Extensión probóscide Respuesta (PER) Ensayo en Drosophila

Biology

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Summary

Respuesta trompa de extensión o PER es un ensayo de comportamiento de sabor que se ha utilizado en las moscas, así como en las abejas. Cuando la trompa se pone en contacto con una sustancia atractiva, la mosca se extiende su trompa para consumir la sustancia. Soluciones de diversos azúcares son muy atractivos para la marcha.

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Shiraiwa, T., Carlson, J. R. Proboscis Extension Response (PER) Assay in Drosophila. J. Vis. Exp. (3), e193, doi:10.3791/193 (2007).

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Abstract

Respuesta trompa de extensión (PER) es un ensayo de comportamiento de sabor que se ha utilizado en las moscas, así como en las abejas.

En la superficie de la boca de la mosca (labelo), hay pelo-como las estructuras llamadas sensilla que alberga neuronas gusto. Cuando una sustancia atractiva entra en contacto con el labelo, la mosca se extiende su trompa para consumir el material. Extensión probóscide Respuesta (PER) ensayo mide la respuesta de comportamiento de gusto, y es un método útil para conocer las preferencias de alimentos en una sola mosca. Soluciones de azúcares diversos, tales como sacarosa, glucosa y fructosa, son muy atractivos para la marcha. El efecto de las sustancias aversivas también se puede probar que la reducción del PER cuando se mezcla en una solución dulce.

A pesar de la simplicidad del procedimiento básico, hay muchas cosas que pueden evitar que se trabaja. Uno de los factores que requiere atención es el estado de respuesta de la mosca. El tiempo de hambre necesaria para que la marcha para el estado de respuesta adecuada varía drásticamente de 36 a 72 horas. Hemos establecido una serie de controles para evaluar el estado de la mosca y que permite la detección de los animales individuales que no responden o hiper sensible. Otro factor importante es el nivel de impacto y la posición del contacto con el labelo, que sería difícil de describir con palabras. Esta presentación en video demuestra todo esto junto con otras mejoras que aumenten la reproducibilidad de este método.

Protocol

Hambre

  1. En primer lugar, matar de hambre al vuelo.
  2. Ponga un pedazo pequeño de Kim-limpiar empapados con agua en un frasco vacío.
  3. Transferencia de 20-30 bien alimentados moscas en el vial vacío.
  4. Comprobar cada 12 a 24 horas para asegurarse de que el papel está húmedo.
  5. Matar de hambre al volar por 36 a 72 horas.

Arreglar la marcha

  1. Tome una mosca en un aspirador.
  2. Coloque una punta de 200 l de color amarillo sobre la apertura. Al mismo tiempo mover de un tirón y soplando sobre ella, se puede apretar la mosca en la punta amarilla.
  3. Aplicar suavemente un poco de aire para impulsar la marcha hasta un punto en el que no se puede mover.
  4. Mediante el uso de una navaja de afeitar, pon una marca aproximadamente a los ojos de la mosca, y luego aspirar el vuelo de regreso y le cortó la punta.
  5. Sople suavemente el vuelo de regreso a la posición, pero antes de llegar al final, hacer un corte inclinado en la posición en la trompa se va a estar ubicado. Usted puede hacer sin este corte inclinado, pero sin duda sería el siguiente proceso más fácil.

Prepare mechas sacarosa

  1. Toque una banda de 6 mm de ancho de Kimwipes ® papel en un hilo, y se separan en pequeños trozos de cono-como forma de mecha (<1 cm).
  2. Estas mechas pequeñas se sumergieron en soluciones de sacarosa o agua y se presentó a la trompa por la toma de contacto.

Prepare los controles y los animales de experimentación

  1. Antes de probar cualquier estimulantes del gusto, dar una solución de sacarosa al 4% a la mosca. Esto actúa como un control positivo. Deseche cualquier mosca que no respondió.
  2. A continuación, prueba de dH 2 0 sobre la marcha. Este acto como un control negativo. Deseche la marcha si se ha respondido.
  3. Prueba de estos controles después de la prueba de su estimulantes.

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Discussion

En esta presentación, hemos pasado por todos los pasos para el ensayo de probóscide respuesta de extensión. El método parece bastante sencillo, pero como en muchos ensayos de comportamiento de otras, muchas pequeñas cosas pueden evitar que el ensayo de trabajo. Hemos pasado por muchas etapas de tal manera que necesitan una atención especial. En este caso, me reitero algunos de los factores más importantes.

Uno de ellos es la forma de la mecha. He mostrado algunos de los ejemplos muy buenos, pero por supuesto, en realidad, todo sería un espectro continuo entre muy bueno y muy malo. En un principio, se podría estar usando las cosas cerca del muy buen equipo, pero el día a día su nivel podría empezar a cambiar poco a poco a la gama no tan buenas. La percepción humana de los llamados "buenos" pueden cambiar muy fácilmente inconscientemente. Una forma de evitar esto es tomar una foto de la mecha que ha utilizado en sus experimentos, y comparar todas las imágenes lado a lado. O, al menos tomar una foto de las mechas que funcionó muy bien, y mira fijamente durante un rato antes de la prueba PER.

Otra cosa importante es el nivel de impacto del contacto. Esto es más fácil de tratar porque la meta es hacer que el contacto con lo más suave posible. Si usted no ve pasar la marcha de la cabeza a todos, que es el mejor.

La condición de hambre es el más difícil de controlar los factores. En el gusto y olfativas muchos ensayos de comportamiento, un momento de hambre de 24 horas se utiliza muy a menudo. 24 horas puede ser muy conveniente para la gente a hacer el experimento, pero si tu trasero va en muy buen estado, este es un período bastante corto. Pero incluso si ha utilizado un alimento rico en marcha, y el control de la densidad, precisamente, la ventana para la prueba PER puede variar de 36 horas a 72 horas. Por lo tanto, como un experimento, tengo que decir que es muy incómodo para la gente. Hay otro factor que lo hacen más difícil para los investigadores. Como cuestión de hecho, no habría muchos lotes, donde la ventana para el experimento podría ser muy corto, o incluso podría no existir en absoluto.

Así que hay algunos obstáculos importantes que tiene que pasar, pero lo más importante es el control positivo y negativo que he mencionado. Al mantener a los estándares de forma muy estricta, que será capaz de recoger los conjuntos de datos fiables.

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Acknowledgments

Damos las gracias a Paul Graham para servir como un hombre de la cámara en el video de presentación.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
HDR-HC1 Camera Sony Corporation
SMZ800 Microscope Nikon Instruments
P-IBSS Camera Adapter Nikon Instruments
1x DC10LN Camera Adapter Optem, Qioptiq Inc.
257010 Camera Adapter Optem, Qioptiq Inc.
TREKKER Mk2 Tripod BENBO
Gorillapod SLR Tripod Joby
iMac G5 Computer Apple
Power Mac G5 Computer Apple
iMovie Software Apple
MPEG Streamclip Software SQUARED 5

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Dethier, V. G. The Hungry Fly. Harvard University Press. Cambridge. (1976).

Comments

2 Comments

  1.  Comments about the starvation protocol. I am currently performing research on fly appetitive learning and test fly sugar response as a control with an assay similar to the one described in Kim et al. (J Neurosci. ²007 Jul 18;²7(²9):7640-7.) In my experiments flies are starved for ²1h before conditioning at ²5°C. In my experience, the temperature during starvation is of huge importance: In preliminary experiments, I got similar sugar responses for flies starved for 7h at ²5° and ²4h at 18°. So information about the temperature during starvation is highly welcomed. The density of flies during starvation also appeared critical. Using bigger tubes, I did another quick experiment transferring 40 or 80 flies in my tubes for starvation. One day after, the majority of the flies were dead while kept in groups of 80, while no death was seen in the tubes of 40 flies. So maybe a difference from ²0 to 30 flies in the vials might have big influence.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 10, 2008 - 8:05 AM
  2. I am very interested in the drosophila probosics extension response assay, and want to know more about this assay methods. Thank you.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 20, 2011 - 12:46 PM

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