Summary
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脂肪細胞は離散的な拠点に存在し、独自のマイクロ環境の中で多様な役割を果たしています。脂肪細胞の性格と機能の地域的な違いが明らかになるにつれて、デポの標準化された識別と隔離は、フィールドの進歩のために重要です。本明細書では、様々なマウス脂肪デポの切除に関する詳細なプロトコルを提示する。
Transcript
体全体の脂肪の貯蔵所を識別し、解剖するための標準化された方法論は、離散解剖ニッチ内の脂肪細胞の性格および機能の違いを調査するために重要である。この技術の主な利点は、一般的な、あまり研究されていないげっ歯類の脂肪のデポを識別し、切除するための信頼性の高い、正確な方法です。間型BATの同定と分離のために、虹彩は、デポの自然な境界に続く安楽死させたマウスの前皮下組織の下端に沿って水平に切断するために使用する。
組織の自然な境界に従って、デポの横端に沿って2つの垂直切開を行います。鉗子を使用して慎重にデポをひっくり返し、白い脂肪組織内に埋め込まれた蝶の形をした茶色の脂肪組織を明らかにします。その後、周囲のWATから離れてBATを慎重に解剖します。
ダウンストリーム分析のために適切なコンテナに脂肪組織を保管します。後皮下WATの同定と分離のために、マウスを上皮の位置に置き、動物の手足を固定します。鉗子を使用して胸骨の基部の皮膚を持ち上げ、1ミリメートルの皮膚切開を行います。
カットにアイリスハサミの1つのブレードを挿入し、胸骨の基部から始まり、尾の基部に上昇する4〜5センチメートルの中線皮膚切開を行います。次に、最初の垂直切開の上部に2つの1センチメートルの水平切開を行い、正中線から横方向に延びる。鉗子を使用して腹腔から皮膚を慎重に剥がし、脚を使用して皮膚に関連付けられたままにする必要がある後皮下WATを見つける。
伸びた皮膚をピン留めし、鼠径部を横切って後肢の腹側の基部から三角形の鼠径部WATデポを完全に切除する。内臓WATデポの同定と分離のために、鉗子を使用して胸骨の基部にある薄い腹膜空洞壁を持ち上げ、テント組織に1ミリメートルの切開を行います。カットにアイリスハサミの1つのブレードを挿入し、腹膜腔の上部から直腸に垂直切開を4〜5センチメートル下降させる。
垂直切開の上下に正中から横方向に延びる2センチの水平切開を行い、鉗子を使用して腹腔の内容物を露出させる腹膜を剥がします。次に、伸ばした腹膜を解剖パンに固定し、腹腔内に含まれるWATデポを収穫する。内臓性腺WATの同定と分離のために、生殖腺を見つけ、関連する生殖腺WATを持ち上げるために鉗子を使用し、虹彩はさみを使用して慎重に生殖腺からWATを切除する。
腎部外を切除するには、腎臓を見つけ、鉗子を使って腎組織を持ち上げる。腎臓を正中線に引っ張って、ペリネラルと後腹膜の間の明確な分裂を見て、腎臓に直接関連するWATを切除する。次に、WATから腎臓の上にある副腎を除去します.
後腹膜の識別と隔離のために、腎臓を再び正中線に持ち上げ、虹彩はさみを使用して後腹壁から後腹膜WATを慎重に解剖する。膝関節のWATを単離するには、膝の後ろの大窩が上向きに見えるのに注意して、解剖パンに対して膝蓋骨を置く。アイリスはさみを使用して、後肢の付け根から足に皮膚を慎重に取り除きます。
虹彩はさみを使用して、胃頭筋の内側と内側の下の境界でカットを行い、鉗子を使用して筋肉を持ち上げて三角形のポポを明らかにする。その後、自然な組織の境界に沿ってデポを切除するために虹彩はさみを使用してください。ここでは、マウス皮下、茶色、内臓、およびポジタルデポの総解剖学的位置を示す。
皮下、褐色、内臓、ポプタル、構成性、および調節された骨髄脂肪、筋肉内、および眼圧脂肪脱子の組織学的特徴は、標準的なヘマトキシリンおよびエオシン染色プロトコルによって評価することができる。このプロトコルを用いて分離された脂肪組織は、組織学的解析、分子研究、遺伝子およびタンパク質発現解析など、さまざまな実験エンドポイントに使用できます。多様な脂肪の貯蔵所の同定の分野全体の標準化は間違いなく私達の分子および代謝の特徴および地方および系統的病理学的状態へのそれらの相違の貢献についての私達の理解をさらに助ける。
Tags
生物学
問題 149
脂肪細胞
解剖
皮下脂肪組織
内臓脂肪組織
白脂肪組織 (WAT)
褐色脂肪組織 (BAT)
骨髄脂肪組織 (BMAT)
