Ons doel is om nieuwe optische merkers en technieken te ontwikkelen voor de detectie van eiwitaggregaten, amyloïden genaamd. Ze zijn betrokken bij een reeks ziekten, zoals de ziekte van Alzheimer en diabetes type twee. Dus om deze ziekten te genezen, hebben we technieken nodig om amyloïden te visualiseren.
We hebben aangetoond dat twee-fotonmicroscopie kan worden gebruikt om de oriëntatie van amyloïde fibrillen in amyloïde superstructuren te detecteren. Het kan niet alleen worden bereikt met behulp van amyloïde-specifieke kleurstoffen, maar ook door gebruik te maken van de autofluorescentie van amyloïden. Aangezien onze techniek werkt op niet-lineaire optische fenomenen, kan het een verminderde hoekfotoselectie bereiken, de axiale resolutie, de lagere lichtverstrooiing, de lagere fototoxiciteit en een diepere monsterpenetratie verbeteren in vergelijking met de microscopische techniek met fluorescentie met één foton.
Polarisatiegevoelige twee-fotonfluorescentiemicroscopie is een veelbelovend hulpmiddel om de interne structuur van verschillende complexe biologische structuren in beeld te brengen, niet alleen eiwitaggregaten, maar ook DNA-blaasjes en lipidemembranen.
Summary
Automatically generated
Dit artikel beschrijft hoe polarisatiegevoelige twee-fotonmicroscopie kan worden toegepast om de lokale organisatie binnen labelvrije amyloïde superstructuren-sferulieten te karakteriseren. Het beschrijft ook hoe het monster moet worden voorbereid en gemeten, de vereiste opstelling moet worden samengesteld en de gegevens moeten worden geanalyseerd om informatie te verkrijgen over de lokale organisatie van amyloïde fibrillen.
Lipok, M., Obstarczyk, P., Olesiak-Bańska, J. Polarization-Sensitive Two-Photon Microscopy for a Label-Free Amyloid Structural Characterization. J. Vis. Exp. (199), e65670, doi:10.3791/65670 (2023).