Ven Trombozu Elektrolitik inferior vena kava Modeli (EIM)

Medicine
 

Summary

Venöz endotel aktivasyonu ve kısmi kan staz, Virchow triadı iki bileşeni nedeniyle tipi trombüs oluşumu inferior vena kava sonuçlarının iç yüzeyi endotel aktivasyon elektrolitik indüksiyon.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Diaz, J. A., Wrobleski, S. K., Hawley, A. E., Lucchesi, B. R., Wakefield, T. W., Myers, Jr., D. D. Electrolytic Inferior Vena Cava Model (EIM) of Venous Thrombosis. J. Vis. Exp. (53), e2737, doi:10.3791/2737 (2011).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Hayvan modelleri, trombüs oluşumu, trombüs çözünürlük çalışma ve potansiyel terapötik bileşiklerin (1) test etmek için, derin ven trombozu (DVT) araştırma hayati bir rol hizmet. DVT tedavisi ve önlenmesinde kullanılmak üzere yeni bileşikler şu anda geliştirilmektedir. Etkilenen bir tromboze ven potansiyel terapötik antagonisti bileşiklerin teslim sorunlu olmuştur. Tedavi uygulamaları kapsamında, son zamanlarda kısmi staz kullanır ve sürekli olarak büyük bir damar içinde trombüs oluşturduğu bir model kurulmuştur. Elektrolitik İnferior vena kava Modeli (EIM) sürekli kan akımı varlığı trombüs oluşumuna izin DVT fare modeli. Bu model, dinamik bir moda trombüs ile temas halinde olduğu için tedavi ajanları sağlar ve DVT (1) diğer modellere göre daha duyarlıdır. Buna ek olarak, bu trombozun modeli yakından trombüs oluşumu klinik durumlar simüle ve venöz endotel hücre aktivasyonu, lökosit göçü, venöz thrombogenesis, çalışma ve tedavi uygulamaları (1) test etmek için idealdir. EIM modeli, teknik olarak basit, kolay tekrarlanabilir, tutarlı trombüs boyutları oluşturur ve analitik amaçlar için gerekli olan (yani trombüs ve damar duvarı) için büyük bir örnek sağlar.

Protocol

1. Fare Anestezi Prosedürleri

  1. Hayvanlar kendi kafes çıkarılır ve% 2 izofluran ve dakikada 0,5 litre (buharlaştırıcı kontrollü) akış hızında% 100 oksijen gazı indüksiyonu için ameliyat öncesi anestezi indüksiyon odasına yerleştirilir.
  2. Fare, anestezi indüksiyon odasında sedasyon odasına çıkarıldı ve ventral karın, bir saç tüy dökücü (1 dak) kullanılması durumunda elektrik kesme makineleri ile traş, ya da odanın içinde korunur.
  3. Hala sedasyon altında, tartılır, sonra izofluran ve oksijen kullanarak bir burun konisi genel anestezi altında bir sıcak su sirkülasyon ısıtma cihazı dorsal recumbancy yerleştirilen steril oftalmik merhem ve gözleri ile yağlanır. Bu noktada, dakikada 0.2 litre oksijen oranı azalır.
  4. Karın klorheksidin solüsyonu ile püskürtülür (klorheksidin diasetat hızla bacterialcidal ve kalıcı) ve steril gazlı bez ile üç kez sildi ya da cerrahi bölge temiz olana kadar.

2. Fare Mikro-cerrahi ve Kurtarma Prosedürleri

  1. Ventral orta hat kesi (2 cm), deri ve karın duvarı ile karın açığa iris makası ile yapılır. Gazlı bez steril salin batırılmış 2x2 hayvanın sol tarafında bağırsaklarda yansıtmak için kullanılır. Bir fare süzgeç görselleştirme izin inferior vena kava (IVC) yerine konur.
  2. Bu noktada, izofluran% 2 oranında bir bakım seviyesi azalır ve oksijen oranı, cerrahi işlemin geri kalanı için, dakikada 0.2 litre kalır.
  3. Künt diseksiyon steril bir aplikatör çubukla ve ekstra hassas iris yarım kavisli doku forseps kullanarak kolaylaştırılır. Bakım son derece kırılgan olduğu için fare dokuları ele alınmalıdır.
  4. Bütün böbrek damarları iliak bifurkasyon IVC yan dalları, non-reaktif 7-0 prolen sütür ile bağlandı. Geri dalları patent kaldı.
  5. Gümüş kaplı bakır tel (KY-30-1-GRN, Electrospec, Dover, NJ) bağlı elektrolitik IVC modeli (EIM), paslanmaz çelik bir 25G iğne, maruz kaudal IVC, (Şekil 1) eklenir ve ön duvar (anot) karşı konumlandırılmış.
  6. Başka bir tel devresi (katot) subkutan tamamladıktan yerleştirilir.
  7. 15 dakika içinde 250 μAmps güncel bir Çim S48 kare dalga stimülatörü ve sabit bir akım birimi (Çim Teknolojileri, bir Astro-Med, Inc, West Warwick, RI) kullanılarak uygulanmıştır. Trombojenik bir çevre ve daha sonraki trombüs oluşumu teşvik IVC endotel yüzey aşındırmaya elektroliz toksik ürünlerin oluşumunda doğrudan güncel sonuçlar.
  8. 15 dakika sonra, iğne çıkarılır ve kanamayı önlemek için alana sahip bir pamuklu çubukla hafifçe temas halinde tutulur
  9. Sahte hayvanlarda, iğne akım uygulaması olmadan, IVC içine yerleştirilir ve sonra kaldırılır.
  10. Iki katmanlı bir moda laparotomi sitesi kapalı. Laboratuvarımız sürekli bir desen 5-0 Vicryl, sentetik dikiş, karın duvarı kapatmak için kullanır. Yapışkan deri tutkal cilt kapatmak için kullanılır. Çıkarılması için herhangi bir dış sütür vardır.
  11. Fare sonra yakın bir ısıtma lambası altında (24 inç uzakta kafes dk mesafe) (2 saat 45 dakika) ameliyat sonrası gözlenen bireysel bir fare kafes kurtarıldı, daha sonra kendi orijinal konut döndü. Bu çalışmanın amacı engel değilse, ağrı kesici ilaçlar ve anti-inflamatuar ajanlar kullanılabilir. Bilimsel ağrı kesici ilaçlar alıkoyma gerekçesi, veteriner ve ICUCA onayına ihtiyaç vardır. Laboratuvarımız Buprenorfin ,0.05-0 0,1 mg / kg SQ fareler için mükemmel bir pre-ve post-operatif ağrı kesici olduğunu tespit etmiştir. Lidokain az 4mg/kg (0.4 ml / kg% 1 solüsyon) ek olarak, sistemik analjezikler deneysel sonuçlar karıştırıcı kesi yeri aşılanan.
  12. Biz genellikle post-operatif derin ven trombozuna bağlı olumsuz etkileri tecrübe etmezler. Bununla birlikte, post-operatif olumsuz etkileri spontan anestezik ölüm, cerrahi kan kaybı, ve sinir travma nedeniyle kısmi parezi içerebilir. Kurtarmak için yavaş beslenen hayvanların nutria jel veya nemli chow hayvanın kurtarma kolaylaştırmak için kafesin zeminine yerleştirilen olabilir. Sever post-operatif komplikasyonlar ile hayvanların insanca ötenazi olmalı.
  13. Belirlenen süre noktada, ötenazi Ötenazi kemirgenler için Amerikan Veteriner Tıp Derneği Kuralları tarafından belirlenen öneriler doğrultusunda insanca yapılır.

3. Temsilcisi Sonuçlar

EIM, sürekli kan akımı varlığı trombüs oluşturan bir model. Aşağıdaki rakamlar bu romanı modeli araştırılmıştır parametreler gösteriyor.

Şekil 1
25G paslanmaz çelik Şekil 1 definesthe anatomik alaniğne, gümüş kaplı bakır tel (KY-30-1-GRN, Electrospec, Dover, NJ) eklenir. Bir lenf düğümü neredeyse mevcut ve kaudal IVC bulmak için bir dönüm noktası olarak yardımcı olur unutmayın.

Şekil 2
Şekil 2: 2 gün, farklı türlerin EIM sonra Trombüs ağırlık . Beklendiği gibi, trombüs ağırlık PAI-1 KO farelerde daha düşük ve hiperkoagülabilitesi Delta CT farelerde (^ BT) daha büyük oldu.

Şekil 3
Şekil 3: Çözünebilir P-selektin, derin ven trombozu için yapıcı, farklı türlerin ölçüldü. , En yüksek düzeyde hiperkoagülabilitesi delta BT farelerde bulundu iken, en düşük seviyelere PAI-1 KO farelerde bulundu.

Şekil 4
Şekil trombüs ağırlığı ve P-selektin farklı suşları bulunmuştur arasında 4 Korelasyon. Not, kısa trombüs boyutu oluşturulan grup, tespit edilen P-selektin çözünür (PAI-1 KO farelerin) en düşük oldu. Trombüs büyük boyutu oluşturulan grup, tespit edilen P-selektin çözünür (hiperkoagülabilitesi delta BT) en yüksek olduğu.

Şekil 5
Şekil 5: kan akımının varlığını göstermek için, ultrason EIM geçiren farelerde yapıldı. Şekil 5, bir fare EIM 2 gün sonra yapılan ultrason gösterir. Sonra numune hasat edildi. Trombüs şekli akışının huzurunda trombüs oluşumu öneririz Not

Discussion

Fare in vivo deneyler için mükemmel bir araştırma aracı. Böylece, hastalıklar veya patolojik durumları yakından taklit fare modellerinin geliştirilmesi gereklidir. Fotokimyasal (2), staz (3-4) ve mekanik travma (5-6): Çeşitli ven trombozu fare modelleri dahil olmak üzere DVT incelemek için kullanılır olmuştur. Ancak bu modellerin hiçbiri, sürekli kan akımı varlığı trombüs oluşturmak için bir iç endotel uyaran kullanın. EIM, IVC içinde elektrolitik uyaran kullanarak, kan akımının varlığı endotel aktivasyonu (1) venöz thrombogenesis teşvik etmektedir. Bu teknik olarak basit, kolay tekrarlanabilir ve yüksek hayatta kalma oranı (% 99) sahiptir. Elektroliz bir elektrik akımı oluşturmak için kullanılan olduğu gerçeğine rağmen, ısı oluşturulan değildir (1). EIM model klinik DVT yakından taklit ve bu nedenle, trombüs oluşumu ve çözünürlük içsel mekanizmaları çalışmak için değerli bir araç olarak hizmet vermektedir. EIM modeli tromboz hastalığa karşı yeni tedavi yaklaşımları gelişimi için de faydalıdır.

Disclosures

Çıkar çatışması ilan etti.

Acknowledgments

NIH 1P01HL089407-01A1 (Lawrence, PI), Hayvan Core A, NIH 1 K01 HL080962-01A2 (Myers, PI) tarafından desteklenir.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
DMEM Invitrogen ABCD1234

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Diaz, J. A., Hawley, A. E., Alvarado, C. M. Thrombogenesis with continuous blood flow in the inferior vena cava. A novel mouse model. Thromb Haemost. 104, 366-375 (2010).
  2. Eitzman, D. T., Westrick, R. J., Nabel, E. G. Plasminogen activator inhibitor-1 and vitronectin promote vascular thrombosis in mice. Blood. 95, 577-580 (2000).
  3. Myers, D., Farris, D., Hawley, A. Selectins influence thrombosis in a mouse model of experimental deep venous thrombosis. J Surg Res. 108, 212-221 (2002).
  4. Myers, D. D., Hawley, A. E., Farris, D. M. P-selectin and leukocyte microparticles are associated with venous thrombogenesis. J Vasc Surg. 38, 1075-1089 (2003).
  5. Pierangeli, S. S., Barker, J. H., Stikovac, D. Effect of human IgG antiphospholipid antibodies on an in vivo thrombosis model in mice. Thromb Haemost. 71, 670-674 (1994).
  6. Pierangeli, S. S., Liu, X. W., Barker, J. H. Induction of thrombosis in a mouse model by IgG, IgM and IgA immunoglobulins from patients with the antiphospholipid syndrome. Thromb Haemost. 74, 1361-1367 (1995).

Comments

2 Comments

  1. "After 15 minutes, the needle is removed and a cotton swab is held gently in contact with the area to prevent bleeding. "
    How about bleeding in the PAI mice group?

    In sham animals, the needle is placed into the IVC and then removed, without application of the current.
    How many minutes keep the needle in IVC?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 4, 2011 - 3:19 PM
  2. No bleeding was observed in PAI-1 KO mice.
    In order to mimic the experimental group, a needle was placed within the IVC for 15 minutes, without current administration in shams.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 4, 2011 - 3:48 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics