Unser Ziel ist es, neue optische Marker und Techniken für den Nachweis von Proteinaggregaten, sogenannten Amyloiden, zu entwickeln. Sie sind an einer Reihe von Krankheiten wie Alzheimer und Typ-2-Diabetes beteiligt. Um diese Krankheiten zu heilen, brauchen wir also Techniken, um Amyloide sichtbar zu machen.
Wir haben gezeigt, dass die Zwei-Photonen-Mikroskopie verwendet werden kann, um die Orientierung von Amyloidfibrillen in Amyloid-Überstrukturen zu detektieren. Dies kann nicht nur durch den Einsatz von Amyloid-spezifischen Farbstoffen, sondern auch durch die Nutzung der Autofluoreszenz von Amyloiden erreicht werden. Da unsere Technik mit nichtlinearen optischen Phänomenen arbeitet, kann sie im Vergleich zur Ein-Photonen-Fluoreszenzmikroskopie eine reduzierte Winkel-Photoselektion, eine verbesserte axiale Auflösung, eine geringere Lichtstreuung, eine geringere Phototoxizität und eine tiefere Probendurchdringung erreichen.
Die polarisationsempfindliche Zwei-Photonen-Fluoreszenzmikroskopie ist ein vielversprechendes Werkzeug, um die innere Struktur verschiedener komplexer biologischer Strukturen abzubilden, nicht nur Proteinaggregate, sondern auch DNA-Vesikel und Lipidmembranen.
Summary
Automatically generated
In dieser Arbeit wird beschrieben, wie polarisationsempfindliche Zwei-Photonen-Mikroskopie angewendet werden kann, um die lokale Organisation in markierungsfreien Amyloid-Superstrukturen-Sphäroliten zu charakterisieren. Außerdem wird beschrieben, wie die Probe vorbereitet und gemessen, der erforderliche Aufbau zusammengestellt und die Daten analysiert werden, um Informationen über die lokale Organisation von Amyloidfibrillen zu erhalten.
Lipok, M., Obstarczyk, P., Olesiak-Bańska, J. Polarization-Sensitive Two-Photon Microscopy for a Label-Free Amyloid Structural Characterization. J. Vis. Exp. (199), e65670, doi:10.3791/65670 (2023).