Gibberella zeae Ascospore ייצור אוסף לניסויים microarray.

Published 11/30/2006
0 Comments
  CITE THIS  SHARE 
Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





By clicking "Submit", you agree to our policies.

 

Summary

כדי לחקור את תהליכי ההתפתחות של ascospores ב Gibberella zeae, נוהל איסוף בתנאים סטריליים מצולם על מנת להפיק את הרמה הגבוהה ביותר של מידע עבור תיאור פרוטוקול. זה אמור להקל על שחזור של הניסוי, היבט חיוני כאשר ביטוי מלא הגנום בדיקות פרופיל מיושמים.

Cite this Article

Copy Citation

Pasquali, M., Kistler, C. Gibberella zeae Ascospore Production and Collection for Microarray Experiments.. J. Vis. Exp. (1), e115, doi:10.3791/115 (2006).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Fusarium graminearum שוובה (teleomorph Gibberella zeae) הוא צמח הפתוגן גורם המחלה גלד על חיטה ושעורה המפחיתה להניב יבול ואיכות תבואה. פ graminearum גם גורם גבעול והאוזן נרקב של תירס הוא מפיק של mycotoxins כגון trichothecenes כי לזהם תבואה מזיקים לבני אדם ובעלי חיים (ו Kistler Goswami, 2004). הפטרייה מייצרת שני סוגים של נבגים. Ascospores, propagules הנובע רבייה מינית, הן המקור העיקרי של הזיהום העיקרי. נבגים אלה הם משוחררים בכוח perithecia בוגרת מפוזר על ידי הרוח (Francl et al 1999). זיהומים משניים נגרמים בעיקר על ידי macroconidia אשר מיוצרים באמצעות מינית על פני הצמח. כדי לחקור את תהליכי ההתפתחות של ascospores ב פטרייה זו, נוהל איסוף שלהם כמות גדולה בתנאים סטריליים נדרש. פרוטוקול שלנו צולם על מנת להפיק את הרמה הגבוהה ביותר של מידע על ההבנה ועל שחזור; היבטים מכריעים כאשר הגן מלא הגנום פרופילי הביטוי נוצרות ולפרש. בפרט, השתנות של נביטה ascospore והפעילות הביולוגית תלויים מניפולציה מראש של החומר. השימוש וידאו המתעדים כל צעד בייצור ascospore מוצע על מנת להגביר את הסטנדרטיזציה, העומד בדרישות המחמירות לניתוח microarray ההליך דורש רק ציוד מעבדה סטנדרטי. השלבים מוצגים על מנת למנוע זיהום זמן לטובת סינכרון של ascospores.

Protocol

  1. אגר גזר (Klittich ולסלי, 1988) הוכן 9 ס"מ קוטר צלחות פטרי.
  2. קוביה 2 מ"מ של אגר המכיל תפטיר טרי גדל על אגר דקסטרוז תפוחי אדמה יושמה למרכז צלחת פטרי כל.
  3. תרבויות גדלו במהירות של 25 ° C ו -12 שעות photoperiod עבור 96 שעות.
  4. אחת מ"ל Tween של 2.5% מימית 60 היה מוחל על פני השטח של תרבות (שביל משותף, 2000) המפוזרים על פני התרבות עם מוט פלסטיק, על ידי לחיצה בעדינות.
  5. הירי Perithecia ascospores פיתחה 7-10 ימים לאחר הטיפול לזירוז כאשר שמר בסביבת לחות גבוהה של 25 ° C עם photoperiod זהה.
  6. אוסף Spore מבוצע על ידי שינוי מכסה צלחת פטרי, עוזב perithecia לירות לזמן מוגבל (למשל 12 שעות) בחושך.
  7. מים סטריליים מתווסף המכסה, השעיית ascospores בעדינות על ידי העברת מים על פני השטח.
  8. Ascospores נאספים סטרילי צינורות פלקון, שטף ומשמש לניתוח נוסף.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

הפרוטוקול המובא כאן מתבסס על ההליכים הקודמים המשמש לייצור perithecial עבור Fusarium spp. (Klittich ולסלי, 1988; שביל משותף, 2000). התקינה של ההליך שבו כמויות גדולות של ascospores (מספיק לצורך ניתוח microarray) נוצרו היה חיוני עבור שחזור של הניסוי. זה כבר דווח כי ההבדלים גורמים סביבתיים, גיל המצע יכול לשנות את אופיו הביולוגי של ascospores (Beyer ו Verreet, 2005). לכן השימוש וידאו עשויה לסמן הפרטים הקטנים בדרך נבגים מיוצרים שנאספו שאמור להקל על שחזור. בפרט את הווידאו של ההליך אמור לשפר את רמת סטנדרטיזציה בין מעבדות להקל את ההשוואה של כל המחקרים שעתוק הגנום הדורשים ייצור ascospore. כמות רנ"א הדרושים הליך הניסוי היא גבוהה יחסית ולכן כמות גדולה של צלחת פטרי צריך להיות מעובד באופן סינכרוני. וידאו הוא כלי מתאים במיוחד כאשר יש צורך לבצע מחקרים הגנום כולו תעתיק על חומר ביולוגי חדש, קביעת תקן עבור ניסויים עתידיים.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgements

המחברים מודים קארן הילברן לקבלת תמיכה טכנית מעולה. פרויקט זה מומן על ידי היוזמה הלאומית למחקר של החינוך שיתופית USDA המחקר, המדינה שירות ההדרכה והמקצוע (פרס # 2004-35604-14327). מטיאס Pasquali נתמך על ידי ברנקו וייס המלגה. חיטה ארה"ב גלד יוזמת ברלי הוא גם הודה על התמיכה המתמשכת של המחקר.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Petri dish 9 cm diameter Tool
Tween 60 (20%) Reagent
Carrot agar (20% w/v organic carrots and 1.5% w/v agar) Reagent

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Beyer, M., Verreet, J. A. Germination of Gibberella zeae ascospores as affected by age of spores after discharge and environmental factors. (2005).
  2. Francl, L., Shaner, G., Bergstrom, G., Gilbert, J., Pedersen, W., Dill-Macky, R., Sweets, L., Corwin, B., Jin, Y., Gallenberg, D., Wiersma, J. Daily inoculum levels of Gibberella zeae on wheat spikes. Plant Disease 83,662-666. (1999).
  3. Goswami, R. S., Kistler, H. C. Heading for disaster, Fusarium graminearum on cereal crops. Molecular Plant Pathology 5,515–525. (2004).
  4. Klittich, C. J. R., Leslie, J. F. Nitrate reduction mutants in Fusarium moniliforme (Gibberella fujikuroi. Genetics. 118, 417-2013 (1998).
  5. Trail, F., Common, R. Perithecium development in Gibberella zeae, a light microscopy study. (2000).
  6. Tschantz, A. T., Horst, R. L., Nelson, P. E. A substrate for uniform production of perithecia in Gibberella zeae. Mycologia. 67-1101 (1975).
  7. Tschanz, A. T., Horst, R. K., Nelson, P. E. The effect of environment on sexual reproduction of Gibberella zeae. (1976).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Video Stats