В естественных изображений трансгенных Паразиты Leishmania в реальный хост

Immunology and Infection

Your institution must subscribe to JoVE's Immunology and Infection section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Thalhofer, C. J., Graff, J. W., Love-Homan, L., Hickerson, S. M., Craft, N., Beverley, S. M., Wilson, M. E. In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host. J. Vis. Exp. (41), e1980, doi:10.3791/1980 (2010).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Отдельные виды

Protocol

1. Заражение мелких животных с трансгенными Leishmania

1. Паразита линий

Трансгенные Leishmania sрр. паразитов выражения люциферазы генерируются с использованием эписомной или интеграции вектор сообщается. 1 2 Клональный линии являются предпочтительными. Два важных момента:

(А) комплексное люциферазы предпочтительнее, чем эписомной люциферазы, так как в теории эти паразиты линии должны лучше удерживать трансгена в отсутствие воздействия лекарственных средств, то есть после вступления в млекопитающих. Однако даже интегрированный трансгены могут быть потеряны при низкой скорости, 3 так что имеет решающее значение для поддержания селективного давления наркотиков на фондовом культуры. На практике, Leishmania sрр. часто сохраняют эписомной элементов в течение длительного периода времени, даже в естественных условиях, хотя и с изменением числа копий плазмиды в клетку. 4 Для любого типа трансгенных паразита, они всегда должны быть переданы в пробирке один раз перед посевом в животных, чтобы избежать возможных эффектов препарата.

(Б) Leishmania sрр. паразиты могут потерять вирулентность в течение в культуре пробирке. У некоторых видов (например, Л. donovani, Л. infantum chagasi) эта потеря может произойти быстро в течение нескольких недель культуры. У других видов (например, Л. майор, Л. Mexicana) вирулентность сохраняется более долгосрочной перспективе, в течение нескольких месяцев до нескольких лет. Тем не менее, клональной трансфектантов должны быть обследованы для выявления тех, сохраняя полную вирулентность для мелких животных. Многие лаборатории будет проходить серийно паразитов в несколько раз (4 и больше), через мышей и хомяков для увеличения вирулентности до использования в экспериментах.

2. Подготовка инфекционного этапе метациклическая паразитов-инфекции

Инфекционные формы Leishmania sрр. , которая передается от москитов до млекопитающих хост метациклическая промастиготы 5. Таким образом, животное инфекций с этой формой паразита являются предпочтительными в качестве модели природной инфекции. Хотя песок мухи трудно поддерживать, паразиты, выращенных в пробирке будет удобно пройти metacyclogenesis. Процентов metacyclics присутствуют в культуре будет меняться в зависимости от числа проходов с изоляцией от животного, питательных сред и видов паразитов и процедить.

Metacyclics может быть очищена от положительного или отрицательного отбора в зависимости от вида и рода Leishmania. Изменения в терминале или боковой цепи углеводные остатки обильной поверхности lipophosphoglycan (LPG) из L. основные позволяют ему быть очищен потери агглютинации лектинов с ПНА (арахисовое агглютининов). 5,6 Другие виды Leishmania или L. основные мутантов хватает метациклическая СНГ может быть очищена от градиента шаг Ficoll 7. ИВИС можно выполнить с помощью объемных неочищенные культуры, но следует признать, что они содержат смесь метациклическая и меньше инфекционных форм.

Как правило, 15-20% объемных стационарной фазы L. i. chagasi культур восстанавливаются как metacyclics использовании паразитов, которые были выделены в течение 3 недель с хомяка или мыши. Паразиты промывают центрифугированием, подвешенный к желаемой концентрации в буфере (PBS HBSS или с или без Са 2 + и Mg 2 +), и выдерживают при температуре 4 ° С до 2-х часов перед посевом в мышь.

3. Выбор маршрута для прививки Leishmania sрр. в принимающее

Клинические проявления болезни человека лейшманиоз варьироваться в зависимости от обоих видов паразита и хозяина факторов. Есть соответствующие различия в мышиной инфекции, ведущих исследователей использовать различные модели и пути заражения. Например, вид человека вызывает CL (например, Л. майор, Л. Mexicana, Л. amazonensis) часто прививку мышам подкожно в подушечку или внутрикожно в ухе. 8,9 Вид вызывая человека В. Л. часто вводят внутривенно через хвост вену 10-12 или внутрикожно в ухе. 13 инфекций хвостовой вены были выполнены либо с хомяком полученных amastigotes или с promastigotes. Мы регулярно заразить мышей с промастиготы форме L. i. chagasi, или внутрикожно в ухе или боковой предплюсны области 14 или внутривенно.

4. Предварительная обработка мышей с анестезией

Дикого типа, трансгенные или ген мышей нокаутом могут быть использованы. Хотя это и не формально, количественно, кажется, наиболее вероятно, что обнаженная или альбинос, таких как BALB / с мышами обеспечения большей света через ткани по сравнению с мышами с темной кожей и волосами пигмент, такой как C57BL / 6.

Инъекции anesthestic агентов, таких как смесь кетамина плюс ксилазина [80-100 мг / кг + 10 мг / кг, соответственно, intraperitoneally (ф)] растворяется в солевом является одним предпочтительным методом, так как животные будут слегка под наркозом в течение 10 минут с одной дозы. 100-200ul общем объеме вводится IP использованием 25-30 иглы. Животные вручную сдержанный крепко их спинной кожи с живота и головы указал вниз. Игла должна быть расположена с коническими вверх и немного под углом. Кончике иглы должна чуть-чуть проникнуть левом нижнем квадранте брюшной стенки.

Ингаляционной анестезии, такие как изофлуран можно попеременно использовать, но животным только останется под наркозом, пока они вдыхания анестетика.

5. Заражение мышей с Leishmania sрр. паразитов

Как только животные слегка под наркозом, инфекции участки очищаются 70% этиловый или изопропиловый спирт. Паразита маршрут виды, дозы и инфекции, определяется следователем. Объем впрыска должно быть сведено к минимуму, чтобы предотвратить чрезмерное повреждение тканей для внутрикожных (10 мкл) или внутримышечно (25-50 мкл) инфекции маршрутов. Допустимые объемы инъекций у мышей может быть больше для внутривенного (100-200 мкл), подкожные (до 2 мл) или внутрибрюшинно (до 2 мл) инфекции маршрутов.

Инфекция маршруты и объемы, используемые в наших экспериментах включают внутрикожные в ухо ушной раковины (10 мкл), подкожные во фланг (100-200 мкл), внутрибрюшинно (100-200 мкл) или внутривенно (100-200 мкл). Паразита дозы варьировались от 10 2 до 10 7 promastigotes.

2. Биолюминесцентный изображений Leishmania использованием ИВИС системе естественных изображений)

1. Подготовка D-люциферин для прижизненного изображения биолюминесцентного

D-люциферин (суппорт Lifesciences) разводится до концентрации 15 мг / мл в PBS Дульбеко с или без Mg 2 + и Ca 2 +, и шприц фильтром (0,2 мкм). Аликвоты заморожены при температуре -80 ° С до использования. До инъекции, люциферин нагревают до 37 ° С на водяной бане.

2. Введение D-люциферин

Инъекции очищают и люциферин вводится в сознательном животных при введении препарата в дозе 15 мг / мл раствора в люциферин DPBS, в дозе 150 мг / кг. Люциферин также может быть введен в анестезии обработанных животных, но биолюминесценции кинетики могут незначительно отличаться.

Как только вводится в животных, люциферин циркулирует быстрее. Полезно эмпирически определить оптимальное время для приобретения люминесцентных данных после люциферин впрыска для каждой экспериментальной модели и для различных анатомических местах мышей, потому что кинетика распределения люциферин могут отличаться. Кинетической кривой генерируется за счет приобретения последовательность повторить изображений.

3. Животные слегка под наркозом

Ингалянтами или инъекционного наркоза может быть использован для визуализации процедуры. Изофлюрана проще управлять на этом этапе, так как большинство ИВИС системы прилагается камера наркоза и анестезии носового конуса многообразием внутри изображения камеры. Анестезия делится между камерой анестезии и многообразием внутри изображения камеры.

Животные помещаются в камеру ясно анестезии оргстекла и слегка под наркозом с 2,5-3,5% изофлуран. Животные визуально контролировать для обеспечения эффективной степени анестезии была вызвана, и что их дыхание беспрепятственно. Достаточная степень анестезии подтверждается отсутствием выхода из болезненного давления лапу. Количество изофлуран может быть снижена до 1,5-2% за животными слегка под наркозом.

4. Биолюминесцентный данные собираются

Адекватно наркотизированных животных переводят из камеры анестезии в камеру изображения и расположены так, что нос конусов прилагается к многообразию доставит непрерывного и регулируемого потока изофлуран.

Программное обеспечение живой образ программы (суппорт науки о жизни) открывается и ИВИС инициализации. Для наших экспериментов мы используем Xenogen ИВИС 200 системы (суппорт Life Sciences). ПЗС-камера будет автоматически охлаждается и поддерживается при соответствующей температуре после инициализации ИВИС. Настройки камеры системы и параметров получения изображения задаются в панели управления системы ИВИС. Приобретение параметры в значительной степени в зависимости от количества животных и интенсивность биолюминесценции. Важными параметрами являются: режим съемки (люминесцентные или флуоресцентные), время экспозиции (время, что затвор открыт), биннинга (определяет размер пикселя на ПЗС), фокус и с учетом высоты (фокальной плоскости), F / стоп (размер диафрагмы) и поле зрения (FOV). Заданное поле зренияс (квадратные участки изображения) для ИВИС Imaging System 200 серии 4, 6,5, 13, 20 и 25 см (ширина поля зрения).

Нажатие приобрести или приобретает непрерывный фотографии в окне Управление системой ИВИС инициирует изображения и сбора данных о ИВИС. Приобретение раз может колебаться от нескольких секунд до нескольких минут. Для наших экспериментов мы используем 60 секунд экспозиции по умолчанию.

Крупный план изображения (маленькие FOV) может обеспечить более высокое разрешение, но не обязательно повышенной чувствительностью по сравнению с изображения, сделанные с использованием больших FOV.

После процесс создания образа, животные удаляются из камеры с изображениями, вернулись в свои клетки и контролируется, пока они не оправиться от наркоза.

7. Анализ данных

Люминесценции данные анализируются с помощью программного обеспечения Жизнь изображения (Xenogen) и соответствует интенсивности света выражается как число фотонов обнаружено ПЗС-камерой. Эти данные представлены псевдо-цветное изображение, которое накладывается на на черно-белую фотографию животных. Конкретные участки изображения могут быть проанализированы путем создания областей интереса (ROI). Программное обеспечение живой образ действительно обеспечивает различные варианты вывода данных. Один из самых простых способов анализа данных для выбора области интереса (ROI) и измерить среднюю # фотонов / сек, что не обнаружено. Эти данные затем могут быть экспортированы в электронных таблиц, таких как Microsoft Office Excel (Microsoft Corporation). GraphPad Призма (GraphPad Software) была впоследствии используется для создания графики для этой рукописи.

3. Представитель Результаты

Краткое содержание:

ИВИС технология позволяет визуализировать люциферазы, экспрессирующих Leishmania sрр. паразитов в живых наркозом BALB / с мышами в режиме реального времени. Как только субстрат люциферин распространяет через ткани, быстрое окисление D-люциферин по люциферазы выраженное трансгенных паразиты причин свет может быть выпущен. Фотоны, которые не поглощаются ткани обнаруживаются на поверхности животного камеры ПЗС-технологии визуализации ИВИС.

1. Модели заражения паразитами человека вызывают висцеральный против человеческого кожного лейшманиоза.

Мышиной модели висцерального лейшманиоза являются более проблематичными, чем модели кожного лейшманиоза, так как прогресс инфекции требует эвтаназии группы мышей в каждый момент времени оценить. Ограничение ИВИС в том, что свет выбросы закаленных в разной степени в разных тканях внутренних органов и тканей с высоким потоком крови, таких как печень и селезенка могут быть более проблематичным, чем кожа. Таким образом, ИВИС может быть не столь чувствительны для обнаружения люциферазы, экспрессирующих паразитов в печени и селезенке, как и в коже. Он также сообщил, что паразит нагрузки не следует сравнивать между тканью сайтов. Тем не менее, паразит нагрузки в той же ткани могут быть сопоставлены между подобранных по возрасту зараженных мышей одного и того же штамма.

Люциферазы сигнал легко обнаружить в висцеральных органов в наших экспериментах, что облегчает сравнение инфекций от животных. Пример 5-недельный инфекции люциферазы, экспрессирующих паразит вызывает человеческого висцерального лейшманиоза, Li. chagasi SSU/IR1SAT-LUC (А), показано на рисунке 1. Через 5 недель инфекции, visceralized паразиты могут быть обнаружены в печени мышей и все в селезенке мышей 1 и 2. На рисунке 2 показан титрования дозы с той же линии паразита, через час после введения паразита. Примером продольной инфекции паразиты вызывающие человека кожный лейшманиоз, Л. Mexicana SSU/IR1SAT-LUC (А), показано на рисунке 3.

2. Кинетика люциферазы обнаружения.

Предварительные кинетические исследования имеют важное значение для максимального обнаружения фотонов, испускаемых из биолюминесцентного паразитов. Важно, чтобы определить это эмпирически, как оптимальное время визуализации, скорее всего, меняться в зависимости от количества и яркости паразита изолировать и анатомического расположения люминесцентных микроорганизмов у мышей. Кинетических исследований зависят от скорости люциферин распространения по всей ткани, ткани мышей укрывательство люциферазы, экспрессирующих Leishmania и эффективность люциферазы выражение / активность фермента в каждом паразита изолировать. Мыши инфицированных и засевают люциферин, как описано выше, и последовательность изображений собирается каждые 2 минуты после инъекции люциферин. Величина излучаемого света количественно и графически определить максимальную точку обнаружения (см. пример на рисунке 1В). Как только время максимального обнаружения света определяется, все изображения в эксперименте должны использовать тот же момент съемки после прививки люциферина, как показано на рисунке 1а. Наши кинетических исследованийпродемонстрировали пик люциферазы сигнал из печени мышей, инфицированных IV с Л. i. chagasi от 10 до 25 минут после прививки ф люциферин (рис. 1В).

3. Оценка эффективности прививки паразита.

ИВИС могут быть использованы для оценки согласованности и эффективности первичной инфекции с люциферазы, экспрессирующих Leishmania sрр. Пока же маршрут используется для каждого животного, фотоны, испускаемые может использоваться в качестве грубой оценки эффективности прививки. Пример показан на рисунке 2, в котором BALB / с мышами были привиты с указанного числа метациклическая Л. i. chagasi promastigotes, visceralizing видов Leishmania. Один час после заражения мышей были привиты с ф люциферин, а через 20 минут снимки были сделаны. На рисунке показан черно-белое изображение в одиночку (рис. 2а) и изображение с наложением псевдо-цветной люминесценции (рис. 2В). Рис 2С показывает число фотонов, испускаемых из выбранных регионов интереса (ROI) от мыши изображений.

Например на рисунке 2 показано, что инфекции дозу прямо пропорциональна градации фотонов, испускаемых с увеличением числа паразитов. Данные показывают, что, как и Л. основные и Л. Mexicana, изображения кожных инфекций с Leishmania sрр. очень чувствительна, что позволяет менее 10 4 паразиты должны быть четко визуализируется. Такие данные, как они могут быть использованы для количественного инфекции интенсивности. В примере, показанном на рис 2B, Есть около 1 фотон / сек / паразита.

4. Мониторинг хода инфекции у мышей.

Мышиной модели кожного лейшманиоза характерно использование размер повреждения в качестве меры следовать инфекций продольно. Хотя хорошие оценки прогрессирования заболевания, поражения размер зависит от степени воспалительной реакции в дополнение к скорости репликации паразита в тканях. Мыши должны быть умерщвлены в конце эксперимента, чтобы фактически измеряют паразитную нагрузку. ИВИС могут быть использованы для оценки прогрессирования паразита нагрузки продольно в кожных тканях мышей, инфицированных видов Leishmania, которые вызывают кожного лейшманиоза. Продемонстрированный на рисунке 3, BALB / с мышей заражали подкожно в день 0 10 5 л Mexicana выражения люциферазы и отображается на последовательных недель после заражения. На рис.3, экспонаты представитель изображений в 10-31 недель после заражения. Те же данные представлены в количественной форме на рис 3B. Важно отметить, что количество паразитов на инфекцию сайт может быть количественно ИВИС до поражения можно обнаружить другими методами.

Со временем, прогрессивное увеличение биолюминесценции соответствует увеличению паразита чисел. Сигнала, то есть фотонов / паразит / сек, может варьироваться в зависимости от паразита числа, ткань местоположение, фазы роста и паразита здоровья в естественных условиях. Поэтому очень важно для калибровки отношения между паразитами и люминесценции, прежде чем приступить, что биолюминесценции прямо пропорциональна паразита чисел. В случае с Л. основные 15 или L. Mexicana, 16, как представляется, сравнительно мало затухание биолюминесценции в amastigotes в поражениях пяте относительно promastigotes. Предварительные данные показывают, что затухание может быть более глубоким для Л. chagasi infantum 17 или L. braziliensis 15.

Рисунок 1
Рисунок 1. Кинетика люциферазы обнаружения. Кинетический анализ распределения люциферин было проведено с целью установить оптимальное время для визуализации инфекции Leishmania в печени. Мыши были инфицированы IV с 10 7 L. i. chagasi pIR1SAT-LUC (А). ) Четыре инфицированных мышей были обследованы вместе с одним неинфицированным мыши после 5 недель инфекции. Люциферин вводили IP на все пять мышей и изображения были собраны каждые две минуты в течение 24 минут. ROI были отобраны и люминесценции была измерена и количественно (B).

Рисунок 2
Рисунок 2. Оценка эффективности прививки паразита. Визуализации и количественной биолюминесцентного паразитов Leishmania во время инфекции с ИВИС. Дикого типа BALB / с мышам вводили внутрикожно в нижнем правом фланге с HBSS (макет) или трансгенных Leishmania i. chagasi Л. i. chagasi pIR1SAT-LUC (А). Мышей затем анализируются с технологией ИВИС изображений через час после прививки. ) Черно-белую фотографию мышей было принято непосредственно перед люминесцентными сигнала (интенсивности света) была измерена. Красные стрелки указывают на месте инъекции на каждомживотного. Б) псевдо-цветное изображение свечения накладывается на фотографию. C) Регионы интереса (ROI), были отобраны (красные кружки) и люминесценции количественно в каждом ROI. Данные представляют собой чистые люминесценции зараженных ROI минус ROI фиктивных инфицированы.

Рисунок 3
Рисунок 3. Долгосрочные инфекции паразит вызывает инфекцию у человека кожный лейшманиоз. Время Конечно оценки паразитические нагрузки в одного животного вводили биолюминесцентного Leishmania Mexicana pIR1SAT-LUC (А). Дикого типа BALB / с мыши вводили подкожно в заклад с 100000 стационарной фазы трансгенных Leishmania Mexicana pIR1SAT-LUC (А). ИВИС были собраны данные с зараженных мыши на указанное число недель после заражения. ) Псевдо-цветные изображения свечения были наложены на черно-белые фотографии из соответствующих моментов времени. В) чистая рентабельность была определена путем измерения люминесценции в инфицированных скакательного и вычитание фона ROI от контралатеральной неинфицированных скакательного был графике. Точечная диаграмма представляет собой чистую рентабельность инвестиций в различные моменты времени после заражения.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

В естественных изображений системы (ИВИС) предоставляет метод для всего изображения животных или в естественных изображений экспериментальных моделях инфекции различных форм лейшманиоза. 18,16 Leishmania sрр. паразиты могут быть спроектированы, чтобы выразить люциферазы светляков на уровне, который обнаружен в естественных условиях с технологией ИВИС изображений. Одним из основных преимуществ этого метода является то, что она позволяет неинвазивной визуализации Leishmania sрр. внутри живого животного-хозяина. Этот метод был применен к другим инфекционным заболеванием моделей, с использованием возбудителей инфекционных заболеваний, которые могут выразить трансгены. 19 20 Кроме того, ИВИС была использована в качестве модели для оценки лекарственной терапии Leishmania основные инфекции в кожу C57BL / 6 мышей. 16,21

Есть некоторые важные оговорки и ограничения этого метода. Сила светового сигнала обнаружен ПЗС-камеры могут быть затронуты расположение паразитов в млекопитающего, по силе выражения в люциферазы паразитов, от наличия сопутствующих факторов для реакции окисления D-люциферин и поглощения света вышележащими тканями. Кроме того, уровень сигнала в печени и селезенке слабее на уровне фотонов на паразита в секунду, чем сигнал в кожу, вероятно из-за тушения местного кровоснабжения и вышележащих тканей. Количественная оценка испускаемые фотоны могут быть использованы для сравнения прогрессивные инфекции у одного животного в течение долгого времени, или в той же ткани между животными. 16 Тем не менее, пока дальнейшая оптимизация, эти предостережения будет ограничивать чувствительность и, следовательно, полезность метод количественной оценки глубокие инфекции с visceralizing Leishmania sрр. Наконец, изображения, вероятно, будут слабее в черном (например C57BL / 6) мышей, чем в белом (например, BALB / с) мышей. Бритье кожи волосы вышележащие области интереса могут быть полезны в обнаружении сигнала от черных мышей.

Дополнительные соображения необходимо проверить ИВИС как количественная мера паразита нагрузок. Сравнения между микроскопии, КПЦР и ИВИС были сделаны в нескольких случаях, но необходимо будет с каждой системой для проверки использования метода в качестве меры прогрессирования заболевания. 22 16 Новые методы для работы с изображениями появляются, который может быть связан с биолюминесценции изображений. 16 В дополнение к трансгенным паразитов, животных-хозяев могут быть спроектированы, чтобы выразить биолюминесцентного или флуоресцентными молекулами. Дальнейшие исследования с помощью этой техники может включать в себя животных выразив трансгенов в конкретных сотовой отсеков для выявления факторов хозяина, участвующих в патогенезе и паразитов одновременно.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Нет конфликта интересов объявлены.

Acknowledgements

Эта работа была частично финансируется за счет гранта заслуги Обзор от Департамента по делам ветеранов, по NIH гранты AI045540, AI067874, AI076233-01 и AI080801 (MEW), а также AI29646 (SMB). Работа выполнена частично при финансировании КТ и JG НИЗ T32 AI07511.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
D-Luciferin Potassium Salt Reagent Caliper Life Sciences 122796
IVIS Imaging System 200 Series Equipment Caliper Life Sciences Other IVIS models that can be used include: Lumina II, Lumina XR, Kinetic, and Spectrum.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Capul, A. A., Barron, T., Dobson, D. E., Turco, S. J., Beverley, S. M. Two functionally divergent UDP-Gal nucleotide sugar transporters participate in phosphoglycan synthesis in Leishmania major. J Biol Chem. 282, 14006-14017 (2007).
  2. LeBowitz, J. H., Coburn, C. M., McMahon-Pratt, D., Beverley, S. M. Development of a stable Leishmania expression vector and application to the study of parasite surface antigen genes. Proc Natl Acad Sci U S A. 87, 9736-9740 (1990).
  3. Mureev, S., Kushnir, S., Kolesnikov, A. A., Breitling, R., Alexandrov, K. Construction and analysis of Leishmania tarentolae transgenic strains free of selection markers. Mol Biochem Parasitol. 155, 71-83 (2007).
  4. Chakkalath, H. R. Priming of a beta-galactosidase (beta-GAL)-specific type 1 response in BALB/c mice infected with beta-GAL-transfected Leishmania major. Infect Immun. 68, 809-814 (2000).
  5. Sacks, D. L., Perkins, P. V. Identification of an infective stage of Leishmania promastigotes. Science. 223, 1417-1419 (1984).
  6. da Silva, R., Sacks, D. L. Metacyclogenesis is a major determinant of Leishmania promastigote virulence and attenuation. Infect Immun. 55, 2802-2806 (1987).
  7. Spath, G. F., Beverley, S. M. A lipophosphoglycan-independent method for isolation of infective Leishmania metacyclic promastigotes by density gradient centrifugation. Exp Parasitol. 99, 97-103 (2001).
  8. Scott, P., Caspar, P., Sher, A. Protection against Leishmania major in BALB/c mice by adoptive transfer of a T cell clone recognizing a low molecular weight antigen released by promastigotes. J Immunol. 144, 1075-1079 (1990).
  9. Belkaid, Y. The role of interleukin (IL)-10 in the persistence of Leishmania major in the skin after healing and the therapeutic potential of anti-IL-10 receptor antibody for sterile cure. J Exp Med. 194, 1497-1506 (2001).
  10. Wilson, M. E. Local suppression of IFN-gamma in hepatic granulomas correlates with tissue-specific replication of Leishmania chagasi. J Immunol. 156, 2231-2239 (1996).
  11. McElrath, M. J., Murray, H. W., Cohn, Z. A. The dynamics of granuloma formation in experimental visceral leishmaniasis. J Exp Med. 167, 1927-1937 (1988).
  12. Ato, M. Loss of dendritic cell migration and impaired resistance to Leishmania donovani infection in mice deficient in CCL19 and CCL21. J Immunol. 176, 5486-5493 (2006).
  13. Ahmed, S. Intradermal infection model for pathogenesis and vaccine studies of murine visceral leishmaniasis. Infect Immun. 71, 401-410 (2003).
  14. Kamala, T. Hock immunization: a humane alternative to mouse footpad injections. J Immunol Methods. 328, 204-214 (2007).
  15. Lang, T., Goyard, S., Lebastard, M., Milon, G. Bioluminescent Leishmania expressing luciferase for rapid and high throughput screening of drugs acting on amastigote-harbouring macrophages and for quantitative real-time monitoring of parasitism features in living mice. Cell Microbiol. 7, 383-392 (2005).
  16. Brittingham, A., Miller, M. A., Donelson, J. E., Wilson, M. E. Regulation of GP63 mRNA stability in promastigotes of virulent and attenuated Leishmania chagasi. Mol Biochem Parasitol. 112, 51-59 (2001).
  17. Roy, G. Episomal and stable expression of the luciferase reporter gene for quantifying Leishmania spp. infections in macrophages and in animal models. Mol Biochem Parasitol. 110, 195-206 (2000).
  18. Contag, C. H. Photonic detection of bacterial pathogens in living hosts. Mol Microbiol. 18, 593-603 (1995).
  19. Hardy, J., Margolis, J. J., Contag, C. H. Induced Biliary Excretion of Listeria monocytogenes. Infect. Immun. 74, 1819-1827 (2006).
  20. Lecoeur, H. Optimization of Topical Therapy for Leishmania major Localized Cutaneous Leishmaniasis Using a Reliable C57BL/6 Model. PLoS Negl Trop Dis. 1, e34-e34 (2007).
  21. Lang, T., Lecoeur, H., Prina, E. Imaging Leishmania development in their host cells. Trends Parasitol. 25, 464-473 (2009).

Comments

3 Comments

  1. thank you.i,am lecturer in vet.college.i wants any formation about vet. parasitology ,also books. please.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    April 6, 2012 - 11:55 AM
  2. thank you.i,am lecturer in vet.college.i wants any formation about vet. parasitology ,also books. please.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    April 6, 2012 - 11:55 AM
  3. thank you.i,am lecturer in vet.college.i wants any formation about vet. parasitology ,also books. please.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    April 6, 2012 - 11:55 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics