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Biology II: Mouse, Zebrafish, and Chick

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Overview

발달 생물학을 위한 모형 유기체로서닭(갈루스 갈루스 국산)의한 가지 강도는 배아가 여성 외부에서 발전하고 실험 조작에 쉽게 접근할 수 있다는 것입니다. 많은 기술은 과학자가 계란 껍질 안쪽에 닭 배아를 검사하는 것을 허용합니다(ovo에서),그러나 배아 접근은 발달의 후반에 제한될 수 있습니다. 다행히도 병아리는 전 오보또는 달걀 껍질 외부를 배양 할 수 있습니다. ex ovo 문화에 대 한 주요 장점은 그렇지 않으면 껍질 또는 계란 내에서 병아리의 방향에 의해 방해 될 수 있는 조직에 대 한 더 큰 접근, 특히 개발의 후반 단계에서 배아에 대 한.

오보 문화를 전하는 두 가지 원칙 전략이 있습니다: 전체 노른자 문화와 문화를 절제합니다. 노른자 전체 문화 동안, 달걀 껍질은 금이 갈아 내용이 간단한 하우징 선박으로 전송됩니다. 그러나, 배양 방법에서, 배아는 노른자로부터 절제되고 하우징 용기에 장착되어 멤브레인을 유지하며, 이는 정상적인 발달에 중요하다.

전체 노른자 및 절제 기술에 대한 기본 프로토콜은 껍질 밖에서 병아리를 배양하는 장단점에 대한 토론과 함께이 비디오에서 제공됩니다. 마지막으로, ex ovo 문화의 실험적인 응용 프로그램은 이 접근이 후기 단계 배아의 현미경 검사및 유전 조작을 위한 태아에 접근을 향상하기 위하여 어떻게 이용되는지 보여주는 토론될 것입니다.

Procedure

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병아리는 개발의 대부분이 어머니의 외부에서 일어나고 있기 때문에 발달 경로의 연구를위한 다재 다능한 모델 유기체입니다. 그럼에도 불구 하 고, 계란 껍질 실험의 어떤 형태에 대 한 배아에 대 한 액세스를 방지. 다행히도 병아리는 일반적으로 이용 가능한 실험실 용품을 사용하여 껍질 외부 또는"ex ovo"를배양 할 수 있습니다. 이 비디오에서는 ex ovo 문화의 원리, 두 가지 문화 방법에 대한 단계별 절차 및 발달 연구에서 기술의 응용 프로그램에 대해 배울 수 있습니다.

병아리 ex ovo를올리는 방법에 대해 이야기하기 전에 기술의 몇 가지 원칙을 살펴보겠습니다. 계란 안에, 병아리는 노른자를 둘러싼 vitelline 막과 가까운 연결에서 발전합니다. 나머지 부피는 알부민, 또는 달걀 흰자로 채워져 배아를 보호하고 단백질의 공급원으로 작용합니다.

껍질 외부의 배양은 간단한 용기에 있는 모든 계란 내용을 사용하여 전체 노른자 문화를 통해 수행 될 수 있습니다. 대안적으로, 배아 조직은 ex ovo 절제 된 문화에서 절제되고 재배 될 수 있습니다. 이 두 가지 기술은 창계란의 사용에 비해 뚜렷한 장점이 있습니다.

첫째, 나중에 닭 배아를 창이는 병아리를 둘러싸고있는 막 내에서 발생하는 많은 중요한 혈관의 존재로 인해 복잡합니다. 이것은 ex ovo 방법을 나중에 단계에서 병아리와 함께 작업하는 것이 바람직합니다.

둘째, 이미징 리그 내에 들어갈 수 있기 때문에 ex ovo 배양 설정은 고해상도 이미징에 더 적합합니다.

더욱이, 껍질에서 배아를 제거하는 것은 미세 수술 과 미세 주입 같이 실험적인 조작을 위한 조직의 더 많은 수를 드러내습니다.

병아리는 보호와 필수 미네랄을 위해 달걀 껍질에 의존하기 때문에,이 구조없이 배아 생존은 약간의 추가주의가 필요합니다. 예를 들어, 하우징은 멸균, 습한 환경을 유지하도록 설계되어야 하며, 영양소는 알부민 또는 배양 배지 형태로 제공되어야 합니다. 장기적인 문화의 경우, 분쇄 된 껍질은 칼슘 공급원으로도 필요합니다. 더욱이, 배아를 지원하는 막에 긴장이 정상 발달에 중요하기 때문에, 성공적인 ex ovo 배양은 또한 일반적인 막 형태를 유지하는 하우징에 달려 있습니다.

이제 기본을 알고, 그것은 밖으로 치킨 시간이다! 전체 노른자 ex ovo 문화에 대 한 계란을 준비 하려면, 원하는 단계 직전까지 37.5°C에서 그들을 배양 하 여 시작.

기다리는 동안 주택을 준비하십시오. 페트리 요리, 계량 보트 및 해먹은 일반적으로 계란 내용물을 보관하는 데 사용됩니다. 첫째, 자외선 이나 에탄올로 처리하여 모든 성분을 살균하십시오.

또한, 배양 중에 습도를 유지하기 위해 멸균 물로 채워진 외부 챔버를 준비합니다.

계란이 준비되면, 배아가 정상으로 상승하도록 몇 분 동안 수평 위치에 설정합니다. 그런 다음 껍질의 바닥을 부수고 계란 내용자를 조심스럽게 하우징으로 옮긴다. 마지막으로, 하우징 선박을 덮고 습도를 유지하고 다운스트림 처리를 위해 원하는 나이에 도달 할 때까지 인큐베이터에 설치를 배치합니다.

다른 ex ovo 전략, 각성 문화, 껍질에서 배아를 제거 한 후 몇 가지 추가 단계가 필요합니다.

이 기술에서, vitelline 막은 그것으로 발전태아를 운반하는 노른자에서 부드럽게 분리됩니다.

그런 다음, 멤브레인은 장력을 유지하기 위해 장착되며, 이는 유리 링 주위의 조직을 단단히 당기거나 종이를 필터링하는 간단한 준수로 수행 할 수 있습니다.

장착 후, 배양 배지는 조직을 커버하기 위해 첨가되고, 배아는 가습챔버에 배치된다.

이식된 배아는 이제 최대 24시간 동안 인큐베이터로 돌아갈 수 있습니다.

ex ovo 문화의 원리와 방법을 배운 후, 우리는 몇 가지 새 놀이에 대한 준비가되어 있습니다.

ex ovo 배양은 더 오래된 배아에서 유전자 발현을 변경해야 할 때 특히 유용합니다. 이것에 대한 한 가지 접근법은 유전 물질의 전달을 위해 세포막을 과미화하기 위해 전류가 사용되는 전기 화입니다. 전 오보 배양 배아는 또한 화상 진찰을 위해 높게 접근하기 때문에, 유전 물질의 uptake는 전체 태아의 형광 화상 진찰을 통해 쉽게 검증될 수 있습니다.

세포 역학의 실시간 이미징은 또한 ex ovo 문화를 사용하여 가능하다. 인간 암세포는 병아리 융자란토아막 또는 CAM의 혈관을 공동으로 선택하여 종양을 형성할 수 있다. 종양 형성 후, 형광 입자는 혈류로 직접 주입하고 실시간으로 추적할 수 있다. 종양 조직에 있는 입자의 축적은 혈관 신생의 표시기, 또는 새로운 혈관의 형성으로 이용될 수 있습니다.

전체 배아는 절제 기술을 사용하여 배양 될 수 있지만, 일부 실험은 배아 조직이 문화 전에 해부될 것을 요구합니다. 예를 들어, 신경 조직 개발은 유리 덮개 전표에 절제되고 성장될 수 있습니다. 잠복기 후, 신경 문장으로 알려진 세포의 특정 인구는 조직에서 멀리 이동하는 것을 관찰 할 수있다. 실험 에이전트및 타임랩스 화상 진찰을 가진 처리는 그 때 세포 이주를 통제하는 요인을 시험하기 위하여 이용될 수 있습니다.

당신은 병아리 ex ovo 문화에 대한 JoVE의 가이드를 보았습니다. 이 비디오는 ex ovo 문화의 원리, 전체 노른자와 절제 방법의 기본, 그리고 이러한 기술이 오늘날 실험실에서 사용되는 방법 중 일부를 다루었습니다. 시청해 주셔서 감사합니다!

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