Préparation et utilisation des lésions Phantom à la pratique cytoponctions

Published 9/29/2009
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Biology
 

Summary

Pratiquer des cytoponctions (FNAB) par les stagiaires est relativement difficile, en raison de l'absence d'un facilement disponibles, une lésion approprié. Préparation d'une lésion AV fantôme pour pratiquer la procédure et de compétence FNAB mastering est relativement facile.

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Shidham, V. B., Varsegi, G. M., D'Amore, K., Shidham, A. Preparation and Using Phantom Lesions to Practice Fine Needle Aspiration Biopsies. J. Vis. Exp. (31), e1404, doi:10.3791/1404 (2009).

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Abstract

Actuellement, les travailleurs de la santé y compris les résidents et les boursiers n'ont pas un modèle approprié fantôme pour la pratique de la cytoponction biopsie (FNAB) procédure. Dans le passé, nous avons standardisé un modèle composé de gant en latex contenant fraîche foie de bovins pour la pratique de la FNAB. Toutefois, ce modèle est difficile d'organiser et de préparer à court préavis, avec l'achat de foie de bovins fraîche étant l'aspect le plus difficile. Manipulation du foie avec des problèmes de contamination liés est également un tirage significative dos. En outre, les fuites de matériaux de gants après une aiguille quelques passes, avec résultant pagaille.

Nous avons établi une nouvelle méthode simple de l'intégration d'un petit morceau de saucisson ou de banane dans un calfeutrage en caoutchouc de silicone disponible dans le commerce. Ce modèle permet la rétention de joint vide et l'aspiration de matériel provenant de l'échantillon embarqués, ressemblant à une procédure FNAB réelle sur les lésions de masse clinique.

Le matériel aspiré dans le manchon de l'aiguille peut être traitée similaires aux échantillons prélevés lors d'une procédure réelle FNAB, facilitant la compétence supplémentaire dans la préparation du frottis et coloration.

Protocol

  1. Préparation de la lésion fantôme (phantom préparer environ 38 à 48 heures avant la session pratique réelle de la compétence FNA (figure 1) ou utiliser prêt à utiliser "AV fantôme» de la Source FNA, Etats-Unis. La lésion fantôme (stocké sous réfrigération sans congélation) peut être conservés préparés, même 3 à 4 jours avant la pratique de session.
  2. Pratiquer FNA compétence: Bien que nous l'avons démontré en utilisant la procédure de THFV Shidham (Tissue Harvester avec vanne fonctionnelle) (Source FNA, USA), tout autre système FNA peut être utilisé pour pratiquer (figure 2).
  3. Diffusion et traitement de la ponction sur les lames de verre (figure 3).

Matériel requis

  1. Effacer le caoutchouc de silicone mastic-disponibles dans de nombreux magasins d'amélioration de la construction / home. De nombreuses marques sont disponibles, y compris GETM, DAP, Red Devil, White Lightning, et les marques de la chaîne locale. Nous avons utilisé en caoutchouc de silicone clair, les produits White Lightning, Cleveland, Ohio, USA, http://www.wlcaulk.com/products/all_purpose/silicone_rubber/wl09010.html )
  2. Pistolet à calfeutrer
  3. Un morceau de feuille de pellicule plastique (nous avons utilisé Saran Wrap Cling plus, SC Johnson & Son Inc, Racine, WI, USA http://www.saranbrands.com/plastic-wrap/index.asp
  4. Les gants en latex
  5. La banane de grand diamètre ou de la saucisse.
  6. Plaque de base ferme et plat (environ 6 pouces X 6 pouces) en carton épais, plaque acrylique, ou autres.
  7. FNA performants équipements
    • 25 seringues hypodermiques de calibre
    • Shidham de THFV (ou d'autres composants pour effectuer FNA)
    • lames de verre
    • des kits de coloration

Étape par étape, les détails

A. Préparation de la lésion fantôme (phantom préparer 1 à 2 jours avant la pratique FNA compétence (Figure 2) ou utiliser prêt à utiliser "AV fantôme» de la Source FNA, USA.

  1. Coupez un 6 X 6 pouces de taille de soutien du conseil.
  2. Coupez un tronçon de 2,5 pouces de long sur «noyau lésion fantôme» (banane ou de la saucisse).
  3. Expulser 0,5 pouce d'épaisseur couche de mastic sur la plaque de base.
  4. Appuyez sur le «fantôme lésion de base» à la légère dans cette couche de mastic.
  5. Ajouter plus de calfeutrage sur le «noyau lésion fantôme» afin qu'il soit entièrement noyés dans la butte de calfeutrage, sans bulles d'air.
  6. Ajuster et la forme du produit de calfeutrage sur «noyau lésion fantôme» avec une main gantée.
  7. Prenez une pièce de 6 X 6 pouces de taille d'une pellicule de plastique et recouvrir le monticule calfeutrage et d'ajuster la surface de la motte dans une configuration convexe lisse avec un linge propre, la main gantée.
  8. Laissez la guérison monticule calfeutrer pour 6-8 heures de plus que le temps de durcissement mentionnés sous les instructions du produit, (habituellement 24 heures), dans un endroit chaud.
  9. Après durcissement, le calfeutrage doit être ferme, et la pellicule de plastique peut être détaché facilement.
  10. La lésion FNA fantôme est prêt à être utilisé pour pratiquer la procédure FNA après environ 8 heures lorsque le monticule entier de calfeutrage a complètement guéri au centre contenant le «noyau lésion fantôme» (banane ou de la saucisse).

B. Pratiquer FNA compétence sur AV Phantom lésion.

Toute approche dans l'obtention de haute qualité, adéquate aspirats FNA avec des frottis cytologique de bonne qualité devrait directe adresse suivante points critiques-

  1. La jauge, comme l'aiguille implicites dans le titre de la procédure, les aiguilles plus fines (nombre plus élevé de calibre) avec un meilleur rendement aspirats dilution du sang minimes. Pour l'équilibre critique des avantages et des limites, 22 à 25 aiguilles de calibre sont préférables pour la stabilité mécanique optimale de l'aiguille sans affecter la qualité d'aspiration FNA.
  2. Contrôle de séquences appropriées en application de vide et de la libération durant la procédure de FNA-Cela est essentiel afin de faire avancer les cellules prélevées à chaque coup de l'aiguille, l'aiguille vers le moyeu. Toutefois, le matériel aspiré ne doit pas être autorisé à atteindre dans le domaine de l'assemblage aspiration à l'aiguille d'une seringue. Si ce n'est pas empêché, le matériau peut être difficile à récupérer pour faire des frottis (ce matériau peut toutefois être utilisé pour la préparation des blocs de cellules ou de procédés de concentration tels que Cytospin, les méthodes de filtre, ou récente des préparations liquides cytologie).
  3. Développer des compétences appropriées dans le traitement de l'échantillon aspiré, y compris la préparation du frottis direct et d'évaluation adéquat sur ​​place avec triage pour des tests complémentaires comme bloc cellulaire préparation pour l'immunocytochimie élective, la cytométrie en flux élective pour l'immunophénotypage des lésions lymphoprolifératives, soumettant passe stériles pour la microbiologie études, et s'accouplentRial pour les tests moléculaires (cytogénétique, etc.)

Ba Performing procédure de FNA (illustré avec THFV Shidham [1] (Source FNA, USA); cependant, aucun autre système FNA peut être utilisé pour pratiquer). (Figure 3,4,5).

  1. Préparer l'assemblée FNA avec le clapet fermé.
  2. Localiser la lésion et d'insérer l'aiguille dans la lésion.
  3. Ouvrez la vanne de connecter le vide, à travers l'aiguille à sa pointe, pour aspirer représentant les composants cellulaires de la lésion à chaque coup de va et vient dans la lésion.
  4. Maintenir les zones de vide et autre échantillon de la lésion en insérant l'aiguille dans la lésion dans des directions différentes.
  5. Fermer le robinet de débrancher l'aspirateur dans la lumière de l'aiguille.
  6. Egaliser la pression avec les conditions ambiantes (par exemple en débranchant la seringue soupapes de l'aiguille pour un bref moment et se reconnecter. Si le dispositif spécial avec des étapes intégré, tels que «THFV» est utilisé, ceci et d'autres mesures de Ba1 à Fa6 sont concertés automatiquement par la suite les différentes étapes dans le système de valve) [1].
  7. Retirez l'aiguille de la lésion avec la vanne fermée, afin d'éviter la perte de l'échantillon par capillarité dans la lésion moins qu'il y ait une pression légèrement négative à la fin du moyeu.
  8. Déloger le contenu atmosphérique sur la lame de verre pour préparer l'examen direct (voir ci-dessous) (figure 6).

Sib. Traitement de l'échantillon aspiré avec triage approprié
Répandre la ponction sur les lames de verre et la préparation des frottis de bonne qualité directe (figure 6) suivie d'une coloration appropriée et de triage (voir la figure 7,8).

  1. Une goutte d'aspirer délogé sur la lame de verre est propagée par une variété d'approches comme le montre (figure 6) [2]. L'approche habituelle est «a». Cependant, si l'échantillon est du sang dilué avec quelques microfragments, l'excès de sang est drainé en inclinant la lame, et la microfragments sont ensuite réparties entre cette lame et lamelle de verre seconde similaires à "a". Si la ponction est principalement une suspension sans microfragments, tels que des lésions lymphoprolifératives, elle est répartie similaire à 'b' ou 'c'.
  2. Le frottis peut être traitée et fixée dans une variété de façons pour les différentes méthodes de coloration lors de l'évaluation adéquat sur place. Cependant, la meilleure approche consiste à sécher à l'air tous les frottis. Les frottis séchés à l'air peut être teint avec des colorants Romanowski (comme Difff-Quik tache, tache de Wright) après fixation du méthanol ou avec Pap tache après saline de réhydratation et de post-fixation (dans 95% d'éthanol ou de préférence dans l'éthanol à 95% avec 5 % d'acide acétique) [3]. Élimination des interférences dues à obscurcir le sang est un avantage significatif [3].
  3. Selon les premières constatations cytomorphologic lors de l'évaluation adéquat sur place, le triage supplémentaires (tels que le bloc de cellules élective, la microscopie électronique, les cultures en microbiologie, la cytométrie de flux, des tests moléculaires-cytogénétique etc) est recommandé comme indiqué.

Les résultats représentatifs:

Figure 1
S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version agrandie de la figure 1 .
Figure 1. Matériel requis pour la préparation AV Phantom pour pratiquer FNA compétence (* Nous utilisons une pellicule de plastique Saran qui ne colle pas à la calfeutrer à la fin, tout en retirant après le durcissement complet du produit de calfeutrage.)


Figure 2
S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version agrandie de la figure 2.
Figure 2. Préparation AV Phantom lésion


Figure 3
S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version agrandie de la figure 3.
Figure 3. Les étapes critiques dans la procédure de la FNA.


Figure 4
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Figure 4. EUS-FNA-Résumé des étapes critiques * (voir Fig 3)


Figure 5
S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version agrandie de la figure 5.
Pièges Figure 5. Liés à des étapes critiques dans la FNA procedure.


Figure 6
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Figure 6. Préparation des frottis directs de l'échantillon FNA entre deux lames.


Figure 7
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Figure 7. Wet frottis fixés par rapport séchés à l'air.


Figure 8
S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version agrandie de la figure 8.
Figure 8. Wet frottis fixés par rapport séchés à l'air.

Discussion

Biopsies d'aspiration à l'aiguille fine (FNAB) sont largement effectuée comme une solution économique, technique mini-invasive sûre et rapide pour le diagnostic des tissus de diverses tumeurs et des lésions. Dans cette procédure d'une aiguille de 18 à 27 jauge est insérée dans la lésion, allaient et venaient plusieurs fois dans différents domaines de la lésion sous vide contrôlé (aspiration) d'intensité variable allant de minimes à la seule forme de l'action capillaire à environ 10 ml vide dans la seringue pour récupérer du matériel de diagnostic tissulaire. Une aiguille de la jauge plus fine avec nombre plus élevé est préférable de récupérer du matériel cytologique bon de préparer les frottis directs. L'aiguille de la jauge de large 18G récupère un échantillon plus adapté à bloc cellulaire, cytométrie en flux, microscopie électronique, cytogénétique, de la microbiologie des cultures etc Bien que la procédure est simple, en contrôlant les différentes étapes d'application adéquate et la libération de vide à des mesures appropriées de façon concertée est extrêmement crucial pour des résultats optimaux.

En raison de non-disponibilité de spécialement conçu à rendement élevé aiguilles, seringues hypodermiques traditionnelles ou leurs modifications sont utilisées pour effectuer cette procédure. Toutefois, les aiguilles hypodermiques ont de nombreuses limites conduisant à un rendement faible de l'échantillon s'il est utilisé de façon classique. L'exigence de poignées seringue spéciale ajoute habituellement à la complexité de la procédure. Ainsi, en raison de l'absence de dispositif de disponible dans le commerce aiguille adaptée FNAB, cette procédure très polyvalent souffre d'un problème fréquent de la récupération spécimens inadéquats. Récemment, un dispositif d'augmenter le rendement avec une reproductibilité a été rapportée [1].

De plus, il ya actuellement un manque de modèle approprié pour la pratique de la compétence dans l'accomplissement de la FNAB par le personnel de santé en formation y compris les résidents et les boursiers. Nous avons eu un modèle standardisé avec un morceau de foie frais de bétail en peluche dans de gants en latex pour pratiquer la FNAB compétence. Toutefois, ce modèle est difficile à organiser dans un bref délai. Achat de foie de bovins fraîche est généralement la situation de limitation. En outre, la manipulation de foie peut introduire une contamination des facteurs liés comme un tirage significative dos. La tendance pour le gant en latex de fuite après un peu de piqûres d'aiguille conduit à dégâts potentiels lors de la session de pratique.

Nous rapportons et décrire un roman, mais méthode simple d'intégrer un petit morceau de banane (ou saucisse) dans un calfeutrage en caoutchouc de silicone disponible dans le commerce et les autres matériaux facilement disponibles. Le fantôme FNAB conserve joint hermétique permettant ainsi l'aspiration de matériel provenant de l'échantillon intégré, ce qui équivaut à la procédure de la FNAB réel sur une lésion au milieu clinique. Dans cette vidéo, nous démontrons la procédure de prise de la FNAB fantôme lésion et pratiquer la procédure FNAB. Il démontre également en bref le traitement de l'échantillon récupéré, y compris la préparation du frottis et coloration [2,3].

Parce que le calfeutrage prend du temps à guérir, la lésion fantôme doit être préparé à l'avance d'environ 24 à 48 heures avant la séance de pratique. Comparable prêt à utiliser une lésion fantôme peut être obtenu à partir d'une source commerciale (Source FNA, USA).

La lésion fantôme pour pratiquer la FNAB compétences peuvent être utilisées pour la formation des résidents et des boursiers avant le début de la FNAB performances sur des patients en milieu clinique.

References

  1. Shidham, V. B., Pandit, A. W., Rao, R. N., Basir, Z., Shidham, A. Tissue Harvester with Functional Valve (THFV): Shidham's device for reproducibly higher specimen yield by fine needle aspiration biopsy with easy to perform steps. BMC Clinical Pathology. 7, (2), (2007).
  2. Shidham, V. B., Epple, J. AppendiX I: Collection and processing of effusion fluids for cytopathologic evaluation. Shidham, V. B., Atkinson, B. F. 'Cytopathologic Diagnosis of Serous Fluids' First edition, Elsevier; W.B. Saunders Company. Chapter 15 207-235 (2007).
  3. Shidham, V., Kampalath, B., England, J. Routine air drying of all the smears prepared during fine needle aspiration and intraoperative cytology studies: An opportunity to practice a unified protocol, offering the flexibility of choosing variety of staining methods. Acta Cytologica. (45), 60-68 (2001).

Comments

5 Comments

  1. thank you for this outstanding presentation, it is very simple and comprehensive,

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 26, 2009 - 2:13 PM
  2. Thank you the comments.
    We are glad you liked the presentation and found it useful. (Rply by the Authors Shidham & Varsegi).

    Reply
    Posted by: Vinod S.
    October 27, 2009 - 1:49 PM
  3. This is great! I look forward to trying it with my students!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 6, 2011 - 8:41 PM
  4. For more information visit this website http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19893483

    Reply
    Posted by: seth g.
    January 14, 2015 - 5:04 AM


  5. Prototyping and mounting medical devices is very critical and competitive too. Most innovation recently occurs from smaller niche companies. Prototyping has come a long way since traditionally they were just for observation and then function, but now with the innovation of 3D printing process there is no requirement of further assembly. As you can read at http://www.gurufocus.com/news/295253/hologic-produces-the-first-fdaapproved-3d-mammography-platform Hologic was the first company which introduced 3D mammography system to overcome the flaws of traditional mammogram and increase the detection rate of breast cancer. 3D printing technique has brought great capabilities to customize wide variety of applications in the medical field.

    Reply
    Posted by: Brock E.
    May 4, 2015 - 7:34 AM

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