Сбор спермы и искусственного осеменения Мыши

Published 4/28/2007
15 Comments
  CITE THIS  SHARE 
Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





By clicking "Submit", you agree to our policies.

 

Summary

Этот протокол демонстрирует методы для извлечения сперматозоидов из яичек самцов, а затем inseminating самок мышей. Эта процедура полезна, когда точное время необходимо в развитии исследований, а также трансгенные работы.

Cite this Article

Copy Citation

Duselis, A. R., Vrana, P. B. Harvesting Sperm and Artificial Insemination of Mice. J. Vis. Exp. (3), e184, doi:10.3791/184 (2007).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Грызуны Реготузсиз рода (олени мышей) являются наиболее распространенными коренных народов Северной Америки млекопитающих. Реготузсиз видов используются в широком диапазоне исследований, включая токсикологии, эпидемиологии, экологии, поведенческие и генетические исследования. Здесь они предоставляют полезную модель для демонстрации искусственного оплодотворения.

Методы, аналогичные отображаются здесь ранее использовались в нескольких исследованиях, мышь оленя, но не подробный протокол был опубликован. Здесь мы показываем, основным методом искусственного оплодотворения. Этот метод влечет за собой извлечение из яички грызунов, то выделение спермы из придатка яичка и семявыносящих протоков. Зрелые сперматозоиды, теперь в молочную смесь, помещаются в половые пути самки в момент овуляции. Оплодотворение считается как день 0 для синхронизации развития эмбриона. Эмбрионы могут быть получены в заданное время точкой и манипулировать.

Искусственное оплодотворение может быть использован в различных видов грызунов, где точные сроки эмбрион имеет решающее значение или трудно получить. Эта техника имеет жизненно важное значение для видов или штаммов (в том числе большинство Реготузсиз), которые не могут спариваться сразу и / или там, где спаривание трудно оценить. Кроме того, искусственное осеменение обеспечивает точное время для развития эмбриона или в отображении развития прогресса и / или трансгенных работы. Сокращение числа животных может быть использован с оплодотворением гарантируется. Этот метод имеет жизненно важное значение для дальнейшего Реготузсиз системы, и мы надеемся принести пользу другим, а также.

Protocol

Искусственное оплодотворение

Искусственное оплодотворение используется вместо природного вязки, чтобы увеличить шансы, что все женщины имеют станет беременной. 2 мужчины была использована на каждый 1 superovulated женщин или женщин, как известно, в эстрального. Caudae epididymides из зрелых самцов мышей были помещены в 9%, молока подвески и нарезанный открытым с 18 иглами калибра. Спермы было разрешено свободно плавать в течение нескольких минут, а затем epididymides были взяты из смеси. Подвески оценивали с помощью микроскопа для слияния и подвижных сперматозоидов. Тупой 22 калибра 1 ½ дюйма длиной иглы, используемые для введения спермы. 120 ° изгиб был сделан около 3 / 4-й путь вниз иглу. Игла вводится во влагалище до изгиба и 0,025 - 0.05mls вводили. Если помощник используется для хранения женщиной в соответствующем положении, использование анестезии не требуется.

Подготовка

  1. Используйте 4 мужчин в течение 6 женщин
  2. Эвтаназии мужчин в виварий
  3. Подготовка около 5 мл 9% молока из сухого молока
  4. Положите 1,5 мл в небольших чашках Петри
  5. Вырежьте придаток яичника и семявыносящих протоков
  6. Положить в 1,5 мл 9% молока
  7. С помощью двух игл 18 калибр, и с помощью длинных резки движения с иглы, кусочек открытым придаток яичника и семявыносящих протоков выпустить сперму
  8. Выньте оставшиеся ткани и проверить его на сперму под микроскопом

Инъекция

  1. Используйте тупой иглой на 120 градусов
  2. Держите мышь в руки и вводят смесь. Если неудобно с одним лицом, занимающим и инъекционных, два человека могут быть использованы. Нет анестезии должны быть использованы, как на один знает, как это может повлиять на процедуру.
  3. Используйте 0.05ml спермы / молоко смеси на женский

Получатель женщин

  1. У вагинальных мазков на получателя женщин (к этому времени получателя женщины должны быть в проэструсе / течки)
  2. Женщины, которые не достигли течки по 5-й день, вероятно, не использовались

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgements

Я хотел бы поблагодарить Майка Дьюи из Реготузсиз Генетический центр Биржевые котировки за ценную информацию, терпения и знаний о грызунах воспроизводства.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Petri Dish Tool Fisher Scientific 08-772-30
18 gauge needle Tool BD Biosciences 305195
Powdered milk Reagent Any Supplier
1 ml syringe Tool National Scientific Company S7510-1
Forceps Tool Roboz Surgical Instruments Co. RS-5060
Scissors Tool Roboz Surgical Instruments Co. RS-5882
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Reagent GIBCO, by Life Technologies 14200-075
22 gauge blunt needle Tool Give to me

DOWNLOAD MATERIALS LIST

Comments

15 Comments

  1. can you tell me the resolution power of the microscope at which you have shown the video and the make of the mcroscope used.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 17, 2007 - 12:56 AM
  2. The total magnification to do the AI is between 10-²0x depending on the user for basic dissection. The sperm can be seen at 400x

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 1, 2007 - 2:09 PM
  3. Hello Amanda!  Thank for this article. I d like if you can give me more information about the powered milk, and if there is any posibility of create "make in home" powered milk. Too , if you can please give me the aprox. milimeters that need introduce the nedlle into the vagina. You understand my english? Thank you. Carolina (from Buenos Aires, Argentina)

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 29, 2008 - 9:09 AM
  4. Hi Carolina, The milk is a commercial powdered milk bought from a regular grocery store. I am not sure what it contains if you wanted to make it at home. A little less than 1 cm of the needle was inserted into the vagina for sperm delivery but if you want to test it...I would use a dead mouse to check the insertion length when making a new needle. Good luck Amanda  

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 15, 2008 - 12:19 PM
  5. Would there be any difference in the dimention of the insemination needle for rats. Is there a non-invasive method of extracting sperm in rats. How can the vaginal smear indicate prŒstrus/estrus.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 26, 2008 - 2:28 AM
  6. I know it is been a while since you posted the video. But what is the success rate of this protocol? thanks Ming

    Reply
    Posted by: Anonymous
    December 11, 2008 - 11:45 AM
  7. Amanda, Our lab is just beginning to look into artificial insemination.  After watching your video and looking at a few other artificial insemination protocols, I have a couple of questions: (1) How to you assess or induce ovulation? (²) How do you induce pseudopregnancy? Thank you, Rob

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 2, 2009 - 6:02 PM
  8. Hola, respuesta para Robert Stiles, mira si tu problema es matar a los machos, lo que puedes hacer castrar a los animales, de esa manera no es necesario sacrificarlos. Por lo tanto puedes obtener los espermas necesarios sin sacrificar al animal.   Saludos desde México Roberto Lazzarini, Biologo experimental    

    Reply
    Posted by: Roberto L.
    January 29, 2009 - 8:45 PM
  9. Hy Amanda, I would like to know  some things: 1 - what is your success rate? ² - Do you use the vaginal tampon like described by LECKIE et al, 1973 (Biology of Reproduction, Vol 9, 4²0-4²5)? 3 - I tested the techinique using dye solution and, afterwards, I sacrified the female, but I didn't see any solution inside the uterus. Do you introduce the needle in the cervix (like in human intra-uterine insemination) or you just put the needle very closely to it. Because don't have how to have sure about introducing into the cervix, unless using a special speculus. Thank you Daniela  

    Reply
    Posted by: Daniela F.
    March 4, 2009 - 9:44 AM
  10. Please send me the full video of collection of sperm from mice. Because i could not able to see the full video content in my institution so send full video to my mail. thanking you.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 18, 2009 - 1:18 AM
  11. Hi, please contact us at support@jove.com and we'll see what we can do.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 18, 2009 - 3:19 PM
  12. hi Amanda ,please Iwant a copy of the video and any related subjects if you can support them to me I will very gratful .
    with my regards

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 9, 2009 - 9:16 AM
  13. do you induce pseudopregnancy in the recipient female or do
    you literally just inject the donor sperm??
    If you induce how do you do this?
    What are the pregnancy rates like from using this AI?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 29, 2010 - 4:50 AM
  14. Hi dear Amanda, I want to collect semen from rat, but when I removed the seminal vesicles and I cut them, semen was coagulated immediately. . In fact I need a protocole for rat semen collection. Thanks for help.
    Ameneh immunology MS student

    Reply
    Posted by: Anonymous
    December 12, 2011 - 8:52 AM
  15. Good day maam! Can i ask the procedure how to extract the sperm form the cauda epididymis? thank you.

    Reply
    Posted by: jamee d.
    November 23, 2012 - 6:55 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Video Stats