Immunology and Infection
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Drosophila melanogaster Larva Injection Protocol
Chapters
Summary October 19th, 2021
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Drosophila melanogaster volwassen vliegen zijn uitgebreid gebruikt als modelorganismen om de moleculaire mechanismen te onderzoeken die ten grondslag liggen aan antimicrobiële aangeboren immuunresponsen van de gastheer en microbiële infectiestrategieën. Om het D. melanogaster larvestadium als aanvullend of alternatief modelsysteem te promoten, wordt een larvale injectietechniek beschreven.
Transcript
Dit protocol pakt de moeilijkheden en uitdagingen met micro-injecterende larven aan door een nauwkeurige methode te beschrijven die het gebruik van Drosophila melanogaster-larve mogelijk maakt als model voor verschillende immuun- en moleculaire studies. Dit is een eenvoudige injectietechniek die een efficiënte, kosteneffectieve en snelle methode biedt om herhaaldelijk een verscheidenheid aan stoffen op een uniforme manier af te leveren, wat consistente en betrouwbare resultaten mogelijk maakt. Begin met het selecteren van larven uit het derde instar-stadium en was ze met de oplossing van Ringer in een kleine petrischaal.
Doe een filtreerpapier in een petrischaaltje en bevochtig het met 5 ml Ringer's solution. Plaats vervolgens de larven op het filterpapier. Bereid haarvaten voor met behulp van 3,5"-glazen capillaire buisjes in een micropipette-trekker.
Open het glazen capillair met behulp van een rechte gekartelde middenpuntstang. Vul het open capillair met minerale olie met een plastic wegwerpspuit. Werp vervolgens de olie uit de capillaire buis met een nanoliter-injector.
Vul het capillair met het gewenste bacteriële preparaat voor injectie. Breng de verdoofde larven over op een filterpapier bevochtigd met ringer's oplossing. Oefen met een tang stevige druk uit op de dorsale kant van het achterste uiteinde van de larven, waar de tracheale spiracles zichtbaar zijn.
Steek vervolgens de naald horizontaal in, naar het achterste uiteinde van de larven, en injecteer de bacteriële voorraden. Verwijder de tang om morsen van hemolymfe of darm te voorkomen. Trek vervolgens de naald terug die eerder in larven is ingebracht.
Infecteer 20 larven voor elke experimentele aandoening. Breng met een penseel de geïnjecteerde larven voorzichtig over op een apart vochtig filterpapier. Voeg de oplossing van Ringer indien nodig toe om uitdroging te voorkomen.
Incubateer de petrischaal in een couveuse bij 25 C.Drosophila melanogaster larven geïnfecteerd met Photorhabdus asymbiotica vertoonden een overlevingspercentage van 57% gedurende 24 uur na injectie, terwijl larven geïnjecteerd met Escherichia coli een overlevingspercentage van 85% vertoonden op hetzelfde moment. Het belang van deze methode is dat de naald ongeveer parallel aan de larve wordt gehouden. De druk die wordt uitgeoefend om de larve vast te houden is zeer gering, wat de kans op hemolymfelekkage, dodelijk letsel of onvoldoende afgifte van de gewenste stof vermindert.
Deze techniek kan met oefening worden geperfectioneerd.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
