Trasplante de intestino delgado en ratones

Biology

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Summary

El pequeño ratón modelo de trasplante de intestino ha sido reconocido como una herramienta importante para estudiar mechanismes de rechazo inmunológico y la pantalla de nuevos fármacos inmunosupresores. Sin embargo, este modelo se limita al uso porque las técnicas en cuestión es un desafío muy técnico. Ahora se introduce la técnica modificada.

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Liu, F., Kang, S. Small Bowel Transplantation In Mice. J. Vis. Exp. (7), e258, doi:10.3791/258 (2007).

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Abstract

Desde 1990, el desarrollo de la inmunosupresión basada en tacrolimus y las técnicas quirúrgicas, el arsenal cada vez mayor de los potentes medicamentos inmunosupresores, la profilaxis de la infección, y la selección de pacientes adecuados ayudado a mejorar actuarial de los injertos y las tasas de supervivencia de los pacientes para todos los tipos de trasplante de intestino. Los pacientes con fallo intestinal irreversible y complicaciones de la nutrición parenteral ahora debe ser evaluada en cuenta para el trasplante de intestino delgado. Sin embargo, las tasas de supervivencia para el trasplante de intestino delgado han sido lentos en mejorar cada vez más se compara favorablemente con insuficiencia renal, hígado, corazón y pulmón. El trasplante de intestino delgado sigue siendo insatisfactoria en comparación con otros órganos. Un mayor progreso puede depender de una mejor comprensión de la inmunología y la fisiología del injerto y puede ser facilitado por los modelos animales. Un uso más amplio de pequeño ratón modelo de trasplante de intestino es necesario para el estudio de la inmunología y la fisiología del intestino trasplante, así como métodos eficientes para el diagnóstico de rechazo inicial. Sin embargo, este modelo se limita al uso porque las técnicas en cuestión es un gran desafío técnico. Hemos desarrollado una técnica modificada. Al hacer la anastomosis de la vena porta y la vena cava inferior, dos suturas se realizan en el vértice proximal y distal de la cúspide cava inferior del receptor s vena con vena porta del donante s. La pared izquierda de la vena cava inferior y la vena porta donante s está cerrada con sutura continua en el interior de la vena cava inferior después, después de un nudo con la estancia vértice proximal de sutura de la pared derecha de la vena cava inferior y en el portal de los donantes s la vena se cierran con suturas continúa fuera de la cueva inferior vena con 10-0. Este método es más fácil de realizar debido a la anastomosis se realiza sólo en un lado de la vena cava inferior y suturas 10-0 es el tamaño adecuado para evitar el sangrado y trombosis. En este artículo, ofrecemos detalles de la técnica para complementar el vídeo.

Protocol

Donantes y la preparación de la cosecha del intestino delgado:

  1. El ratón es ansetheized con una inyección intraperitoneal de pentobarbital en posición supina y se coloca en el campo de operación.
  2. Una larga incisión en el abdomen línea media se hace. El proximal del yeyuno se identifica y se liga con 6-0 puntos de sutura. Adjunta vasos mesentéricos distal de la eliminatoria yeyuno se ligan con 8-0 puntos de sutura.
  3. La parte distal del íleon se identifica y se liga con 6-0 puntos de sutura. Los vasos mesentéricos adjunta al íleon distal se ligan con 8-0 puntos de sutura.
  4. El portal se expone a partir de los tejidos que rodean la grasa y se adjunta, se liga y se dividieron las venas pancreaticoduodenal y del bazo.
  5. La aorta abdominal se expone y se expone la arteria mesentérica superior de los tejidos circundantes.
  6. 1 ml de heparina (10u/ml) se inyecta en la vena cava inferior para heparinización.
  7. La vena porta se divide en el hilio del hígado, y la arteria mesentérica superior está separado de la aorta, que incluye un parche de Carrel de la aorta.
  8. El yeyuno y el íleon distal se divide a los vínculos. El intestino delgado se retira, luego se almacena a 4 ° C en solución salina.

Receptor y el trasplante de preparación:

  1. El ratón es ansetheized con una inyección intraperitoneal de pentobarbital en posición supina y se coloca en el campo de operación.
  2. Una larga incisión en el abdomen línea media se hace. Contenido abdominal se retraen fuera del abdomen con una gasa para exponer la aorta abdominal y la vena cava inferior.
  3. Las ramas de la aorta abdominal y la vena cava inferior se exponen y se liga con 10-0.
  4. La ligadura proximal y distal se coloca alrededor de la aorta y la vena cava inferior, respectivamente.
  5. El venotomía se hace en la vena cava inferior del receptor con una aguja de calibre 30. La apertura se amplía a una longitud igual a la de la vena porta del donante con micro-tijeras.
  6. La aortotomía se hace en la aorta abdominal del receptor con una aguja de calibre 30. La apertura se amplía a una longitud de igual a parchear el donante Carrel arteria mesentérica superior con micro-tijeras
  7. Las incisiones de la aorta abdominal y la vena cava inferior son perfundidos con solución salina.
  8. Intestino delgado del donante se coloca en el lado izquierdo del abdomen del receptor que cubre con una gasa.
  9. El suturas se colocan en el vértice proximal y distal de la aorta ápice receptor abdominal con el parche de Carrel superiores donante la arteria mesentérica.
  10. La anastomosis de la parte derecha de la aorta abdominal del receptor y el donante parche arteria mesentérica superior Carrel se realizan primero con puntos de sutura continua.
  11. Dos suturas se hizo por primera vez en el vértice proximal y distal de la cúspide cava inferior del receptor con la vena portal del donante para la anastomosis de la vena porta del donante y la vena cava inferior del receptor vena.
  12. La pared izquierda de la vena cava inferior y la vena porta del donante se cierra con suturas continua en el interior de la vena cava inferior.
  13. Después de un nudo con el hilo de sutura ápice estancia proximal, la pared derecha de la vena cava inferior y la vena porta del donante se cierra con suturas continúa fuera de la cueva inferior vena.
  14. Intestino delgado del donante se entrega a la parte derecha del abdomen del receptor. En la pared derecha de la aorta abdominal del receptor y del donante anastomosis arteria mesentérica superior se cierra con suturas continuar.
  15. Después de todo anastomosis se realiza la ligadura distal se elimina primero que debe verificar que el sangrado de la anastomosis.
  16. Si hay poco o ningún sangrado de la anastomosis proximal de la ligadura se ha eliminado. Intestino delgado del donante se llena de sangre inmediatamente, el color del intestino delgado se convierte en rojo.
  17. El extremo distal del íleon injerto se anastomosa extremo-a-lado a la parte proximal del yeyuno del destinatario con una sutura continua de 8-0 puntos de sutura.
  18. El yeyuno proximal del donante se exterioriza como un archivo. Estoma y se fija a la piel en el lado derecho de la pared abdominal con cuatro puntos de sutura a cada lado de 8-0 puntos de sutura
  19. Los intestinos están dentro de la cavidad abdominal y se cierra con suturas 6-0 continuar.
  20. El ratón receptor se coloca en la zona caliente. Después de una hora, el destinatario recupere.

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Discussion

La única respuesta inmune después de trasplante de intestino delgado ha sido objeto de una amplia investigación mediante un modelo de pequeño trasplante de intestino en ratones. Las reacciones inmunológicas básicas, tales como injerto-contra-reacciones, huésped contra la reacción del injerto, una combinación de ambas reacciones, el rechazo crónico y la tolerancia han participado. Casi todos los fármacos inmunosupresores de relevancia clínica demostrada o con posibilidades han sido probados por su eficacia en modelo pequeño trasplante de intestino.

Hemos modificado el pequeño ratón técnica de trasplante de intestino en varias formas de mejorar la eficiencia y las tasas de éxito:

  1. El interior del intestino delgado de los donantes debería mantenerla limpia y sin ningún heces izquierda.
  2. El borde del parche de Carrel de la aorta de la arteria mesentérica superior se debe dividir el tamaño de suave y de igualdad con la apertura de la aorta abdominal del receptor.
  3. No toque la vena porta con la arteria mesentérica superior, cuando las anastomosis de la vena porta con la cava inferior vena del receptor. Debido a que el portal es la vena más larga que la arteria mesentérica superior.
  4. El intestino delgado se debe colocar en el centro del abdomen y mantener la arteria mesentérica superior y la vena porta en la tensión adecuada, cuando la reconstrucción de la circulación sanguínea para evitar la trombosis.
  5. La arteria mesentérica superior debe mantener la tensión adecuada cuando el intestino se volvió pequeña hostia en la cavidad abdominal para evitar la trombosis después de cerrar el abdomen.
  6. 0,1 ml cefuroxine (20mg/kg) se quedan en la cavidad abdominal para evitar la infección antes de cerrar el abdomen.
  7. Para asegurarse de no dejar que el flujo de las heces en el abdomen cuando se realiza la actividad de la anastomosis del intestino delgado para evitar la infección después de la operación.
  8. No dañar los vasos mesentéricos, cuando la cosecha del intestino delgado para evitar la necrosis del intestino delgado después de la operación.

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Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Sutures 10-0 and 11-0 MONOSOF
Microscope Unversal S3 Carl Zeiss, Inc.

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References

  1. SJ, M. iddleleton Is intestinal transplantation now an alternative to home parenteral nutrition. Proc Nutr Soc. 66, (3), 316-320 (2007).
  2. Lopez Santamaria, M., Hernadez Oliveros, F. Indications, techniques, and outcomes of small bowel transplant. Nutr Hosp. 22, Suppl 2. 113-123 (2007).
  3. Grant, D. Current results of intestinal transplantation. The International Intestinal Transplant Registry. Lancet. 347, (9018), 1801-1803 (1996).
  4. Timmermann, W., Gasser, M., Meyer, D., Kellersmann, R., Gassel, H. J., Otto, C., Thiede, A. Progress in experimental intestinal transplantation in small animal models. Acta Gastroenterol Belg. 62, (2), 216-220 (1999).

Comments

1 Comment

  1. Hi
    Dr Fengchun Liu
    Congratulations for excellent video.
    I am from Brazil and I fellow in University in São Paulo.
    I started my trainning small bowell transplantation in mice. Now it is third transplantation, your video it is much important for trainining.
    Thank´s

    Reply
    Posted by: Anonymous
    April 14, 2010 - 9:23 PM

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