Purifying Plasmid-DNA aus Bakterien-Kolonien mit dem Qiagen Miniprep Kit

Biology

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Zhang, S., Cahalan, M. D. Purifying Plasmid DNA from Bacterial Colonies Using the Qiagen Miniprep Kit. J. Vis. Exp. (6), e247, doi:10.3791/247 (2007).

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Abstract

Plasmid DNA Aufreinigung aus E. coli ist ein Kern-Technik für die molekulare Klonen. Kleine Reinigung (Miniprep) von weniger als 5 ml Bakterienkultur ist ein schneller Weg für Klon Überprüfung oder DNA-Isolierung, durch weitere enzymatische Reaktionen (Polymerase-Kettenreaktion und Restriktionsverdau) gefolgt. Hier haben wir das allgemeine Verfahren der Miniprep durch die QIAGEN QIAprep 8 Miniprep Kit, mit dem Ziel der Einführung dieser hoch effizienten Technik den allgemeinen Anfänger für molekularbiologische Techniken auf Video aufgezeichnet. Das gesamte Verfahren ist auf alkalischen Lyse von E. coli Zellen, die durch Adsorption von DNA an Silica folgte in der Gegenwart von hohen Salz. Es besteht aus drei Schritten: 1) Vorbereitung und Abwicklung von einer bakteriellen Lysat, 2) Adsorption von DNA an die Membran QIAprep, 3) Waschen und Elution von Plasmid-DNA. Alle Schritte werden ohne den Einsatz von Phenol, Chloroform, CsCl, Ethidiumbromid, und ohne Alkohol-Fällung durchgeführt. Es dauert in der Regel weniger als 2 Stunden, um die gesamte Vorgang zu beenden.

Comments

6 Comments

  1. A very helpful and clear demonstration. Thanks!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 22, 2008 - 9:33 PM
  2. With this kit is it best to do an alcohol precipitation after or unnecessary?   Thank you

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 4, 2008 - 7:26 AM
  3.   Hello from QIAGEN, There is no need to do an alcohol precipitation after this procedure - the DNA is ready to use as eluted from the QIAprep column. You can see the handbook for this kit online here if you would like:     http://www1.qiagen.com/literature/handbooks/literature.aspx?id=1000²48 -QIAGEN Technical Service     http://www1.qiagen.com/Contact/QIAGENWorldWide.aspx

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 4, 2008 - 8:18 AM
  4. By using this kit, what can I do if I'd like to increase the yield of plasmid with a low copy number? What is the maximum volume of culture that can be harvested?
    Thank you very much.

    Reply
    Posted by: Soon Keat O.
    July 18, 2009 - 10:51 AM
  5. Your demonstration is very good but you didn't mentioned the volumes of buffer added and the speed and time of centrifuge

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 2, 2010 - 10:40 AM
  6. Thanks for doing that video. There's not a lot of theory in there, but it is surely helpful for beginners. I'm holding onto it for future coworkers.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 23, 2010 - 5:02 AM

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