Neuroscience
This content is Free Access.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
بناء وتنفيذ صفائف الألياف الكربونية Microelectrode للتسجيلات المزمنة والحادة في فيفو
Chapters
Summary
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
يصف هذا البروتوكول إجراء لبناء صفائف ألياف الكربون microelectrode للتسجيلات المزمنة والحادة في الفيزيولوجيا الكهربية في الجسم الحي في الماوس(Mus musculus)والنمس(موستيلا putorius furo) من مناطق الدماغ متعددة. كل خطوة، بعد شراء ألياف الكربون الخام لزرع صفيف microelectrode، ويرد وصف بالتفصيل، مع التركيز على بناء صفيف microelectrode.
Transcript
بناء مقاعد البدلاء أعلى وصفها هنا هي واحدة من عدد قليل من التكنولوجيات المتاحة حاليا القطب التي تسمح التسجيلات من مجموعات كثيفة من الخلايا العصبية ومتابعة العديد من تلك الخلايا العصبية مع مرور الوقت. ألياف الكربون microelectrode صفائف غير مكلفة لبناء. إنها صغيرة، متوافقة بيولوجيا، وتتحرك مع الدماغ، مما يسمح بتسجيلات صحية ومستقرة.
ألياف الكربون رقيقة للغاية وفي البداية ، من الصعب جدا رؤيتها. ومع ذلك ، بعد بضعة أيام من العمل معهم ، يصبح من الأسهل التلاعب بهم. لتبدأ، وضع قطعة من الشريط على الوجهين على الجانبين طويلة من كاسيت، محاذاة حافة الشريط مع الحافة الداخلية للكسيت.
لإعداد أداة التلاعب بألياف الكربون، قم بلف قطعة صغيرة من الأفلام اللاصقة حول إبرة قياس 30 لتشكيل نقطة حادة ولكنها مرنة مع الفيلم. بعد ذلك، فصل الألياف الفردية من حزمة المخبوزات ووضعها بالتوازي مع الجانب القصير من كاسيت الحفاظ على مسافة 2-3 ملليمتر. بعد ضمان تركيب 20 إلى 30 ألياف على كل كاسيت، ختم الألياف في مكان عن طريق وضع شريط واضح على الشريط عصا مزدوجة، ووضع أشرطة مملوءة في حامل كاسيت.
لتجميع مصفوفة microelectrode ألياف الكربون، بدء تغذية كل سلك التأريض من خلال القناة المناسبة على نهاية موصل من الرقصة وتستمر حتى طرفي متساوية في الطول. ثم لفها معا لتأمينها على الرقصة. تطبيق الأشعة فوق البنفسجية الشفاء الاسمنت الأسنان لتأمين السلك مع ضمان عدم الحصول على أي أسمنت الأسنان داخل قناة مفتوحة من حيث يتم تغذية السلك من خلال.
استخدام عصا علاج الأشعة فوق البنفسجية لعلاج الاسمنت الأسنان لمدة 20 ثانية ومحاذاة الرقصة ونذير مثل أن نهاية الموصل، والحوض، وطرف القمع مرئية. بعد ذلك ، وجه الرقصة بحيث يشير القمع بعيدا عن المستخدم وينتهي الموصل في مواجهة المستخدم. ثم الشريحة تلميح إبرة قياس 25 ضد كاسيت في موقع إزالة الألياف المحتملة وقطع ألياف الكربون واحد من كاسيت.
عقد قطع حديثا نهاية خالية من الألياف باستخدام أداة ألياف الكربون واستخدام الإبرة، وقطع الطرف الآخر من الألياف بعيدا عن كاسيت. ثم مرة أخرى استخدام أداة ألياف الكربون لالتقاط ألياف الكربون بحيث نهاية واحدة حوالي سنتيمتر واحد في الطول من الأداة. استخدم أداة ألياف الكربون المرفقة بالألياف لإطعام الطرف الأقصر من الألياف من خلال قطعة القمع من الحوض الأوسط للجيج.
الاستمرار في تغذية الألياف من خلال قمع الرقصة حتى معظم طول الألياف من خلال. تغذية الجزء الخلفي من الألياف من خلال قناة متاحة باستخدام أداة ألياف الكربون. الاستمرار في تغذية من خلال الظهر حتى حوالي خمسة ملليمترات من الألياف هو التمسك بها أو قطع لحجم إذا لزم الأمر.
لإزالة العزل في نهاية الموصل، استخدم أخف وزنا عجلة شرارة القياسية لتمرير اللهب على الألياف المكشوفة، ثم تغذية الألياف الملتهبة من خلال الرقصة بحيث جزء الألياف الملتهبة الآن داخل القناة مع ضمان عدم وجود ألياف تخرج من الجزء الخلفي من الرقصة. تطبيق الأشعة فوق البنفسجية الشفاء أسمنت الأسنان إلى ألياف حوض الرقصة لملء الحوض بأكمله، وتغطي فتحات كل من القنوات والقمع. بعد إزالة الرقصة من الرذيلة وتوجيه الرقصة بحيث يشير القمع لأسفل ، قم بتأمين الرقصة مع نهاية الموصل التي تشير إلى الأعلى.
ملء الإبرة مع طباعة الفضة وإدراج الإبرة بعناية في قناة واحدة حتى توقفت عن طريق الاسمنت الأسنان. لملء القناة بالطلاء، قم بالاكتئاب ببطء الحقنة أثناء إزالة الإبرة من القناة، ثم تراجع قضيب طرف القطن في الطلاء أرق وتنظيف قاعدة سطح الرقصة من أي الطلاء. الآن إدراج موصل مرحلة الرأس في الاتجاه الصحيح عن طريق محاذاة دبابيس مع القنوات.
مرة واحدة موصل مرحلة الرأس يجلس على التوالي، تستقيم، ومسح إلى الرقصة ممكن، وتأمين موصل مرحلة الرأس إلى الرقصة عن طريق تطبيق أسمنت الأسنان على طول الحافة حيث موصل مرحلة الرأس يلتقي الرقصة، ثم علاج الأشعة فوق البنفسجية لمدة 20 ثانية. من أجل قطع طرف القطب إلى الطول المطلوب، خفض القطب إلى كوب من الماء المقطر أو deionized حتى يتم غمر طرف القمع بالكامل وعقد طبيعية على السطح. الآن جلب ألياف الكربون الفردية معا عن طريق إزالة القطب من الماء.
وضع القطب بحيث الألياف وضع دافق على سطح الدليل وقطع الألياف إلى الطول المطلوب مع مشرط في حركة المتداول، ثم إرفاق القطب إلى اختبار المعاوقة متعددة الإلكترويد باستخدام محول المناسبة واختبار المعاوقة. الآن خفض طرف القطب حوالي ملليمترين في أنبوب الطرد المركزي الدقيق من 0.1 برنامج تلفزيوني الضرس، وإدراج سلك التأريض في أنبوب الطرد المركزي الدقيق. للحد من مقاومة طرف القطب، حقن تيار إيجابي مع السعة والمدة المختارة، ومن ثم شطف الألياف في الماء المقطر أو deionized لتنظيف.
بعد ذلك ، لإجراء الطلاء الكهربائي في محلول الطلاء الذهبي ، قم بخفض طرف حزمة القطب الكهربائي حوالي ملليمترين في أنبوب الطرد الدقيق في خليط الطلاء وأدخل سلك التأريض في أنبوب الطرد المركزي الدقيق. ثم تعيين المعلمات المناسبة للكهربائية. شطف الألياف جيدا مع الماء deionized أو المقطر بعد الكهربائي.
وأظهرت صورة SEM التمثيلية لألياف الكربون المعدة محلولا طلاء ذهبيا يتركز عند الطرف. أدى الألياف الكهربائي في الذهب في انخفاض المعاوقات مناسبة للتسجيل. وأظهرت قيم المعاوقة من 300 قناة بعد القطع الأولي، والحقن الحالي الإيجابي، والصعق الكهربائي انخفاض قيم المعاوقة بعد كل خطوة معالجة.
أنتجت مدة الطلاء الكهربائي الذهب المعتدلة الودائع الصغيرة والمدورة على نصائح حزمة ألياف الكربون. بالإضافة إلى ذلك ، تم تحليل النشاط الكهربي المستقر من 64 قناة في القشرة الرجعية لفأر ذكر بالغ يتصرف بحرية. أظهرت النتائج اتساق جودة التسجيل ، واكتشاف وحدة واحدة قوية ، والاتساق مع مرور الوقت كما يتضح من الأشكال الموجية للارتفاع غير العادي ، وأرضية الضوضاء المستقرة.
أيضا، أظهرت الجهد الخام تتبع 11 شهرا بعد زرع إمكانات حقل محلي قوي. كما يظهر هنا مثال تمثيلي على تسجيل صفيف دقيق حاد من ألياف الكربون من 16 قناة تم الحصول عليه من القشرة البصرية الأولية لنمس أنثى بالغة. تسمح صفائف الألياف الكربونية microelectrode بالتسجيل القصير الأجل أو المزمن للخلايا العصبية القريبة في الدماغ على مدى فترات طويلة من الزمن ، وهو أمر ضروري لفهم الدوائر العصبية.
Tags
علم الأعصاب، العدد 174،Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
