Medicine
This content is Open Access.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
ויניל כלוריד ודיאטה גבוהה-שומן כמודל לסביבה ואינטראקציה השמנת יתר
Chapters
Summary January 12th, 2020
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
המטרה של פרוטוקול זה הייתה לפתח מודל מוראי של חשיפה לרעילות ברמה נמוכה, שאינה גורמת לפגיעה בכבד הגלויה אלא מקשה על נזקי הכבד הקיימים מראש. פרדיגמה זו מעדיפה על חשיפת החשיפה האנושית ועל השינויים העדינים המתרחשים בחשיפה לריכוזי הרעילות הנחשבים לבטוחים.
Transcript
ויניל כלוריד מחריף את הנזק לכבד שנגרם על ידי גורמים אחרים כגון דיאטה בריכוזים מתחת למגבלות הבטיחות הנוכחיות. לכן, יש להעריך מחדש את פרמטרי השימוש עבור אוכלוסיות ממוצעות. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא משתמשת בפרוטוקול שאיפה כרוני ולא פולשני המחקה באופן הדוק את החשיפה האנושית תוך גרימת מתח מינימלי לחיה.
הדגימו את ההליך יהיו אנה לאנג, פוסט-דוקטורנטית, ורג'ינה שנגלברגר, סטודנטית לתואר שני, שניהם מהמעבדה שלי. שבוע לפני תחילת ניסויי השאיפה, שוקלים את כל בעלי החיים הניסיוניים ומשקללים את כמות המזון התזונתי הנמוך או עתיר השומן שיש לתת לכל כלוב. לספק מזון ומים עד ליביטום, החלפת האוכל הרגיל עבור כל קבוצת חשיפה עם מזון דיאטה דלת או עתירת שומן, לפי הצורך.
לשקול את המזון הנותר בסוף כל יום האכלה ולפקח על העכברים לאורך כל הניסוי כדי להבטיח כי בריאותם של בעלי החיים נשמרת. כדי להקים את מערכת החשיפה לשאיפה של ויניל כלוריד, ודאו שאוויר הדילואנט בתאי הניסוי והבקרה הוא אוויר חלקיקי ביעילות גבוהה ופחמן פעיל מסונן, מיובש ומוסדר לחץ לפני הכניסה למכשירי מדידת הזרימה המתאימים. ודא כי הטמפרטורה והלחות היחסית מנוטרים מתוך תאי הניסוי והבקרה, כי פליטת התא מועברת דרך מסנן HEPA, בדיקה פחמן דו חמצני, ומסנן פחמן פעיל, לפני הכניסה לאזור הפליטה של מכסה המנוע הכימי כדי להבטיח שהעכברים מקבלים אוורור מקובל.
ניתן להשתמש בתוכנה המותאמת אישית כדי לשנות, לנטר ולתרשם את המשתנים הסביבתיים המעניינים במהלך חשיפות לשאיפה. כדי להכין את התא לחשיפה לשאיפה, התחל על ידי כיבוי כל זרימת האוויר בתאי הניסוי והבקרה. פתח כל דלת תא והצב חומר מצעים סופג, צד סופג למעלה, על גבי מחבת excreta.
לאחר מכן, הרטיבו את החומר הסופג כדי לספק רמת לחות נוחה של כ-40%-60% לחות יחסית לאורך כל תקופת החשיפה והגדירו את רמת החשיפה הרצויה של ויניל כלוריד בתא הניסוי. כאשר התאים מוכנים, להעביר את העכברים לכלובים בודדים בתוך מתלי כלוב תא שאיפה, אקראי המיקום של כל עכבר בתוך המדפים מדי יום כדי להבטיח כי כל עכבר נחשף הומוגני בתוך התאים. לאחר מכן, מניחים כל מתלה כלוב לתוך התא המתאים ולסגור את דלתות התא.
כדי לערוך ניסוי חשיפה לשאיפה, אשר כי השסתום של מיכל הדלק ויניל כלוריד נמצא במצב פתוח ולהגדיר את זרימת diluent לתא הניסוי ל 25 ליטר לדקה. ודא כי rotameter בתא הבקרה מוגדר 25 ליטר לדקה ולבדוק כי כל החיישנים עובדים כראוי ומציגים את התוצאות הצפויות הן בתאי הניסוי והן בתאי הבקרה. לאורך כל החשיפה, לפקח ולתזמן את זמן החשיפה, זרימת diluent, זרימת ויניל כלוריד, טמפרטורה, לחות, לחץ בתא, רמת פחמן דו חמצני, וריכוז ויניל כלוריד תיאורטי בתא הניסוי.
ודא שהטמפרטורה והלחות בתא הבקרה מוצגות, גרף ותועדות גם כן. בערך באמצע כל חשיפה, לשבור את קצות הזכוכית על צינור גלאי ויניל כלוריד צינור pretreat ולחבר את הזרימה החוצה קצה של צינור גלאי ויניל כלוריד למשאבת צינור גלאי. השתמש בחתיכת צינור קצרה כדי לחבר את הזרימה בקצה צינור גלאי ויניל כלוריד לזרימה החוצה של הצינור pretreat ולצרף חתיכה קצרה של צינורות לזרימה בסוף pretreat.
הסר תקע מאחד מיציאות הדגימה ליד אזור הנשימה ולחבר את הצינור מהזרימה בקצה הצינור pretreat ליציאת הדגימה. מהמיקום המלא, הרחב את הידית על הבוכנה של משאבת צינור הגלאי למיקום המלא החוצה כדי למשוך 100 מיליליטר של גז שנדגם מהתא לתוך צינור גלאי ויניל כלוריד. לאחר 90 שניות, לדחוף את הידית בחזרה פנימה
לאחר דגימת הגז האחרונה הושגה, להסיר את הצינור מנמל הדגימה של התא ולהרשום מחדש את התקע לתוך הנמל. בדוק את שינוי הצבע בצינור גלאי ויניל כלוריד כדי לברר את ריכוז ויניל כלוריד בתוך התא ולתזמן את קריאת צינור הגלאי להשוואה לערך התיאורטי. אם מתרחשות בעיות כלשהן במהלך החשיפה, הגדר את זרימת ויניל כלוריד לאפס ולהגדיל את זרימת diluent לערך המרבי שלה כדי לטהר במהירות את התא.
לאחר שמשך החשיפה יושג, התוכנה תכבה באופן אוטומטי את זרימת ויניל כלוריד. טיימר הבטיחות של 15 דקות יתחיל לספור את משך הזמן לתא הניסוי כדי לנקות את הויניל כלוריד. ברגע שזה בטוח להסיר את בעלי החיים, לחץ על אישור.
בסוף תקופת החשיפה, להפוך את שסתום מיכל גז ויניל כלוריד stopcock למיקום סגור ולכבות את כל זרימת האוויר בתא החשיפה. סובבו את הרוטמטר עד שאף אוויר לא יזרום דרך תא הבקרה ותוציאו את הדלת מכל תא. מוציאים את מתלי הכלובים מהתאיים ומעבירים את העכברים בחזרה לכלובי הבית שלהם מתחת למכסה המנוע של זרימה למינארית.
לאחר מכן, יש להשליך כל פסולת ממחבת הפרשה בהתאם לתקנות הבריאות והבטיחות המוסדיות ולנקות את דלתות התא, המחבת, מתלי החשיפה והתא. כאן מוצג משקל הגוף השבועי וצריכת המזון הדו-שבועית של ניסוי בן 12 שבועות. כל העכברים עלו במשקל במהלך המחקר הזה.
עם זאת, בעוד העכברים בקבוצות דיאטה עתירת שומן עלו במשקל רב יותר בהשוואה לעכברים בקבוצות דיאטה דלת שומן, העכברים שנחשפו ויניל כלוריד לא לעלות במשקל יותר מאשר העכברים בקבוצות הבקרה בהתאמה. גם צריכת המזון לא הייתה שונה בין קבוצות. בנציגים אלה photomicrographs של H&E חלקים בכבד מוכתם, ויניל כלוריד גרם שום שינויים פתולוגיים גלד בקבוצת דיאטה דלת שומן.
תזונה עתירת שומן האכלה מוגברת באופן משמעותי סטאטוזיס, הוחמר עוד יותר על ידי חשיפה ויניל כלוריד. יתר על כן, חשיפה ויניל כלוריד בקבוצת דיאטה עתירת שומן הביא כמה מוקדים דלקתיים. בבעלי חיים דיאטה דלת שומן, ויניל כלוריד לא להגדיל את רמות transaminase, בעוד דיאטה עתירת שומן לבד מעט גדל ביטוי transaminase, עם שיפור משמעותי של אפקט זה נצפתה בקבוצת דיאטה עתירת שומן חשוף ויניל כלוריד.
יתר על כן, דיאטה עתירת שומן הגדילה באופן משמעותי את יחסי הכבד למשקל הגוף, אם כי ויניל כלוריד לא השפיע באופן משמעותי על אפקט זה. בעת יישום פרוטוקול זה, תמיד לטפל כי אמצעי הבטיחות המתאימים ננקטים, כך חשיפה בשוגג ויניל כלוריד על ידי בני אדם נמנע. הליך זה יכול לענות על שאלות לגבי השפעות קצרות טווח, ארוכות טווח ומצטברות של השפעת חשיפה ויניל כלוריד על בריאות בעלי חיים, רווחה, ונזק לאיברים.
מחקרים אלה משפיעים על תחום הערכת הסיכונים הסביבתיים והתעסוקתיים שלנו. לדוגמה, הקבוצה שלנו חוקרת כעת את האינטראקציות המקניסטיות בין ויניל כלוריד לתואטה.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
