Author Produced

السريع في نقاط الفحص من كفاءة الرعاية تخثر الدم الكامل في Enoxaparin

Medicine
 

Summary

مظاهرة للمقايسة كمي السريع لتثبيط تجلط الدم من قبل المنخفضة الجزيئية الهيبارين الوزن، enoxaparin. يتم تقييم مساهمة enoxaparin عن طريق إزالة نفوذها من خلال الهضم مع heparinase. وترد تفاصيل أوفى وصف لفحص في ورقتنا المنشورة.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Inchiosa Jr., M. A., Pothula, S., Kubal, K., Sanchala, V. T., Navarro, I. Rapid Point-of-Care Assay of Enoxaparin Anticoagulant Efficacy in Whole Blood. J. Vis. Exp. (68), e3852, doi:10.3791/3852 (2012).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

هناك حاجة لفحص السريري لتحديد مدى فعالية anticoagulated دم المريض من قبل المنخفضة الجزيئية الهيبارين الوزن (LMWH)، enoxaparin. هناك أيضا حالات سريرية عاجلة حيث سيكون من المهم إذا كان من الممكن تحديد هذا بسرعة. تم تصميم الفحص الحالية لتحقيق ذلك. نحن فقط يعاير عينات دم الإنسان التي ارتفعت مع تركيزات معروفة من enoxaparin. ميزة أساسية للمقايسة الحاضر هو القياس الكمي لفعالية enoxaparin في عينة دم من المريض لإكمال المهينة الخمول مع heparinase. تمثل عينة أخرى تم هضمها عينة واحدة مع heparinase لمدة 5 دقائق عند 37 درجة مئوية، حالة المريض خط الأساس anticoagulated، وتم سحب عينات الدم في أنابيب اثنين Vacutainer (بيكتون ديكنسون-؛ فرانكلين البحيرات، NJ) التي تم ارتفعت مع enoxaparin. تقصير في المئة من الوقت تخثر في العينة heparinase المعالجة، بالمقارنة مع بaseline الدولة، أسفرت عن مساهمة من تخثر enoxaparin. استخدمنا، بطارية محمول تعمل أجهزة لقياس Hemochron 801 مرات تخثر (الدولية Technidyne شركة، اديسون، NJ). جهاز التحكم يوجد 2 حراريا (37 ° C) أنبوب فحص الآبار. أجرينا فحوصات في نوعين من خراطيش الفحص المتوفرة من الشركة المصنعة للأداة. تعديل لخرطوشة واحدة لزيادة حساسيتها. أزلنا الكاولين من خرطوشة FTK-ACT واسعة من قبل الشطف بالماء المقطر، ولم يتبق سوى سطح الزجاج من الأنبوب، ولعل الكشف عن المغناطيس، وتفعيل. دعونا هذا الاختبار لدينا الحد الأدنى من تنشيط (MAA). وقد تمت دراسة استخدام مقايسة تنشيط الحد الأدنى من قبلنا وغيرها. 2-4 خرطوشة الثانية التي تم دراستها هو تنشيط ثرومبوبلاستين الوقت الجزئي (APTT) مقايسة (A104). كما تم استخدام هذا الموردة من الشركة المصنعة. الآبار thermostated من صك وره لكل من يستخدم الهضم heparinase والمقايسات التخثر. يمكن أن تكتمل في غضون الفحص 10 دقيقة. وأظهرت الفحص MAA التغييرات القوية في الوقت تخثر بعد الهضم heparinase من enoxaparin على نطاق وتركيز السمات السريرية النمطية. عند 0.2 المضادة للشى وحدة دولية من enoxaparin لكل مل من عينة الدم، تسبب تراجع معدلات الهضم heparinase متوسط ​​9.8٪ (20.4 ثانية) في وقت تخثر؛ بسرعة 1.0 وحدة دولية لكل مل من enoxaparin كان هناك انخفاض 41.4٪ (148.8 ثانية). هذا التقرير يعرض فقط التطبيق التجريبي للفحص، ويجب تزال قيمته في عملية إعداد سريرية أن تنشأ.

Protocol

1. Heparinase إعادة إعماره

  1. يتم الحصول على heparinase مجفف بالتجميد I تجاريا (سيمنز، مطار نيوآرك لولاية ديلاوير، DadeHepzyme REF B4240-10) في قارورة تحتوي على 1 ميكروغرام من البروتين النقي. يذوب البروتين في 0.25 مل من المياه المالحة (0.9٪ كلوريد الصوديوم).

2. جمع عينات الدم

  1. يتم رسمها من قبل اثنين من عينات الدم إلى فراغ سترات الصوديوم (0.3 مل 0.109M؛ 3.2٪) مخزنة Vacutainer أنابيب (بيكتون ديكنسون، فرانكلين البحيرات، NJ)، وأنابيب على حد سواء قبل ارتفعت مع تركيز معروف من enoxaparin، وحجم الدم التي يتم رسمها هو 2.7 مل. المحتوى الكلي هو 3.0 مل ثم.

3. Heparinase الهضم

  1. يتم نقل، إلى أنبوب Vacutainer واحدة من محتويات القارورة heparinase التي يمكن أن يستنشق في حقنة (0.8 ميكروغرام من البروتين حوالي 0.2 مل؛؛ 80٪ من القارورة)؛ يضاف 0.2 مل من محلول ملحي (كلوريد الصوديوم 0.9٪) إلى الأنبوب الثاني، والتي هي بمثابة بازلالمعهد الوطني للإحصاء الدولة قبل القضاء على تأثير enoxaparin.
  2. توضع كل Vacutainer أنابيب الآبار في thermostated من جهاز Hemochron لمدة 5 دقائق. (تأسست كفاية وقت الهضم 5 دقائق مع heparinase في عملنا المنشورة سابقا. 1)

4. فحوصات التجلط

  1. في نهاية الحضانة heparinase، يتم نقل 2،0 مل من الدم إلى خرطوشة الفحص. في حالة الأنبوب MAA، فمن قبل مليئة 0.1 مل من CaCl ملي 250 2 لبدء التخثر. تم تصميم خرطوشة فحص APTT التجارية (A104) لبدء تخثر في الدم كله أنه قد تم رسمها في أنابيب تحتوي على سترات الصوديوم Vacutainer وتخثر.
  2. جهاز Hemochron يشير إلى الانتهاء من تخثر الدم ويحافظ على تخثر مرات في ثوان. الفرق في أوقات تخثر بين عينة heparinase المعالجة وعينة خط الأساس، مقسوما على تخثر منظمة الشفافية الدوليةلي للعينة خط الأساس، ينتج انخفاض في المئة من الناتج القضاء على enoxaparin. كما هو مبين أدناه، وقد تم الحصول على الارتباطات الخطية قوية للعلاقة بين انخفاض في المئة في وقت تخثر وتركيز enoxaparin في عينات من الدم الكامل ارتفعت، وكذلك لارتباط مع التركيزات المقاسة من enoxaparin بواسطة الفحص chromgenic من شى مكافحة النشاط. وأجريت فحوصات مضادة للشى التركيز enoxaparin مع مجموعة تجارية لفحص مولد اللون على مرحلتين (BIOPHEN؛ Aniara، ميسون، OH).

Representative Results

الشكل 1 يعرض نتائج العلاقات بين انخفاض في المئة في وقت تخثر بعد القضاء على enoxaparin مع heparinase لسلسلة من التركيزات ارتفعت من enoxaparin (0.2، 0.4 و 1.0 وحدة دولية لمكافحة شى لكل مل). يتم عرض النتائج على حد سواء لMAA وخراطيش فحص APTT. كما تشمل التركيزات المقاسة للenoxaparin من فحص مولد اللون المضادة للشى النشاط في الإحداثي السيني من كل قطعة.

الشكل 2 يعرض قطع من البيانات نفس الوقت انخفاض في المئة في مقابل تخثر التدبير مولد اللون المضادة للشى النشاط.

تم العثور على الارتباطات الخطية قوية، مع دلالات إحصائية عالية، لجميع العلاقات الأربعة.

الشكل 1
الشكل 1. نقاط قرارات رعاية مقاولات enoxaparin ibution إلى العصور تخثر الدم كله ارتفعت على أساس نسبة التغير (تقصير) من الوقت تخثر بعد الحضانة مع heparinase. وأضاف تركيزات enoxaparin ارتفعت إلى الدم الكامل وتوضع المضادة للقياس تركيزات البلازما شى (يعني ± SE، بين قوسين) في الإحداثي السيني من كل رسم بياني. يتم عرض جميع التغيرات في المائة في أوقات تخثر وسائل وSE، جنبا إلى جنب مع تقصير متوسط ​​الوقت تخثر في ثوان. وترتبط البيانات من المريض نفسه من قبل الخطوط المتقطعة. البيانات للمرضى الأربعة المحددة مع العلامات النجمية في رسم و(النتائج MAA) نفس المرضى الأربعة في مؤامرة B (المقايسات APTT). جميع النتائج تمثل قرارات واحد. كانت معاملات الارتباط بيرسون R = 0.869 (ع = 1.9 × 10 -5) R = 0.916 و(ع = 2.8 × 10 -5) للعلاقات مع MAA وaPTTassay، على التوالي. يرد بإذن من Inchiosa وآخرون .. 1

EEP-together.within صفحة = "دائما"> الشكل 2
الشكل 2 يتم رسم النتائج عن التغييرات في المئة في أوقات تخثر في المقايسات نقطة من الرعاية هو مبين في الأرقام 1A & B ضد تركيزات البلازما المضادة للعامل شى A النتائج MAA؛ باء، APTT المقايسات. كل واحد من النتائج المقايسات الوقت تخثر وقرارات واحدة من تركيزات شى المضادة للعامل. معاملات ارتباط بيرسون كانت R = 0.910 (ع = 2.5 × 10 -6) و r = 0.922 (ع = 2.0 × 10 -5) للعلاقات مع MAA وفحص APTT، مستنسخة على التوالي بإذن من Inchiosa وآخرون .. 1

Discussion

هذا الاختبار قد فعالية من enoxaparin بمثابة خيارا هاما لتحديد الأمان النسبي لأداء إجراء الغازية التي تحتوي على مخاطر المصاحبة للنزيف أو ورم دموي وضع. وهذا سيكون له أهمية خاصة عند النظر حقنة التخدير فوق الجافية. غالبية توصي المبادئ التوجيهية فترة انتظار 12 ساعة بين حقن enoxaparin والشروع في إجراء الغازية 5 القصور الكلوي، والسمنة، والحمل يمكن أن تؤثر على متطلبات الجرعات من 6،7 enoxaparin وبما أن يتم الانتهاء من الفحص في غضون 10. - فترة دقيقة، يمكن أن تستخدم أيضا في عيادة أو مكتب الطبيب، حيث انها ستقدم معلومات عن مدى كفاية منع تخثر الدم في المرضى الذين هم في خطر من تطوير الجلطات الدموية الوريدية. يمكن أن تقام تعديلات الجرعة فورا، حسب الحاجة.

ويمكن قياس تركيز البلازما في enoxaparin قبل مولد اللون علىssay لمدى تثبيط عامل التخثر، XA. ومع ذلك، هذا فقط تعطي تركيز، وليس على وجه التحديد فعاليته المضادة للتخثر، والتي تختلف على نطاق واسع بين المرضى الفردية. 6-8

أجريت دراسات للخروج فقط مع enoxaparin. ومع ذلك، يمكن توقع أنه يمكن تطبيق الفحص على أي LMWH التي تدهورت بفعل I. هو heparinase هو معروف بالفعل أن هذا هو الحال بالنسبة لdalteparin، وnadroparin tinzaparin 9-11 قمنا بتصميم الفحص فيما يتعلق ملامح الصك Hemochron الوقت التخثر. الصك غير مكلفة نسبيا، وكذلك فإن جمع الدم المتاح أنابيب، أمبولة heparinase، وخراطيش مقايسة لاستكمال تحليل لمريض واحد هو حوالي 15 دولار أمريكي. وبالتالي، فمن المتوقع أن تكون مناسبة لمراقبة حالة تخثر في المرافق الصحية المختلفة.

Disclosures

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

Acknowledgments

نفذت تحقيقات فقط بدعم من موارد الإدارات والمؤسسات. والمعارين جهاز التخثر (Hemochron 801) دون التزام من الشركة المصنعة. تم شراء خراطيش الفحص في تكاليفها التجزئة. تم تعديل الرقم التمهيدية في الفيديو من Sanderink، وآخرون 12 ويرد الرقم الثاني في الفيديو (دورة heparinase الوقت الهضم) بإذن من Inchiosa وآخرون .. 1

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Hepzyme Siemens AG B4240 heparinase I
"MAA" cartridge Technidyne FTK-ACT modified by kaolin removal
aPTT cartridge Technidyne A104

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Inchiosa, M. A. J. r, Pothula, S., Kubal, K., Sanchala, V. T., Navarro, I. Toward development of a point-of-care assay of enoxaparin anticoagulant activity in whole blood. J. Thromb. Thrombolysis. 32, 47-53 (2011).
  2. Despotis, G. J., Filos, K. S., Levine, V., Alsoufiev, A., Spitznagel, E. Aprotinin prolongs activated and nonactivated whole blood clotting time and potentiates the effect of heparin in vitro. Anesth. Analg. 82, 1126-1131 (1996).
  3. Pothula, S., Inchiosa, M. A. Jr, Sanchala, V. T., Sarabu, M., Inchiosa, A. S. In vitro effect of protamine excess on blood coagulation assays. Anesth Analg. 96, SCA39 (2010).
  4. Inchiosa, M. Jr, Pothula, S., Sanchala, V., Kubal, K. Detection of low plasma levels of low molecular weight heparin. Anesth Analg. 102, SCA10 (2010).
  5. Gogarten, W. The influence of new antithrombotic drugs on regional anesthesia. Curr. Opin. Anaesthesiol. 19, 545-550 (2006).
  6. Gouin-Thibault, I., Pautas, E., Siguret, V. Safety profile of different low-molecular weight heparins used at therapeutic dose. Drug Saf. 28, 333-349 (2005).
  7. Bazinet, A., Almanric, K., Brunet, C., Turcotte, I., Martineau, J., Caron, S., Blais, N., Lalonde, L. Dosage of enoxaparin among obese and renal impairment patients. Thromb. Res. 116, 41-50 (2005).
  8. El Rouby, S., Cohen, M., Gonzales, A., Hoppensteadt, D., Lee, T., Zucker, M. L., Khalid, K., LaDuca, F. M., Fareed, J. The use of a HEMOCHRON JR. HEMONOXTM point of care test in monitoring the anticoagulant effect of enoxaparin during interventional coronary procedures. J. Thromb. Thrombolysis. 21, 137-145 (2006).
  9. Yang, V. C., Bernstein, H., Cooney, C. L., Kadam, J. C., Langer, R. Removal of the anticoagulant activities of the low molecular weight heparin fractions and fragments with flavobacterial heparinase. Thromb Res. 44, 599-610 (1986).
  10. Maddineni, J., Walenga, J. M., Jeske, W. P., Hoppensteadt, D. A., Fareed, J., Wahi, R., Bick, R. L. Product individuality of commercially available low-molecular-weight heparins and their generic versions: therapeutic implications. Clinical and Applied Thrombosis/Hemostasis. 12, 267-276 (2006).
  11. Wijnhoven, T. J., van de Westerlo, E. M., Smits, N. C., Lensen, J. F., Rops, A. L., vander Vlag, J., Berden, J. H., vanden Heuvel, L. P., van Kuppevelt, T. H. Characterization of anticoagulant heparinoids by immunoprofiling. Glycoconj. J. 25, 177-185 (2008).
  12. Sanderink, G. -J. C. M., Guimart, C. G., Ozoux, M. -L., Jariwala, N. U., Shukla, U. A., Boutouyrie, B. X. Pharmacokinetics and pharmacodynamics of the prophylactic dose of enoxaparin once daily over 4 days in patients with renal impairment. Thromb. Res. 105, 225-231 (2002).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics