-G</td><td></td></tr><tr><td>4. Neşter Dünyası</td><td>Hassas Aletler (WPI), Almanya;</td><td>500236-G</td><td></td></tr><tr><td></td><td>B-Braun/Aesculap, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td>BB73</td><td></td></tr><tr><td>5. Neşter bıçağı#11</td><td>B-Braun/Aesculap, Almanya</td><td>BB511</td><td></td></tr><tr><td>6. Orak</td><td>ölçekleyici KLS Martin, Almanya</td><td>38-685-00</td><td></td></tr><tr><td>7. Açılı forseps</td><td>B-Braun/Aesculap, Almanya</td><td>BD321R</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>8. Anestezi/İndüksiyon odası</td><td>MIP Anestezi Teknolojileri (Şimdi, Patterson Scientific), Oregon</td><td>AS-01-0530-LG</td><td></td></tr><tr><td>II. ACSF bileşen kimyasalları</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1. Sodyum klorür (NaCl)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>S5886</td><td></td></tr><tr><td>2. Potasyum klorür (KCl)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9541</td><td></td></tr><tr><td>3. Magnezyum sülfat heptahidrat (MgSO4.7H20)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M1880</td><td></td></tr><tr><td>4. Kalsiyum klorür dihidrat (CaCl2.2H2O)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>C3881</td><td></td></tr><tr><td>5. Potasyum fosfat monobazik (KH2PO4)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9791</td><td></td></tr><tr><td>6. Sodyum bikarbonat (NaHCO3)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>S5761</td><td></td></tr><tr><td>7. D-Glikoz susuz (C6H12O6)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7021</td><td></td></tr><tr><td>III. Elektrofizyoloji Aletleri</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1. Mikroskop</td><td>Olympus, Japonya</td><td>Model SZ61</td><td></td></tr><tr><td>2. Sıcaklık Kontrol</td><td>Cihazı Bilimsel Sistemler Tasarım A.Ş. Kanada</td><td>PTC03</td><td></td></tr><tr><td>3. Diferansiyel AC Amplifikatör</td><td>Sistemleri, ABD</td><td>Model 1700</td><td></td></tr><tr><td>4. İzole Nabız Stimülatörü</td><td>Sistemleri, ABD</td><td>Model 2100</td><td></td></tr><tr><td>5. Osiloskop</td><td>Rhode & Schwarz</td><td>HM0722</td><td></td></tr><tr><td>6. Dijital-Analog Dönüştürücü</td><td>Cambridge Electronic Design Ltd. Cambridge, İngiltere</td><td>CED-Power 1401-3</td><td></td></tr><tr><td>7. Arayüz Beyin Dilim Odası Bilimsel</td><td>Sistemler Tasarım A.Ş. Kanada</td><td>BSC01</td><td></td></tr><tr><td>8. Boru Pompası</td><td>Ismatec, Idex Sağlık & Bilim, Almanya</td><td>REGLO-Analog</td><td></td></tr><tr><td>9. Karbojen Akış Ölçer</td><td>Cole-Parmer</td><td>03220-44</td><td></td></tr><tr><td>10. Fiber Işık Aydınlatıcı</td><td>Dolan-Jenner Industries</td><td>Fiber Lite MI-150</td><td></td></tr><tr><td>11. Mikromanipülatörler</td><td>Marzhauser Wetzlar, Almanya</td><td>00-42-101-0000 (MM-33)</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td>00-42-102-0000 (MM-32)</td><td></td></tr></tbody></table>

kemirgenler gelen akut hipokampal dilimleri kullanarak synaptic etiketleme / yakalama ve Çapraz yakalama İncelenmesi

Investigation of Synaptic Tagging/Capture and Cross-capture using Acute Hippocampal Slices from Rodents

Sinaptik etiketleme ve yakalama (STC) ve çapraz etiketleme, belirli bir zaman dilimi içinde nöronlarda sinaps özgüllüğünün ve ilişkilendirilebilirliğin nasıl elde edildiğini açıklayan hücresel düzeyde iki önemli mekanizmadır. Bu uzun vadeli plastisite ile ilgili süreçler, hücresel düzeyde hafıza oluşumu ve kalıcılığının temelini incelemek için önde gelen aday modellerdir. Hem STC hem de çapraz etiketleme iki seri işlemi içerir: (1) sinaptik etiketin belirli bir stimülasyon modeli tarafından tetiklendiği şekilde ayarlanması ve (2) sinaptik etiketin yeni sentezlenen plastisite ile ilgili proteinler (PRP'ler) ile etkileşime girdiği sinaptik yakalama. STC ve çapraz etiketleme kavramları hakkındaki anlayışın çoğu, hipokampusun CA1 bölgesinde yapılan çalışmalardan kaynaklanmaktadır ve teknik karmaşıklık nedeniyle laboratuvarların çoğu hala bu süreçleri inceleyememektedir. Hipokampal dilimlerin hazırlanması ve stabil geç LTP/LTD'nin kaydedilmesi için deneysel koşullar, sinaptik etiketleme/çapraz etiketlemeyi incelemek için son derece önemlidir. Bu video makalesinde, sıçanların akut hipokampal dilimlerinden elde edilen kararlı, uzun vadeli alan potansiyeli kayıtları kullanılarak CA1 piramidal nöronlarında STC ve çapraz etiketleme gibi uzun vadeli plastisite süreçlerini incelemek için deneysel prosedürler açıklanmaktadır.

Açıklanan metodoloji (Wistar). Bu tür yetişkin farelerin akut hipokampal dilim sinaptik etiketleme ve çapraz yakalama olarak LTP / LTD ve ilişkisel etkileşimlerin uzun süreli formları incelemek için kullanılır olmuştur 23 Bu teknik, hem fareler ile deneyler için etkili olduğu kanıtlanmıştır ve fare çeşitli 30,31 suşları. Metodoloji kadar 8-12 saat istikrarlı LTP kayıtları için başarıyla kullanılmaktadır. 32 Erken LTP (Şekil 3B, dolu daireler S2) ve böylece dönüşüm aksi çürüyen formu (tek giriş (S1) zayıf tetanization tarafından belirlenen &#39;etiketi&#39; PRPS &#39;Başka bağımsız ancak örtüşen girdi güçlü tetanization tarafından uyarılan yakalar uzun süreli bir bir (Şekil 3B, açık daireler) içine S1 -LTP) (WTET ile indüklenen erken LTP karşılaştırmak için) 20,33 bkz. Zayıf tarafından yakalanan PRPstetanization grubu etiketi mutlaka STET neden olduğu geç-LTP gelen gerek yoktur, ancak, aynı zamanda ÖİDÖ neden olduğu geç-LTD tarafından sağlanabilir. LTP ve LTD arasındaki olumlu etkileşimin birleştirici Bu tür &#39;cross-etiketleme / yakalama &quot;olarak adlandırılır. S1 WTET kaynaklı erken LTP S2 ÖİDÖ kaynaklı geç LTD tarafından sağlanan PRPS (Şekil 3C, dolu daireler) yakalayarak geç LTP (Şekil 3C, açık daireler) ile takviye olur. Kendi baz ile karşılaştırıldığında istatistiksel olarak anlamlı kuvvetlenmesi ve depresyon her iki durumda da S1 ve S2 muhafaza edildi (Wilcoxon testi, p &lt;0.05). Etiket PRP etkileşim oluşması için (zayıf-öncesi güçlü / strong-öncesi zayıf) iki olay arasındaki zaman penceresi 30-60 aralığında kaldığı sürece, iki olayın zamansal sırası sürece çok önemli değil dakika. Bu bir üçüncü bağımsız ama örtüşen sinaptik eklemek akıllıca olacaktırkoymak ve kayıtların istikrarı izlemek için bir temel kontrolü olarak kullanabilirsiniz. LTP / LTD Erken ve geç formları ikna etmek için kullanılan elektriksel stimülasyon protokolleri STC deneylerde kullanmadan önce tutarlılık ve güvenilirlik için tek giriş deneylerinde doğrulanması gerekir. Biz de bu deneylerin başarı dilimleri kalitesine dayanır çünkü protokol açıklanan dilim hazırlık metodolojisi önemini vurgulamak isterim. <img alt="Figür 1" src="/files/ftp_upload/53008/53008fig1.jpg" /> Hipokampus diseksiyonu kullanılan Şekil 1. (A) Araçlar: (a) Bandaj makasları (b) İris makaslar (c) Kemik rongeur (d) İnce spatula, Yumuşak (e) Neşter sayısı 11 (f) Orak ölçekleyici (g) -bristle boya fırçası (h) Plastik Pasteur pipeti (i) filtre kağıdı (85mm) (j) filtre kağıdı (30mm) (k) petri ve beher sığdırmak için Cam bardak (l) Alüminyum soğutma blokları(m) Petri kabı. (B) Manuel doku kıyıcı. (a) Platform (b) bıçak tutucu (c) Sürmeli mikrometre, çözünürlük 10 mikron ile kol kesme. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53008/53008fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/53008/53008fig2.jpg" /> Şekil 2. Elektrofizyoloji kurulumu (A) aşağıdakilerden oluşan uyarıcıları alan potansiyeli kayıtlarında (b), bir diferansiyel yükselteç (c) bir analog-dijital dönüştürücü (d) Osiloskop (e) toplama yazılımı (f) bilgisayar titreşim dayanıklı masa üstü elektrot tutucular&gt; 4x büyütme (h) arayüzü beyin dilim odası (i) ACSF ve karbojen kaynağı (j) sıcaklık kontrolörü (k) için bir perfüzyon sistemi bir aydınlatma kaynağı (l) manipulatör (g) mikroskop. (B) Arayüz beyin dilimodacık. (C) (D) arayüz odasında hipokampal dilimler cam kılcal imzalandı. (E) Paslanmaz çelik elektrot. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53008/53008fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/53008/53008fig3.jpg" /> Şekil 3. (A) alanı potansiyeli kayıt için bir enine hipokampal kesit ve elektrot konumu şematik gösterimi: Bu gösterimde, iki uyarıcı elektrotlar (S1 ve S2) uyarmak için CA1 bölgesinde in stratum radiatumunun merkezi içinde yerleştirilmiş iki bağımsız fakat birbiriyle örtüşen CA1 piramidal nöronlar üzerine sinaptik girdiler. İki hücre dışı kayıt elektrotları, tek apikal dendritik bölmeden alan EPSP (eksitatör post-sinaptik potansiyel) kaydetmek ve başka piramidal hücreden somatik nüfus başak kaydetmek içinorganları sırasıyla stratum radiatum ve stratum pyramidale yer almaktadır. CA1- cornu ammonis bölgesi 1, CA3- cornu ammonis bölge 3, DG- dentat girus, SC- Schaffer teminat lifleri, S1- uyarıcı elektrot 1, S2-uyarıcı elektrot 2. (B) Zayıf STC incelemek için güçlü paradigma öncesi: Zayıf tetanization (WTET) geç-LTP indüklemek için 30 dk S2 güçlü tetanization (STET) (doldurulmuş daireler), ardından erken LTP indüklemek için (içi boş daireler) S1 uygulanır. S1 erken-LTP etiketleme gösteren geç LTP takviyeli ve çapraz etiketleme incelemek için güçlü paradigma öncesi (n = 6) (C) Zayıf etkileşim yakalama alır. Erken LTP takip S1 (açık daireler) içinde WTET tarafından uyarılan 30 dakika sonra ÖİDÖ kullanılarak S2 geç LTD indüksiyonu (içi dolu daireler). S1, erken LTP çapraz-tagging ve yakalama gösteren 6 saat süren geç LTP dönüştürülür (n = 6). Tek ok erken LTP indüklemek için uygulanan zayıf tetanization temsil eder. Okların Üçüz temsilGeç-LTP indüklemek için güçlü bir tetanization. Kırık ok ÖİDÖ geç LTD indüklemek için temsili sinaptik girişine tatbik edildiği zaman noktasını temsil eder. Hata çubukları SEM gösteriyor. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53008/53008fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

Bu video makalesinde, kemirgenlerden alınan akut hipokampal dilimler kullanılarak CA1 piramidal nöronlarında sinaptik etiketleme, yakalama ve çapraz etiketleme gibi uzun vadeli plastisiteyi ve ilişkisel süreçlerini incelemek için deneysel prosedürler açıklanmaktadır.

Kemirgenler gelen akut Hipokampal Dilimleri kullanarak Synaptic Etiketleme / yakalama ve Çapraz yakalama İncelenmesi

Synaptic tagging and capture (STC) and cross-tagging are two important mechanisms at cellular level that explain how synapse-specificity and associativity ...

Bu prosedürün genel amacı, kemirgenlerden elde edilen hippocampal kesitler kullanarak CA1 parametal nöronlarındaki uzun süreli plastisiteyi ve sinaptik etiketleme, yakalama ve çapraz etiketleme gibi ilişkisel süreçlerini incelemektir. Bu işlem, öncelikle beynin diseke edilmesi ve hipokampusun hızla soğuk, oksijenlendirilmiş yapay serebrospinal sıvı içerisine izole edilmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adımda, manuel bir doku dilimleyici kullanılarak akut hippocampal kesitler hazırlanır ve bunlar bir ara yüz odacığında inkübe edilir.Sıradaki iki stimülasyon elektrodu ve iki kayıt elektrodu, iki sinaptik girdiden alan EPSP ve popülasyon spike yanıtlarını kaydetmek için CA1 bölgesine yerleştirilir. Son adım, belirli bir zaman penceresi içinde bir sinaptik girdide geçici bir plastisite formu ve diğer girdide kalıcı bir plastisite formu indüklemektir. Nihayetinde, sinaptik etiketleme yakalama ve çapraz yakalama mekanizmalarını araştırmak için her iki girdiden gelen alan EPSP yanıtları uzun süreler boyunca kaydedilir.Sinaptik etiketleme ve yakalama, kısa süreli belleğin belirli bir zaman dilimi içerisinde nasıl uzun süreli belleğe dönüştüğüne dair kavramsal bir temel sağlar. Deneysel basamaklar, çoklu sinaptik girdilerden stimülasyon ve kayıt işlemlerini içerdiğinden öğrenilmesi zor olduğundan, bu yöntemin görsel olarak gösterimi kritik önem taşımaktadır. Prosedürü laboratuvarımdan lisansüstü öğrenciler Mahesh Shira, machete ve maima Sharma uygulamalı olarak göstereceklerdir.Bu prosedüre başlamak için, A CSF hazırlayın ve bunu %95 oksijen ve %5 karbondioksit ile havalandırın. Arayüz odasının tabanını, kapasitesinin yaklaşık %70'ine kadar distile su ile doldurun. Ardından, 32 °C'ye ayarlanmış sıcaklık kontrol cihazını açın.Ardından, A CSF'ye 1 mL/dk akış hızıyla geçmeden önce, giriş borusundan yüksek akış hızında distile su akıtarak üst hazneyi 10 ila 15 dakika boyunca yıkayın. Daha sonra, dilimler için bir dinlenme yüzeyi sağlamak amacıyla üst hazneye bir ağ yerleştirin. Alt hazneye karbogen vermeye başlayın ve giriş borusunu sürekli karbogenlenen A CSF içine daldırın.A CSF'nin karbogenle doyurulması ve üst hazneyi doldurması için 20 dakika bekleyin. Bu adımda, doku kıyıcıya bir jilet takın ve keskin kenarın düzgün bir şekilde hizalandığından emin olun. Bıçağın sıkıca sabitlendiğini doğrulamak için küçük bir filtre kağıdını keserek test edin.Ardından, kayar vernier mikrometresini başlangıç konumuna getirin. Şimdi ötanazi uygulanmış bir sıçanın kafasını temin edin ve bir iris makası kullanarak, beyin sapını çıkarmak için posterior kafatasından bir kesi yapın. Daha sonra kafatasının sağ tarafı boyunca küçük bir insizyon ve sol tarafına daha uzun bir insizyon yapın.Kafatası sol taraftan başlayıp sağ tarafa doğru ilerleyerek bir kemik UR ile dikkatlice çıkarılır. Korteksi ve üzerini örten ince dura tabakasını açığa çıkarmak için dura ince bir spatula ile dikkatlice kaldırılır ve ardından frontal plakalar kemik Ro ile çıkarılır. Sonrasında, özellikle korteks ile serebellum arasındaki bağlantı bölgesinde kalan dura, bir spatulanın düz ucuyla temizlenir ve basınç yukarıya doğru uygulanarak beynin zarar görmesi önlenir.Spatula kullanarak beyni, soğuk ve karbonatlı A CSF ile doldurulmuş alüminyum bir soğutma bloğu üzerindeki Petri kabına nazikçe alın; hipokampusu izole etmek için 11 numara bistüri ile serebellumu çıkarmak için düz bir kesi ve beynin ön kısmının dörtte birini çıkarmak için başka bir kesi yapın. Ardından, orta hat boyunca sığ bir sagital kesi yapın. Orta hattan başlayarak.Dorsal hipokampusu açığa çıkarmak için korteksi orak şeklinde skalpel (sickle scaler) ile dikkatlice kaldırın. Ardından, hipokampusun üzerindeki korteks tabakasını temizleyin. Hipokampal komissüre küçük bir kesi atın.Siklet skaleri kullanarak, dorsal uçtan başlayarak yuvarlama hareketleriyle hipokampüsü nazikçe çıkarın. Ardından, izole edilen hipokampüs çevresindeki korteks ve bağ dokularını siklet scaler'in kavisli ucunu kullanarak temizleyin. Hipokampal dokuyu dilimlemek için, manuel dilimleyicinin dilimleme tablasına CSF ile ıslatılmış 30 milimetrelik bir watman filtre kağıdı parçası yerleştirin.Hipokampal dokuyu filtre kağıdının üzerine aktarın. Orak bistürinin düz ucunu kullanarak, hipokampusun dilimleyicinin bıçağına göre uygun bir yönelimde hizalanması için filtre kağıdını hareket ettirin; böylece hipokampus, fia'ya yaklaşık 70 derecelik bir açıyla dilimlenmiş olur. Ardından, hipokampal dokuyu çevreleyen fazla çözeltiyi emdirerek temizleyin.Katlanmış bir filtre kağıdı kullanarak hipokampusu transvers olarak dilimleyin ve dilim morfolojisinin net olmadığı hipokampusun uç kısımlarındaki dokuları atın. Ardından, her dilimleme turundan sonra verniyeli mikrometreyi ayarlayarak kalan dokuyu 400 micron kalınlığında dilimlere ayırın. Her kesimden sonra, dilimi yumuşak kıllı bir fırça yardımıyla bıçaktan nazikçe alarak soğuk karbonatlı A CSF ile dolu küçük bir behere aktarın.Ardından, temiz bir plastik past pipet kullanarak kesitleri nazikçe kesit odasındaki ağın üzerine aktarın. Geniş bir uçla, elektrot yerleşimini ve kayıt kontrolünü kolaylaştıracak şekilde kesitlerin konumunu dikkatlice ayarlayarak, kesitlerin yeterince A CSF tabakasıyla çevrelendiğinden ancak tamamen batmadığından emin olun. Bundan sonra, odayı kapatın ve sinaptik işaretleme ve yakalama deneylerinde kesitleri iki ila üç saat boyunca inkübe edin.Mikroskop altında, Schaffer kollateral liflerini uyarmak için iki uyarıcı elektrodu CA1 bölgesinin stratum radiatum tabakasına ve bir kayıt elektrodunu, uyarıcı elektrotların arasında orta noktada yer alan CA1'in apikal dendritik bölgesine yerleştirin. fEPSP yanıtlarını kaydetmek için, popülasyon spike kaydı yapmak amacıyla stratum pyramidale tabakasına başka bir kayıt elektrodu yerleştirin.Tüm elektrotlar kesite temas ettiğinde, her iki girişte de uygun bir alan EPSP sinyalinin alınabildiğinden emin olmak için bir test stimülasyonu uygulayın. Uygun bir F-E-P-S-P sinyali elde edildiğinde, manipülatörlerin hassas hareket düğmelerini kullanarak elektrotları dikkatlice yaklaşık 200 mikron daha aşağı indirin. Ardından, kesitin toparlanması için 20 dakika bekleyin.Bundan sonra, 20 microamps ile 100 microamps arasındaki akım yoğunlukları aralığında alan EPSP eğimini ölçerek girdi-çıktı ilişkisini belirleyin. Ardından, her bir girdi için, maksimum alan EPSP eğiminin %40'ını uyaran stimülasyon yoğunluğunu deney boyunca sabit uyaran olarak belirleyin. 15 ila 20 dakika sonra bazal kayıt almaya başlayın; bir girdide L-T-P-L-T-D indüksiyonundan önce en az 30 ila 60 dakikalık stabil bir bazal kayıt alın ve tek bir yüksek frekanslı stimülasyondan oluşan zayıf bir tetin protokolü kullanarak erken bir LTP indükleyin.Diğer giriş, erken LTP indüksiyonundan 30 dakika sonra bazal kayda devam ederken; 10 dakikalık trenler arası aralıkla tekrarlanan yüksek frekanslı stimülasyon içeren güçlü bir tetin protokolü kullanarak, ikinci S girişinde geç bir LTP indükleyin. Ardından, sinaptik etiketleme ve yakalama yoluyla birinci S girişindeki erken LTP'nin geç LTP'ye dönüşümünü ortaya çıkarmak için alan EPSP yanıtlarını uzun süreli kaydedin. Benzer şekilde, bir çapraz yakalama deneyinde, önce bir girişte erken bir LTP indükleyin ve bunu 30 dakika sonra, 15 dakikalık süre boyunca 900 patlamadan oluşan güçlü bir düşük frekanslı stimülasyon protokolü kullanarak diğer bir girişte geç LTD indüksiyonu ile takip edin.Ardından, çapraz yakalama ile giriş S birindeki erken LTP'nin geç LTP'ye dönüşümünü ortaya çıkarmak için alan EPSP yanıtlarını uzun süreler boyunca kaydedin. Bu gösterimde, iki bağımsız ancak örtüşen sinaptik girişi uyarmak için CA bir bölgesinin stratum radiatum tabakasına iki uyarıcı elektrot yerleştirilmiştir. CA bir piramidal nöronları üzerine ise iki hücre dışı kayıt elektrodu yerleştirilir.Biri apikal dendritik kompartmandan F-E-P-S-P kaydetmek için, diğeri ise sırasıyla stratum radiatum ve stratum pyramidale'de yer alan piramidal hücre gövdelerinden somatik popülasyon spike'ı kaydetmek için kullanılır. Bu şekil, sinaptik etiketleme ve yakalamayı incelemek için kullanılan zayıf-öncesi-güçlü paradigmasını göstermektedir.Erken LTP'yi indüklemek için S bir'e zayıf tetanik uyarı uygulanmış, ardından geç LTP'yi indüklemek için 30 dakika sonra S iki'ye güçlü tetanik uyarı verilmiştir ve bu şekil, çapraz etiketlemeyi (cross tagging) incelemek için güçlü paradigmadan önceki zayıf durumu göstermektedir. S bir'de zayıf tetanik uyarı ile erken LTP indüklenmiş, ardından güçlü düşük frekanslı stimülasyon protokolü kullanılarak S iki'de geç LTD indüklenmiştir. S bir'de 30 dakika sonra, erken LTP altı saat süren geç LTP'ye dönüşerek çapraz etiketleme ve yakalamayı (capture) göstermiştir.Bu diseksiyon ve kesit hazırlama tekniği bir kez kavrandıktan sonra, üç ila beş dakika içinde çok hızlı bir şekilde gerçekleştirilebilir. Böylece, uzun süreli kayıtlar için kesitlerin canlılığı korunabilir. Bu yöntem kullanılarak, farklı farmakolojik ajanların sinaptik etiketleme ve yakalama süreçleri üzerindeki etkileri de test edilebilir.Bu videoyu izledikten sonra, uzun süreli fonksiyonel plastisite deneylerinin nasıl yürütüleceği ile sinaptik etiketleme ve yakalama süreçleri hakkında kapsamlı bir anlayışa sahip olmalısınız.

investigation-synaptic-taggingcapture-cross-capture-using-acute

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu makale, sıçan ve transgenik farelerin hipokampal dilimler sinaptik değişiklikler, beynin yaşlanma ve Alzheimer hastalığı gibi nörodejeneratif hastalıklar, yaşa bağlı ile ilgili çalışma için hazırlamak için prosedürler sıralanıyor.

Yaşlanma ve Amiloid Patoloji sırasında sinaptik değişiklikler Çalışması Sıçanlar ve Transgenik Farelerde akut Hipokampal Dilimleri hazırlanması

İzole hipokampi akut beyin kesitleri, hem de astrosit ve nöronların eşzamanlı elektrofizyolojik...

Akut Hipokampal Dilimler içinde Synaptically-uyarılmış astroglial ve Nöronal Cevaplarının İkili Elektrofizyolojik Kayıtlar

Bu videoda, bir sıçan hipokampal diliminde CA3-CA1 sinaptik yanıtlarını kaydetme yöntemi gösterilmektedir. Sinaptik yanıt gücünü değerlendirmek için uyarıcı ve kayıt elektrotlarının hipokampal dilim üzerine yerleştirilmesi ve alan uyarıcı postsinaptik potansiyelinin (fEPSP) ölçülmesinde yer alan adımları ana hatlarıyla belirtir.

Bir Sıçan Hipokampal Diliminde CA3-CA1 Sinaptik Yanıtlarının Kaydedilmesi

Kaynak: McLeod, F.,  et al. Hipokampal Kemirgen Beyin Dilimlerinde Sinaps Yoğunluğunun Değerlendirilmesi. J. Vis. Uzm. (2017). Bu video, konfokal immünofloresan analizi kullanarak hipokampal beyin dilimlerinde sinaptik belirteçleri görselleştirmek için bir yöntemi göstermektedir. Dilimler, presinaptik ve postsinaptik belirteçleri hedef alan primer antikorlarla immün boyanır, ardından florofor konjuge sekonder antikorlar gelir. Etiketli belirteçler daha sonra sinaptik mimariyi kolokalizasyonları...

İmmünofloresan Kullanılarak Fare Hipokampal Dilimlerinde Sinapsların Mikroskobik Analizi

Proteinlerin lokalizasyonu ve dağıtım onların hücresel fonksiyonları anlamak için önemli bilgiler sağlar. Elektron mikroskobu üstün çözünürlük uzaysal (EM), belirli bir antijen aşağıdaki immünohistokimya hücre içi lokalizasyonu belirlemek için kullanılabilir. Sürdürmek antijenite EM araştırmalarda özellikle zor olmuştur süre yapısal bütünlüğünü koruyarak merkezi sinir sistemi (MSS), dokular için. Burada, çalışma MSS yapılar ve antijenleri korumak ve sıçan hipokampal CA1 piramidal nöronlarda...

Hipokampal Dilim Kültürleri Synaptic Proteinler Post-gömme immunogold Etiketleme

Biz, hipokampusun CA1 bölgesinde ve dilimin tetanized alan nükleer zenginleştirilmiş kısımların daha sonraki izolasyon Uzun süreli potansiyasyon indüksiyonu için ayrıntılı bir protokol sağlar. Bu yaklaşım, önemli aktivitesini öğrenme ve hafıza ile hücresel modellerinde bağımlı nükleer protein alma belirlemek için kullanılabilir.

Hipokampal Dilimleri adlı CA1 Nükleer Zenginleştirilmiş Kesirler izolasyonu Synapto-nükleer Messenger Proteinler Etkinliği-bağımlı Nükleer İthalat Okuyacak

Bu iletişim kuralı oksijen seviyesini geri dönüşümlü arabellek küçük bir hacim ve etkinlik bağımlı sinaptik plastisite batık akut Hipokampal dilimler halinde kayıt metodolojik açıdan istikrar açıklar.

Sinaptik plastisite akut Hipokampal dilimleri bir küçük hacimli geri dönüşüm-, perfüzyon- ve batma-tipi oda sistemi içinde tutulan kayıt

Doğru bir şekilde belirlenmesi ve Hipokampal dilimleri ayirt kullanarak sinapslarda analiz için bir protokol bu makalesinde ana hatlarıyla.

Hipokampal kemirgen beyin dilimleri dansitesi Synapse değerlendirilmesi

Bu makale, farelerde yatay hipokampal beyin dilimleri elde etmek için sistematik bir protokolü tanımlamayı amaçlamaktadır. Bu metodolojinin amacı, dentat girus ile ilgili nörolojik süreçleri değerlendirmek için perforant yol ve yosunlu lif yolu gibi hipokampal lif yollarının bütünlüğünü korumaktır.

Fare Beyninin Yatay Hipokampal Dilimleri

Farelerin dorsal-ara hipokampusundan akut dilimler hazırlamak için bir protokol sunuyoruz. Bu transversal preparatı, kayıtların kalitesi ve kaydedilen nöronların morfolojik özelliklerinin korunması açısından koronal dilimleme ile karşılaştırıyoruz.

Yetişkin Farelerin Dentat Girusunda Tüm Hücre Kaydı ve Nöronal Rekonstrüksiyon için Dorsal Hipokampustan Akut Dilimlerin Hazırlanması

Öğrenin kemirgenlerden elde edilen akut hipokampal dilimleri kullanarak CA1 piramidal nöronlarında sinaptik etiketleme, yakalama ve çapraz yakalama mekanizmalarını incelemeyi. Bu yöntem uzun süreli plastisite ve bellek oluşumu süreçlerini araştırmada değerlidir.

Kemirgenler gelen akut Hipokampal Dilimleri kullanarak Synaptic Etiketleme / yakalama ve Çapraz yakalama İncelenmesi

Daha fazla video keşfet