Notre objectif est de développer de nouveaux marqueurs optiques et de nouvelles techniques pour la détection d’agrégats de protéines appelés amyloïdes. Ils sont impliqués dans une série de maladies telles que la maladie d’Alzheimer et le diabète de type 2. Donc, pour guérir ces maladies, nous avons besoin de techniques pour visualiser les amyloïdes.
Nous avons démontré que la microscopie à deux photons peut être utilisée pour détecter l’orientation des fibrilles amyloïdes à l’intérieur des superstructures amyloïdes. Il peut être réalisé non seulement en utilisant des colorants spécifiques à l’amyloïde, mais aussi en utilisant l’autofluorescence des amyloïdes. Étant donné que notre technique fonctionne sur des phénomènes optiques non linéaires, elle permet d’obtenir une photosélection angulaire réduite, d’améliorer la résolution axiale, de réduire la diffusion de la lumière, de réduire la phototoxicité et de pénétrer plus profondément dans l’échantillon par rapport à la technique microscopique à fluorescence à un photon.
La microscopie à fluorescence à deux photons sensible à la polarisation est un outil prometteur pour imager la structure interne de diverses structures biologiques complexes, non seulement des agrégats de protéines, mais aussi des vésicules d’ADN et des membranes lipidiques.
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Cet article décrit comment la microscopie à deux photons sensible à la polarisation pourrait être appliquée pour caractériser l’organisation locale au sein de superstructures-sphérolites amyloïdes sans marquage. Il décrit également comment préparer et mesurer l’échantillon, assembler la configuration requise et analyser les données pour obtenir des informations sur l’organisation locale des fibrilles amyloïdes.
Lipok, M., Obstarczyk, P., Olesiak-Bańska, J. Polarization-Sensitive Two-Photon Microscopy for a Label-Free Amyloid Structural Characterization. J. Vis. Exp. (199), e65670, doi:10.3791/65670 (2023).