Chemistry
This content is Free Access.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Kvantitativ 31P NMR-analys av ligniner och tanniner
Chapters
Summary August 2nd, 2021
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
31 (31) P NMR är ett kraftfullt verktyg för strukturell belysning av polyfenoler. Detta snabba, enkla, exakta, kvantitativa och mycket reproducerbara analytiska förfarande, som möjliggör kvantifiering och differentiering av de olika typerna av hydroxy-, fenol- och karboxylgrupper i ligniner och tanniner har nu blivit ett rutinmässigt analysverktyg.
Transcript
Kvantitativ fosfor NMR representerar ett av de viktigaste genombrotten inom lignin- och tanninanalyskemi under de senaste tre decennierna. Denna teknik erbjuder snabb, tillförlitlig och kvantitativ information för de olika hydroxy-gruppen i provet. Dessa NMR-metoder har ett enormt värde i att förstå strukturen hos lignaner och tanniner.
Det har också tillämpats på en mängd andra system som har reaktiva hydroxylgrupper. Börja med att förbehandling 100 milligram lignin eller tannin prov genom att torka över natten i en vakuumugn vid 40 grader Celsius. Efter torkning, överför snabbt provet till en vattenfri kalciumsulfatdackator tills den når rumstemperatur.
För att förbereda provet för NMR-spektroskopi, väg noggrant cirka 30 milligram av provet i en två milliliterflaska utrustad med en omrörningsstång. Tillsätt sedan 500 mikroliter av den nyberedda lösningslösningen till provflaskan och försegla injektionsflaskan med ett lock. Tillsätt 100 mikroliter av den interna standardlösningen till provflaskan med hjälp av en mikropipett och rör sedan om den resulterande dispersionen magnetiskt vid 500 rotationer per minut.
När provet är helt upplöst överför du 100 mikroliter tetramethyl dioxyfosfolan eller TMDP till provlösningen medan du arbetar under huven och förseglar provlösningen innan provet placeras för kraftig magnetisk omrörning. Vid denna tidpunkt uppträder den angivna reaktionen på lignin- och tanninproverna. Använd en Pasteur-pipett och överför provlösningen till ett NMR-rör för analysen.
Om en gul fällning observeras i provet, upprepa proceduren genom att se till att all eventuell fuktförorening undviks. Ladda provröret i NMR-instrumentet som är utrustat med en bredbandssond och ställ in försöksparametrarna. Ställ in frekvensen i spektrometern med hjälp av resonansfrekvensen för avuterated kloroform.
Shim provet och finjustera spektrometern innan förvärvet påbörjas. Börja bearbeta rådata från P31 NMR-spektroskopi genom att utföra Fourier-omvandling. Justera fas för manuell faskorrigering genom att expandera bearbetningsfliken och välja faskorrigering och manuell korrigering.
Korrigera baslinjen manuellt genom att noggrant ange noll punkter efter att du har klickat på bearbetning och valt baslinje- och flerpunktsbaslinjekorrigering. För signalkalibrering ställer du in signalen för det fosforylerade vattnet till det kemiska skiftvärdet 132,2 delar per miljon genom att öppna analysfliken och välj sedan referens på referensfliken. Öppna integralen i analysmenyn för signalintegration.
För att normalisera integrationen ställer du in den interna standarden på 1,0 genom att klicka på toppen för att välja redigera integral och ange värde 1,00 på den normaliserade fliken och sedan utföra spektrumintegration enligt de kemiska skiften som rapporteras i manuskriptet. Använd ekvationen för att beräkna molkoncentrationen av intern standardlösning, eller IS, lösning och använd det beräknade värdet för att uppskatta motsvarande mängd av den specifika signalen per gram av provet. Spektrum kvantifiering av olika hydroxy grupper i en barrved hantverk lignin härlett med TMDP registrerades med 300 megahertz och 700 megahertz NMR spektrometer.
I NMR-spektrat upptäcktes skarpa och starka toppar vid 144 och 132 PPM på grund av den interna standarden respektive hydroxyleringen av TMD. De olika signalerna från hydroxy grupper var uppenbart i alla kvantitativa P31 NMR spektra av ligniner. I ett kvantitativt P31 NMR spektrum av ett tannin prov härleds med hjälp av TMDP, var en karakteristisk signal från de olika alifatiska OH pyrogallol och katekol enheter väl synliga.
Jämförelsen mellan NMR spektrum av lignin före och efter oxidation registrerades med hjälp av en 300 megahertz NMR spektrometer som visar minskningen av intensiteten i toppar av hydroxy grupper. De avgörande stegen är de som rör torkning och viktning av provet och de NMR-bearbetningsparametrar som ska användas. Och viktigast av allt, fasningen av det erhållna spektrat.
När denna metod är i kombination med tvådimensionell NMR- och gelpermeationskromatografi kan en mycket detaljerad bild av naturliga polyfenoler dyka upp, vilket ger oöverträffad strukturell information och nya insikter.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
