Procedimiento murino Trasplante Renal

El procedimiento de trasplante de riñón de ratón comienza con la extracción de un órgano de un donante en el que se extrae el riñón izquierdo del ratón donante y se almacena en hielo. El riñón derecho se extrae del ratón receptor para dejar espacio para el riñón del donante. A continuación, el riñón del donante se extrae del hielo y se trasplanta al ratón receptor.

Se permite que el ratón se recupere durante cuatro días antes de que se extirpe el riñón nativo restante. Después de siete días, los niveles de creatinina se controlan mediante un analizador clínico portátil I STAT para evaluar la función del injerto. Hola, soy Sarah Heimer del laboratorio del Dr. Greg Hadley y del Departamento de Cirugía de Trasplantes de la Universidad Estatal de Ohio.

Hoy te vamos a mostrar un procedimiento para el trasplante renal en el ratón. La cirugía de trasplante renal que verá hoy será realizada por nuestro neurocirujano experto residente, Jing Wing. Utilice este procedimiento en nuestro laboratorio para estudiar los eventos inmunológicos del rechazo del trasplante, así como las estrategias para evitar que ocurra el rechazo.

Así que comencemos. Para comenzar la extracción del órgano del donante, se realiza un pinzamiento de remolque para asegurar que el animal esté completamente anestesiado trabajando dentro de un campo estéril y utilizando instrumentos esterilizados, se realiza una incisión en la línea media del ratón anestesiado desde el esternón hasta el pubis y se expone el riñón izquierdo moviendo el intestino lateralmente hacia el lado derecho para realizar la perfusión renal del donante. TY cuatro ocho oh suturas de seda alrededor de la aorta y la vena cava inferior por debajo y por encima de la arteria y la vena renal.

Perfundido lentamente in situ con solución fría de ringers heparinizados de lactato a través de la aorta infrarrenal. Aísle el riñón izquierdo ligando y dividiendo los vasos suprarrenales y testiculares de algunas ramas lumbares con una sutura de seda de ocho oh. A continuación, movilice la unión de la aorta y la vena cava inferior con la arteria renal izquierda y la vena atando cuatro suturas de seda alrededor de la aorta y la vena cava inferior por debajo y por encima de la arteria y la vena renal.

Para minimizar el sangrado, primero ligar la aorta por debajo del vaso renal. A continuación, diseccionar el uréter izquierdo libre desde el hilio renal hasta la vejiga. Exponga el uréter de la unión de la vesícula mediante la retracción de la coda en la cúpula de la vejiga.

Asegúrese de evitar el uréter derecho, extirpe un pequeño parche elíptico de la vejiga que contiene la unión de la vesícula ureteral izquierda. Este parche se utilizará para la reconstrucción urinaria a través de una anastomosis de vejiga a vejiga. A continuación, ligar la aorta por encima de la arteria y la vena renal.

Se perfundió lentamente la balsa in situ con solución fría de ringers heparinizados de lactato a través de la aorta infrarrenal. Divida la aorta oblicuamente aproximadamente dos milímetros por debajo de la arteria renal. Finalmente, extirpe el riñón y su irrigación vascular con el uréter unido al parche vesical en bloque.

El riñón debe almacenarse en la solución de lactato de Ringer en hielo hasta que esté listo para ser injertado en el receptor huésped y sacrificar al ratón donante por luxación cervical bajo anestesia. Como se demostró anteriormente, el trasplante del receptor se inicia con un pellizco para asegurarse de que el animal esté completamente anestesiado. Para comenzar la cirugía, haga una incisión en la línea media, cubra el intestino con una gasa húmeda y retírelo cuidadosamente hacia el lado izquierdo.

Para completar con éxito este trasplante renal, se debe realizar una anastomosis entre el manguito aórtico del donante y la aorta del receptor. La vena renal del donante a la vena cava inferior del receptor y el parche vesical del donante a la ligadura de la vejiga del receptor. El uréter, la arteria y la vena renal derecha.

Extirpar el riñón después de ligar. Las ramas lumbares aíslan cuidadosamente y sujetan de forma cruzada la aorta infrarrenal y la vena cava inferior con dos pinzas microvasculares de cuatro milímetros. Coloque una sutura de nylon de 10 oh a través de un espesor completo de aorta y retraiga para hacer una otomía de aorta elíptica con un solo corte de aproximadamente un quinto del diámetro del vaso.

A continuación, realiza una venotomía longitudinal perforando la vena cava inferior con una aguja de calibre 30 y extiéndela adecuadamente con unas microtijeras. Irrigar tanto la aorta como la vena cava inferior con solución salina heparinizada para eliminar la sangre intraluminal o los coágulos. Retira el riñón del donante del hielo y colócalo en el flanco derecho del ratón.

Colocar dos suturas de estancia en el vértice proximal y distal de la otomía aorta del receptor con el manguito aórtico del donante. Realice una anastomosis de extremo a lado entre el manguito aórtico del donante y la pared anterior de la otomía aorta del receptor utilizando dos o tres suturas continuas de nailon de 10 oh en el exterior de la aorta. Después de voltear el injerto de riñón del donante en el flanco izquierdo del receptor.

Repetir el procedimiento anterior entre el manguito aórtico del donante y la pared posterior de la aorta del receptor. Otomía. Es importante recordar que la anastomosis tanto de la vena como de la arteria debe terminarse en 20 minutos. El injerto también debe enjuagarse con solución salina fría varias veces durante la anastomosis.

Realizar una anastomosis de extremo a lado entre la vena renal donante y la pared posterior de la vena cava inferior del receptor utilizando cuatro o cinco suturas continuas de nylon 10 oh en el interior de la vena cava inferior. Cerrar la pared anterior de la vena cava inferior y la vena renal del donante con cuatro o cinco suturas continuas fuera de la vena cava inferior. El siguiente paso es dividir la cúpula de la vejiga receptora.

Detenga el sangrado con cauterización. Una vez completada la tación, haga un pequeño corte en la cúpula y coloque dos suturas de nylon de 10 pulgadas para anastomosear el pequeño parche vesical del donante con la cúpula vesical del receptor. Sutura cada lado de la anastomosis con ocho a 10 puntos continuos. Por último, cierre el abdomen en dos capas con cuatro suturas continuas de vivencia sintética absorbible estéril.

Los cuidados postoperatorios comienzan con la administración de una sola inyección intramuscular de penicilina. El receptor del trasplante también recibe 0,05 miligramos por kilogramo de buprenorfina por vía intramuscular el día cero y el primer día después de la cirugía para el dolor, así como un suministro continuo de agua que contiene sulfamidas. Las primeras 24 horas después de la operación se mantuvieron en una incubadora de temperatura controlada.

Las suturas cutáneas se retiran dos semanas después de la cirugía. La extirpación del riñón nativo restante es esencial para que la disminución de la función del injerto renal pueda controlarse mediante mediciones de creatinina sérica. Por lo general, se realiza de cuatro a siete días después del injerto inicial del riñón donante e implica los pasos principales empleados para extirpar el riñón del ratón donante.

La anestesia con flúor ISO se utiliza para sedar al animal huésped de modo que se puedan recoger muestras de sangre. Los niveles cuantitativos de creatinina en sangre total retroorbitarios se utilizan como lectura para evaluar la función del injerto y se determinan utilizando un analizador clínico portátil I stat. Las unidades convencionales se convierten en unidades SI multiplicando las unidades convencionales por 88,4.

La concentración de creatinina se expresa en micromoles por litro. Por lo general, los animales se recuperan de dos a tres horas después de la cirugía y muestran un comportamiento normal del ratón después de la extracción del riñón nativo restante. La supervivencia del animal depende de la función del injerto renal, que puede evaluarse mediante exámenes diarios de la salud general del animal y de la creatinina.

Medición de sangre total utilizando un analizador clínico portátil i-STAT como referencia. Un ratón normal no trasplantado tiene un nivel de creatinina cercano a 20 micromolares. Se considera disfunción del injerto renal cuando el ratón muestra signos de enfermedad y el nivel de creatinina está elevado cerca de 100 micromolares.

Acabamos de mostrarte el procedimiento para el trasplante renal en ratón. Aunque este procedimiento es técnicamente desafiante, nuestro laboratorio ha tenido un gran éxito en su realización. Así que eso es todo.

Gracias por mirar y buena suerte con tus experimentos.