Qiagen Miniprep किट का उपयोग बैक्टीरियल कालोनियों से प्लास्मिड डीएनए शुद्ध

Biology

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Zhang, S., Cahalan, M. D. Purifying Plasmid DNA from Bacterial Colonies Using the Qiagen Miniprep Kit. J. Vis. Exp. (6), e247, doi:10.3791/247 (2007).

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Abstract

ई. कोलाई से प्लास्मिड डीएनए शुद्धीकरण आणविक क्लोनिंग के लिए एक कोर तकनीक है. बैक्टीरियल संस्कृति के कम से कम 5 मिलीलीटर से लघु शुद्धि (miniprep) क्लोन सत्यापन या डीएनए अलगाव, आगे एंजाइमी प्रतिक्रियाओं (पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन और प्रतिबंध एंजाइम पाचन) द्वारा पीछा के लिए एक त्वरित तरीका है. यहाँ, हम QIAGEN QIAprep 8 Miniprep किट के माध्यम से miniprep की सामान्य प्रक्रियाओं, आण्विक जीव विज्ञान तकनीक के लिए यह सामान्य शुरुआती के लिए इस अत्यधिक कुशल तकनीक शुरू करने के लिए लक्ष्य वीडियो दर्ज की. पूरी प्रक्रिया सिलिका पर डीएनए के सोखना द्वारा उच्च नमक की उपस्थिति में पीछा ई. कोलाई कोशिकाओं के alkaline lysis पर आधारित है. यह तीन चरणों के होते हैं: 1) और एक जीवाणु lysate, 2) QIAprep झिल्ली, 3) धोने और प्लास्मिड डीएनए के elution पर डीएनए के सोखना की तैयारी समाशोधन. सभी चरणों phenol, क्लोरोफॉर्म, CSCL, ethidium ब्रोमाइड, के उपयोग के बिना और शराब वर्षण के बिना प्रदर्शन कर रहे हैं. यह आमतौर पर कम से कम 2 घंटे लगते हैं पूरी प्रक्रिया खत्म.

Comments

6 Comments

  1. A very helpful and clear demonstration. Thanks!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 22, 2008 - 9:33 PM
  2. With this kit is it best to do an alcohol precipitation after or unnecessary?   Thank you

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 4, 2008 - 7:26 AM
  3.   Hello from QIAGEN, There is no need to do an alcohol precipitation after this procedure - the DNA is ready to use as eluted from the QIAprep column. You can see the handbook for this kit online here if you would like:     http://www1.qiagen.com/literature/handbooks/literature.aspx?id=1000²48 -QIAGEN Technical Service     http://www1.qiagen.com/Contact/QIAGENWorldWide.aspx

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 4, 2008 - 8:18 AM
  4. By using this kit, what can I do if I'd like to increase the yield of plasmid with a low copy number? What is the maximum volume of culture that can be harvested?
    Thank you very much.

    Reply
    Posted by: Soon Keat O.
    July 18, 2009 - 10:51 AM
  5. Your demonstration is very good but you didn't mentioned the volumes of buffer added and the speed and time of centrifuge

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 2, 2010 - 10:40 AM
  6. Thanks for doing that video. There's not a lot of theory in there, but it is surely helpful for beginners. I'm holding onto it for future coworkers.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 23, 2010 - 5:02 AM

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